發(fā)布時(shí)間：2019-05-07 08:07

【摘要】：[目的]在我國,胃癌的死亡率較高,大約每小時(shí)會(huì)有20人因患胃癌去世遠(yuǎn)高于全球的平均水平。早期胃癌不易被診斷,導(dǎo)致了胃癌的死亡率較高,同時(shí)在治療方面進(jìn)展期胃癌也尚未發(fā)現(xiàn)十分有效的治療手段。因此進(jìn)一步探索胃癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,通過實(shí)驗(yàn)創(chuàng)建有理論基礎(chǔ)的、全新的診治途徑是十分必要的。近些年來被發(fā)現(xiàn)的MicroRNA (miRNA),也被稱為微小RNA,屬于非編碼RNA分子中全新的一種。就當(dāng)前的研究觀點(diǎn)來看,MicroRNA對(duì)腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生調(diào)控作用是通過近于癌基因或抑癌基因等途徑進(jìn)行的。研究者們的關(guān)注焦點(diǎn)正越來越集中在與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的miRNA分子上。本課題組在前期芯片分析篩選研究中發(fā)現(xiàn)在胃癌中有一個(gè)明顯下調(diào)的miR-195分子,既往研究顯示miRNA-195在肝癌、結(jié)直腸癌和非小細(xì)胞肺癌等腫瘤中發(fā)揮著非常重要的作用。提示miR-195很有可能通過調(diào)控靶基因來對(duì)腫瘤增殖通路進(jìn)行抑制或?qū)Φ蛲鐾愤M(jìn)行激活,進(jìn)而影響胃癌患者的療效和預(yù)后。本課題擬從胃癌中miR-195和靶基因的確定、對(duì)胃癌細(xì)胞增殖凋亡等細(xì)胞表型的影響、與化療藥物的療效和臨床預(yù)后的相關(guān)性分析等四個(gè)方面去探討miR-195與胃癌的規(guī)律性關(guān)系；為胃癌預(yù)后分層和臨床治療尋找新的靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。[方法]對(duì)轉(zhuǎn)染后microRNA-195表達(dá)不同的細(xì)胞進(jìn)行RNA提取并逆轉(zhuǎn)錄,利用Real-time PCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證胃癌中microRNA-195的表達(dá)情況；靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)microRNA-195的靶基因,并通過雙熒光素及突變實(shí)驗(yàn)、Western Blot以及Real-time PCR等方法進(jìn)行驗(yàn)證；對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞凋亡作用進(jìn)行分析,通過劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)對(duì)其侵襲及遷移作用做出分析；利用順鉑處理細(xì)胞,比較microRNA-195的不同表達(dá)對(duì)細(xì)胞增敏的影響；對(duì)29例患者的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì),分析microRNA-195表達(dá)改變對(duì)患者腫瘤的TNM分期、Borrmann分型、血管侵襲以及生存期的影響。[結(jié)果]明確驗(yàn)證了microRNA-195在胃癌中的表達(dá)呈現(xiàn)明顯下調(diào)趨勢(shì)；確認(rèn)了Akt3是microRNA-195的靶基因,在microRNA-195過表達(dá)的細(xì)胞中表達(dá)明顯降低細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)染后microRNA-195過表達(dá)的細(xì)胞的侵襲能力顯著下降,早期凋亡增加；microRNA-195的高表達(dá)對(duì)順鉑化療療效具有明顯增敏作用；PFS與OS在microRNA-195上調(diào)患者中明顯延長,其結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]microRNA-195在胃癌患者中呈明顯下調(diào)趨勢(shì),microRNA-195的過表達(dá)可通過調(diào)控靶基因Akt3表現(xiàn)出明顯的抑癌作用；microRNA-195的表達(dá)水平與胃癌患者的療效和預(yù)后明確相關(guān)。
[Abstract]:[objective] in China, the mortality rate of gastric cancer is high. About 20 people die of gastric cancer per hour, which is much higher than the global average. Early gastric cancer is not easy to be diagnosed, leading to a high mortality of gastric cancer, and the treatment of advanced gastric cancer has not found a very effective treatment. Therefore, it is necessary to explore the mechanism of carcinogenesis and development of gastric cancer and establish a new way of diagnosis and treatment through experiments. In recent years, MicroRNA (miRNA), also known as tiny RNA, is a novel non-coding RNA molecule. From the point of view of current research, the regulation of MicroRNA on the development and development of tumor is carried out by near-oncogenes or tumor suppressor genes. Researchers are increasingly focusing on miRNA molecules associated with tumorigenesis and progression. Previous studies have shown that miRNA-195 plays a very important role in hepatocellular carcinoma, colorectal cancer and non-small cell lung cancer. In previous studies, we found that there is a significant down-regulation of miR-195 molecule in gastric cancer. It is suggested that miR-195 may inhibit tumor proliferation pathway or activate apoptosis pathway by regulating target genes, which may affect the curative effect and prognosis of patients with gastric cancer. The purpose of this study is to explore the regular relationship between miR-195 and gastric cancer from four aspects: the determination of miR-195 and target genes, the effect on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells, the correlation analysis between miR-195 and the curative effect of chemotherapeutic drugs and the clinical prognosis. It provides theoretical basis for finding new targets for prognosis stratification and clinical treatment of gastric cancer. [methods] RNA was extracted from the transfected cells with different expression of microRNA-195 and reverse transcription was performed. The expression of microRNA-195 in gastric cancer was further verified by Real-time PCR method. The target gene prediction software was used to predict the target gene of microRNA-195, which was verified by difluorescein and mutation test, Western Blot and Real-time PCR. The effect of cell apoptosis was analyzed by flow cytometry, and the invasion and migration of cells were analyzed by scratch test and Transwell test. The effects of different expression of microRNA-195 on cell sensitization were compared with cisplatin treatment. The clinical data of 29 patients were analyzed, and the effects of microRNA-195 expression on TNM stage, Borrmann classification, vascular invasion and survival were analyzed. [results] the expression of microRNA-195 was clearly down-regulated in gastric cancer. It was confirmed that Akt3 was the target gene of microRNA-195, and the expression of microRNA-195 decreased significantly in the cells overexpressed by microRNA-195. The results showed that the invasive ability of the cells overexpressed by microRNA-195 decreased significantly after transfection, and the early apoptosis increased. The high expression of microRNA-195 significantly increased the chemosensitivity of cisplatin, and PFS and OS were significantly prolonged in the patients with up-regulation of microRNA-195, the results were statistically significant (P0.05). [conclusion] microRNA-195 is obviously down-regulated in patients with gastric cancer, the overexpression of microRNA-195 can inhibit cancer by regulating the target gene Akt3, and the expression level of microRNA-195 is closely related to the curative effect and prognosis of patients with gastric cancer.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2470905