【摘要】：CD147作為一個(gè)多功能的跨膜糖蛋白,高表達(dá)在多種腫瘤細(xì)胞表面,促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。在肺癌和肝癌治療中,CD147特異性抗體被證明是有效的治療手段,并且已經(jīng)商品化。在免疫系統(tǒng)中,CD147被認(rèn)為是一個(gè)協(xié)同刺激分子受體,并能影響胸腺選擇的結(jié)果。我們利用T淋巴細(xì)胞上特異性敲除CD147的小鼠模型進(jìn)行研究CD147與胸腺發(fā)育之間的種種關(guān)系,發(fā)現(xiàn)在穩(wěn)定的αβT細(xì)胞譜系發(fā)育過程中,CD147是必不可少的,失去CD147將導(dǎo)致傳統(tǒng)T細(xì)胞發(fā)育受阻,促進(jìn)DN期細(xì)胞和DP期細(xì)胞向NK-like細(xì)胞轉(zhuǎn)化。CD147缺失導(dǎo)致的這種異常變化,是由于損害了Wnt信號通路,進(jìn)而使TCF1激活失能,導(dǎo)致T細(xì)胞發(fā)育關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Bcl11b的表達(dá)異常。另外,CD147抗體封閉CD147的功能或者CD147特異性敲除可以使胸腺和外周的NK細(xì)胞數(shù)量增加,應(yīng)用在小鼠黑色素瘤和原位肝癌移植瘤模型中發(fā)現(xiàn),當(dāng)CD147受到抑制,NK-like細(xì)胞的增加與抑瘤作用有很強(qiáng)的聯(lián)系。因此,在腫瘤免疫治療中,CD147可以作為一個(gè)有效的表面靶點(diǎn)去發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)因子的作用。本課題主要有三個(gè)部分組成:第一部分:CD147~(T-KO)小鼠的表型變化我們科室成功獲得了cd147的條件基因打靶小鼠(cd147t-ko),并且對它的表型進(jìn)行了簡單的分析。為了更清楚的弄明白cd147分子在t細(xì)胞發(fā)育過程中的作用,我們又重新對cd147t-ko小鼠進(jìn)行了分析和深入研究。在本部分實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)cd147t-ko小鼠的胸腺的大小和重量較同窩對照野生型小鼠的要小,其中的不同細(xì)胞類型也發(fā)生變化;而外周淋巴器官的大小、重量及其中的淋巴細(xì)胞種類并沒有明顯差異;綜合這兩部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們又分析了nk/nkt樣細(xì)胞的表型變化,發(fā)現(xiàn)nk/nkt樣細(xì)胞增加。綜合所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們明確了t淋巴細(xì)胞上cd147的敲除對t細(xì)胞發(fā)育過程中的某些階段產(chǎn)生影響,對某些細(xì)胞的產(chǎn)生和發(fā)育也有作用,這些結(jié)果從體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證了cd147對胸腺發(fā)育是必不可少的,也為我們研究cd147和t細(xì)胞發(fā)育之間的關(guān)系提供了良好的開端。第二部分:cd147影響nkt/nk-like細(xì)胞發(fā)育及其分子機(jī)制cd147的敲除阻斷了t細(xì)胞發(fā)育過程中dn3-dn4階段的發(fā)展,促進(jìn)了innate樣細(xì)胞發(fā)產(chǎn)生。那么,產(chǎn)生的過多的nk/nkt樣細(xì)胞來源于哪里?cd147影響t細(xì)胞發(fā)育的作用機(jī)制又是什么,是否與notch或者wnt信號通路相關(guān)?在本部分實(shí)驗(yàn)中,我們利用標(biāo)準(zhǔn)的t細(xì)胞體外發(fā)育培養(yǎng)體系,即op9-dl1基質(zhì)滋養(yǎng)細(xì)胞系與造血干細(xì)胞或t細(xì)胞共培養(yǎng)體系,對nk/nkt樣細(xì)胞的來源在體外進(jìn)行了分析研究,發(fā)現(xiàn)cd147敲除導(dǎo)致的nk/nkt樣細(xì)胞增加,來源于不同發(fā)育時(shí)期的t細(xì)胞譜系的重編程;并且利用此共培養(yǎng)體系,對影響t細(xì)胞發(fā)育的兩大信號通路,即notch通路和wnt通路進(jìn)行了研究,成功的弄清楚了cd147影響了wnt信號通路中tcf1的表達(dá),進(jìn)而影響了bcl11b的表達(dá)及t細(xì)胞的發(fā)育。第三部分:cd147與小鼠腫瘤免疫治療cd147作為一個(gè)廣泛且可靠的的腫瘤生物標(biāo)志物,在多種組織來源的腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)顯著增高,并且在腫瘤患者治療中與多種腫瘤的臨床預(yù)后相關(guān)。并且在我們的研究中還發(fā)現(xiàn),cd147在胸腺發(fā)育中功不可沒,并且與nk/nkt細(xì)胞的產(chǎn)生密切相關(guān),我們還深入的研究了其中的分子機(jī)制。那么,cd147與nk/nkt細(xì)胞之間的關(guān)系是否會(huì)成為cd147抗體抗腫瘤作用的另一個(gè)作用機(jī)制呢?研究這一問題必須在腫瘤模型中進(jìn)行,小鼠黑色素瘤是研究nk/nkt細(xì)胞常用的腫瘤模型,小鼠原位肝癌移植瘤是研究CD147抗體抗腫瘤的主要工具。因此,我們利用小鼠黑色素瘤模型和原位肝癌移植瘤模型,利用多種實(shí)驗(yàn)方法在瘤內(nèi)研究CD147與NK/NKT細(xì)胞之間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)CD147抗體治療可以減緩兩種腫瘤的生長速度,并且這種抑瘤作用跟NK-like細(xì)胞相關(guān)。這部分實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步拓展CD147抗體抗腫瘤作用的作用機(jī)制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.51

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本文編號：2465013