發(fā)布時間：2019-05-07 08:07

【摘要】：[目的]在我國,胃癌的死亡率較高,大約每小時會有20人因患胃癌去世遠高于全球的平均水平。早期胃癌不易被診斷,導致了胃癌的死亡率較高,同時在治療方面進展期胃癌也尚未發(fā)現(xiàn)十分有效的治療手段。因此進一步探索胃癌的發(fā)生發(fā)展機制,通過實驗創(chuàng)建有理論基礎(chǔ)的、全新的診治途徑是十分必要的。近些年來被發(fā)現(xiàn)的MicroRNA (miRNA),也被稱為微小RNA,屬于非編碼RNA分子中全新的一種。就當前的研究觀點來看,MicroRNA對腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生調(diào)控作用是通過近于癌基因或抑癌基因等途徑進行的。研究者們的關(guān)注焦點正越來越集中在與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的miRNA分子上。本課題組在前期芯片分析篩選研究中發(fā)現(xiàn)在胃癌中有一個明顯下調(diào)的miR-195分子,既往研究顯示miRNA-195在肝癌、結(jié)直腸癌和非小細胞肺癌等腫瘤中發(fā)揮著非常重要的作用。提示miR-195很有可能通過調(diào)控靶基因來對腫瘤增殖通路進行抑制或?qū)Φ蛲鐾愤M行激活,進而影響胃癌患者的療效和預后。本課題擬從胃癌中miR-195和靶基因的確定、對胃癌細胞增殖凋亡等細胞表型的影響、與化療藥物的療效和臨床預后的相關(guān)性分析等四個方面去探討miR-195與胃癌的規(guī)律性關(guān)系；為胃癌預后分層和臨床治療尋找新的靶點提供理論依據(jù)。[方法]對轉(zhuǎn)染后microRNA-195表達不同的細胞進行RNA提取并逆轉(zhuǎn)錄,利用Real-time PCR方法進一步驗證胃癌中microRNA-195的表達情況；靶基因預測軟件預測microRNA-195的靶基因,并通過雙熒光素及突變實驗、Western Blot以及Real-time PCR等方法進行驗證；對細胞進行轉(zhuǎn)染,通過流式細胞術(shù)對細胞凋亡作用進行分析,通過劃痕實驗及Transwell實驗對其侵襲及遷移作用做出分析；利用順鉑處理細胞,比較microRNA-195的不同表達對細胞增敏的影響；對29例患者的臨床資料進行統(tǒng)計,分析microRNA-195表達改變對患者腫瘤的TNM分期、Borrmann分型、血管侵襲以及生存期的影響。[結(jié)果]明確驗證了microRNA-195在胃癌中的表達呈現(xiàn)明顯下調(diào)趨勢；確認了Akt3是microRNA-195的靶基因,在microRNA-195過表達的細胞中表達明顯降低細胞實驗表明,轉(zhuǎn)染后microRNA-195過表達的細胞的侵襲能力顯著下降,早期凋亡增加；microRNA-195的高表達對順鉑化療療效具有明顯增敏作用；PFS與OS在microRNA-195上調(diào)患者中明顯延長,其結(jié)果具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。[結(jié)論]microRNA-195在胃癌患者中呈明顯下調(diào)趨勢,microRNA-195的過表達可通過調(diào)控靶基因Akt3表現(xiàn)出明顯的抑癌作用；microRNA-195的表達水平與胃癌患者的療效和預后明確相關(guān)。
[Abstract]:[objective] in China, the mortality rate of gastric cancer is high. About 20 people die of gastric cancer per hour, which is much higher than the global average. Early gastric cancer is not easy to be diagnosed, leading to a high mortality of gastric cancer, and the treatment of advanced gastric cancer has not found a very effective treatment. Therefore, it is necessary to explore the mechanism of carcinogenesis and development of gastric cancer and establish a new way of diagnosis and treatment through experiments. In recent years, MicroRNA (miRNA), also known as tiny RNA, is a novel non-coding RNA molecule. From the point of view of current research, the regulation of MicroRNA on the development and development of tumor is carried out by near-oncogenes or tumor suppressor genes. Researchers are increasingly focusing on miRNA molecules associated with tumorigenesis and progression. Previous studies have shown that miRNA-195 plays a very important role in hepatocellular carcinoma, colorectal cancer and non-small cell lung cancer. In previous studies, we found that there is a significant down-regulation of miR-195 molecule in gastric cancer. It is suggested that miR-195 may inhibit tumor proliferation pathway or activate apoptosis pathway by regulating target genes, which may affect the curative effect and prognosis of patients with gastric cancer. The purpose of this study is to explore the regular relationship between miR-195 and gastric cancer from four aspects: the determination of miR-195 and target genes, the effect on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells, the correlation analysis between miR-195 and the curative effect of chemotherapeutic drugs and the clinical prognosis. It provides theoretical basis for finding new targets for prognosis stratification and clinical treatment of gastric cancer. [methods] RNA was extracted from the transfected cells with different expression of microRNA-195 and reverse transcription was performed. The expression of microRNA-195 in gastric cancer was further verified by Real-time PCR method. The target gene prediction software was used to predict the target gene of microRNA-195, which was verified by difluorescein and mutation test, Western Blot and Real-time PCR. The effect of cell apoptosis was analyzed by flow cytometry, and the invasion and migration of cells were analyzed by scratch test and Transwell test. The effects of different expression of microRNA-195 on cell sensitization were compared with cisplatin treatment. The clinical data of 29 patients were analyzed, and the effects of microRNA-195 expression on TNM stage, Borrmann classification, vascular invasion and survival were analyzed. [results] the expression of microRNA-195 was clearly down-regulated in gastric cancer. It was confirmed that Akt3 was the target gene of microRNA-195, and the expression of microRNA-195 decreased significantly in the cells overexpressed by microRNA-195. The results showed that the invasive ability of the cells overexpressed by microRNA-195 decreased significantly after transfection, and the early apoptosis increased. The high expression of microRNA-195 significantly increased the chemosensitivity of cisplatin, and PFS and OS were significantly prolonged in the patients with up-regulation of microRNA-195, the results were statistically significant (P0.05). [conclusion] microRNA-195 is obviously down-regulated in patients with gastric cancer, the overexpression of microRNA-195 can inhibit cancer by regulating the target gene Akt3, and the expression level of microRNA-195 is closely related to the curative effect and prognosis of patients with gastric cancer.
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：2470905