【摘要】：研究背景：卵巢癌是最常見(jiàn)的婦科腫瘤之一,卵巢癌患者發(fā)病較為隱匿、惡性程度高、且缺乏準(zhǔn)確的早期診斷方法,約70%的患者在確診時(shí)已屬于中晚期,其病死率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位。腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)加上術(shù)后化療是中晚期卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。在滿(mǎn)意的減瘤手術(shù)基礎(chǔ)上輔助以紫杉醇+順鉑的術(shù)后化療方案的治療策略雖然明顯改善了初治卵巢癌的預(yù)后,但晚期卵巢癌的5年生存率仍然維持在30%左右,而化療后腫瘤復(fù)發(fā)或獲得性耐藥是導(dǎo)致術(shù)后治療失敗的主要原因之一。因此研究卵巢癌的化療耐藥機(jī)制,以及尋找關(guān)鍵的分子靶點(diǎn)并實(shí)現(xiàn)化療增敏或逆轉(zhuǎn)耐藥是提高卵巢癌患者治愈率的關(guān)鍵。目前已有多項(xiàng)研究證實(shí)CXXC4通過(guò)負(fù)向調(diào)控Wnt/β-catenin和MAPK通路在腎細(xì)胞癌、胃癌的生長(zhǎng)、侵襲及凋亡等多種病理進(jìn)程中扮演著抑癌基因的角色,但其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用仍不清楚。研究目的：本研究旨在探討CXXC4在卵巢癌上皮細(xì)胞系中的表達(dá)情況,并通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或RNA干擾技術(shù)調(diào)控CXXC4在卵巢癌上皮細(xì)胞與正常卵巢上皮細(xì)胞中的表達(dá),進(jìn)而觀(guān)察調(diào)控CXXC4表達(dá)后卵巢癌上皮細(xì)胞增殖能力及對(duì)化療藥物敏感程度的改變,明確CXXC4生物學(xué)功能及在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為卵巢癌治療過(guò)程中出現(xiàn)的多藥耐藥提供一個(gè)可能的新的分子靶標(biāo)。研究方法：實(shí)驗(yàn)一：體外培養(yǎng)正常卵巢上皮IOSE80細(xì)胞以及人卵巢癌上皮SKOV3、Caov3細(xì)胞,運(yùn)用Western blot與Real-Time PCR實(shí)驗(yàn)方法學(xué)檢測(cè)CXXC4在卵巢癌細(xì)胞系中蛋白水平與基因水平表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)二：體外培養(yǎng)人卵巢癌上皮SKOV3、Caov3細(xì)胞和正常卵巢上皮IOSE80細(xì)胞,根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果,通過(guò)將外源pcDNA3-CXXC4質(zhì)粒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人卵巢癌上皮SKOV3、Caov3細(xì)胞以及siRNA-CXXC4介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人正常卵巢上皮IOSE80細(xì)胞后,運(yùn)用Western blot與Real-Time PCR實(shí)驗(yàn)方法學(xué)從蛋白水平和mRNA水平驗(yàn)證CXXC4基因過(guò)表達(dá)與沉默細(xì)胞模型構(gòu)建是否成功,待模型構(gòu)建成功后運(yùn)用CCK-8實(shí)驗(yàn)方法學(xué)進(jìn)行細(xì)胞增殖與細(xì)胞對(duì)藥物敏感性實(shí)驗(yàn)檢測(cè),根據(jù)CCK8檢測(cè)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后獲得阿霉素(ADM)、紫杉醇(TA)、順鉑(DDP)對(duì)細(xì)胞的IC50值,觀(guān)察調(diào)控CXXC4表達(dá)后細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的改變。研究結(jié)果：1.通過(guò)Western blot法與Real-Time PCR實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè),發(fā)現(xiàn)CXXC4在正常卵巢上皮IOSE80細(xì)胞與卵巢癌上皮SKOV3、Caov3細(xì)胞中均有表達(dá)。經(jīng)Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),卵巢癌上皮細(xì)胞中的CXXC4蛋白表達(dá)水平較正常卵巢上皮細(xì)胞顯著降低；經(jīng)Real-Time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),卵巢癌上皮細(xì)胞中的CXXC4基因水平也較正常卵巢上皮細(xì)胞顯著降低。2.運(yùn)用CKK8檢測(cè)發(fā)現(xiàn),卵巢癌上皮SKOV3、Caov3細(xì)胞外源轉(zhuǎn)染pcDNA3-CXXC4質(zhì)粒過(guò)表達(dá)CXXC4后,與對(duì)照組相比,pcDNA3-CXXC4轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖能力在72h后均有所下調(diào),且其對(duì)ADM、TA及DDP的IC50顯著降低,說(shuō)明對(duì)這三類(lèi)化療藥物敏感性增強(qiáng)。3.運(yùn)用CKK8檢測(cè)發(fā)現(xiàn),正常卵巢上皮IOSE80細(xì)胞使用siRNA干擾敲低CXXC4的表達(dá)后,與對(duì)照組相比,在96h后CXXC4干擾組較對(duì)照組細(xì)胞的增殖能力均有所上調(diào)；且CXXC4干擾組對(duì)ADM、TA及DDP的IC50較對(duì)照組也顯著提高,說(shuō)明對(duì)這三類(lèi)化療藥物敏感性降低。結(jié)論：CXXC4在卵巢癌細(xì)胞系中均有不同程度的表達(dá),卵巢癌上皮細(xì)胞系與正常卵巢上皮CXXC4表達(dá)的差異提示,CXXC4可能在卵巢癌在發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。當(dāng)通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)CXXC4的表達(dá)后,卵巢癌細(xì)胞系其不僅增殖能力下降,且對(duì)ADM、TA及DDP的化療敏感性顯著升高；而通過(guò)siRNA干擾降低正常卵巢上皮細(xì)胞的CXXC4的表達(dá)則可促進(jìn)細(xì)胞的增殖能力,且細(xì)胞對(duì)ADM、TA及DDP的化療療效更加耐受,這說(shuō)明卵巢癌細(xì)胞中的CXXC4的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖及化療藥物的敏感性相關(guān),提示卵巢癌患者組織中的CXXC4的表達(dá)可能與患者的預(yù)后相關(guān),外源過(guò)表達(dá)CXXC4可使卵巢癌細(xì)胞增殖能力下降且對(duì)化療更加敏感,提示其可能作為促進(jìn)化療療效的一個(gè)分子靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2437209