【摘要】：目的 :探討Ambra1對(duì)結(jié)直腸癌SW480和HCT15細(xì)胞增殖和遷移的影響,及其可能的作用機(jī)制。方法:將靶向Ambra1基因的siRNA轉(zhuǎn)染至結(jié)直腸癌SW480和HCT15細(xì)胞,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)Ambra1 mRNA和蛋白的表達(dá),克隆形成和實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞分析(real-time cellular analysis,RTCA)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)siRNA-Ambra1對(duì)結(jié)直腸癌SW480和HCT15細(xì)胞克隆形成和增殖能力的影響,Transwell小室法和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)siRNA-Ambra1對(duì)SW480和HCT15細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)siRNAAmbra1對(duì)SW480和HCT15細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關(guān)蛋白(N-cadherin、E-cadherin和Vimentin)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信號(hào)通路相關(guān)蛋白以及c-myc蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:siRNA-Ambra1可抑制SW480和HCT15細(xì)胞中Ambra1 mRNA和蛋白的表達(dá)(P值均0.05),促進(jìn)SW480和HCT15細(xì)胞的克隆形成、增殖、遷移和侵襲(P值均0.05)。siRNA-Ambra1可上調(diào)SW480和HCT15細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白N-cadherin的表達(dá)水平(P值均0.05),下調(diào)E-cadherin的表達(dá)水平(P值均0.05),上調(diào)ERK信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白磷酸化ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)的表達(dá)水平(P值均0.05)。結(jié)論:沉默Ambra1基因可通過(guò)EMT及ERK信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌SW480和HCT15細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Ambra1 on proliferation and migration of SW480 and HCT15 cells in colorectal cancer and its possible mechanism. Methods: siRNA targeting Ambra1 gene was transfected into SW480 and HCT15 cells. Real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot were used to detect the expression of Ambra1 mRNA and protein, clone formation and real-time unlabeled cell analysis (real-time cellular analysis,) were used to detect the expression of Ambra1 mRNA and protein. RTCA) assay was used to detect the effect of siRNA-Ambra1 on the colony formation and proliferation of SW480 and HCT15 cells in colorectal cancer. The effects of siRNA-Ambra1 on the migration and invasion of SW480 and HCT15 cells were detected by Transwell chamber assay and scratch healing assay. Detection of siRNAAmbra1-related protein (epithelial-mesenchymal transition,EMT)-related protein (N, E, E) and Vimentin), extracellular signal-regulated kinase (extracellular signal-regulated kinase,) in SW480 and HCT15 cells by Western blot ERK) signaling pathway related protein and c-myc protein expression. Results: siRNA-Ambra1 inhibited the expression of Ambra1 mRNA and protein in SW480 and HCT15 cells (P < 0.05), and promoted the clone formation and proliferation of SW480 and HCT15 cells. SiRNA-Ambra1 could up-regulate the expression of EMT-associated protein N-cadherin (P = 0.05) and down-regulate the expression of E-cadherin (P = 0.05) in SW480 and HCT15 cells. The expression level of phosphorylated ERK1/2 (phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2), a key protein in ERK signaling pathway, was up-regulated (P < 0.05). Conclusion: the silencing of Ambra1 gene can promote the proliferation, migration and invasion of SW480 and HCT15 cells through EMT and ERK signaling pathways.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬深圳沙井醫(yī)院胃腸外科;中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院結(jié)直腸外科;
【基金】：深圳市寶安區(qū)科技計(jì)劃(編號(hào):2017JD065)~~
【分類號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2449194