【摘要】：第一部分熒光定量PCR法檢測(cè)胃癌微轉(zhuǎn)移可行性研究目的：探討熒光定量PCR法檢測(cè)胃癌微轉(zhuǎn)移的敏感性和特異性。方法：1.選取5種不同分化程度的胃癌細(xì)胞株作為研究對(duì)象,將高分化細(xì)胞株AGS的表達(dá)量設(shè)定為1.0,RT-PCR法檢測(cè)不同胃癌細(xì)胞株CK20表達(dá)情況,挑選出適合建立體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型的胃癌細(xì)胞株。2.應(yīng)用10倍稀釋法和毛細(xì)管法分別將10~5、10~4、10~3、10~2、10~1、1個(gè)SGC-7901細(xì)胞株置入健康人10~8外周血單核細(xì)胞中,建成含不同SGC-7901細(xì)胞數(shù)的體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型。3.分別采集40例健康志愿者外周血各兩管,每管5ml。應(yīng)用熒光定量PCR法分別檢測(cè)健康志愿者兩管外周血中及體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型中CK20mRNA表達(dá)情況以確定其檢測(cè)胃癌微轉(zhuǎn)移敏感性和特異性。結(jié)果：1.CK20mRNA在不同分化胃癌細(xì)胞株中均有表達(dá),其表達(dá)強(qiáng)度在各胃癌細(xì)胞株之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.734,P=0.181),而在PBMN中未能檢測(cè)到CK20mRNA有效表達(dá)。在各胃癌細(xì)胞株中,SGC-7901表達(dá)相對(duì)偏低,故體外模型驗(yàn)證中選擇SGC-7901細(xì)胞。2.對(duì)SGC-7901體外微轉(zhuǎn)移模型檢測(cè)顯示,熒光定量PCR檢測(cè)CK20mRNA微轉(zhuǎn)移敏感性為10~(-7)。3.健康志愿者第一管血標(biāo)本中,CK20熒光定量PCR檢測(cè)9例為陽(yáng)性,31例陰性,假陽(yáng)性率為22.5%,而第二管血標(biāo)本中,1例陽(yáng)性,39例陰性,假陽(yáng)性率2.5%。結(jié)論：1.CK20在不同分化胃癌細(xì)胞株中均有表達(dá),而在PBMN中不表達(dá)。2.熒光定量PCR法檢測(cè)胃癌外周血微轉(zhuǎn)移的敏感性為10~(-7),特異性為97.5%,是檢測(cè)胃癌微轉(zhuǎn)移較好的檢測(cè)方法。第二部分 胃癌組織中CK20的表達(dá)及意義目的：研究胃癌組織及正常胃粘膜組織中CK20表達(dá)情況,分析胃癌組織中CK20表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系。方法：1.應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)了85例胃癌患者腫瘤組織及胃粘膜組織中CK20表達(dá)情況。2.對(duì)比CK20在胃癌組織及胃粘膜組織中表達(dá)差異。3.對(duì)胃癌組織及胃粘膜組織中CK20免疫組化積分進(jìn)行ROC檢驗(yàn),獲得CK20免疫組化積分的cut-off值。4.根據(jù)胃癌組織中CK20免疫組化積分及cut-off值將患者分為CK20高表達(dá)組和低表達(dá)組,以Kaplan-Meier生存函數(shù)分析胃癌組織中CK20表達(dá)與患者無(wú)復(fù)發(fā)生存及3年總生存的影響。結(jié)果：1.CK20在胃癌組織、胃粘膜組織均不同程度陽(yáng)性表達(dá)。2.胃癌組織中CK20免疫組化積分與胃粘膜組織中CK20免疫組化積分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.107)3.至本研究結(jié)束,所有患者隨訪3年,胃癌組織中CK20低表達(dá)者與高表達(dá)者兩組OS及DFS差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.CK20在胃癌組織、胃粘膜組織均普遍陽(yáng)性表達(dá)。2.CK20在胃癌組織及胃粘膜組織中表達(dá)無(wú)明顯差異。3.胃癌組織中CK20表達(dá)水平對(duì)患者OS及DFS無(wú)影響。4.CK20可以作為檢測(cè)胃癌外周血、胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。第三部分 胃癌患者外周血中CK20mRNA檢測(cè)及意義目的：探索應(yīng)用熒光定量PCR法檢測(cè)胃癌患者外周血中CK20mRNA表達(dá)的臨床意義。方法：1.應(yīng)用熒光定量PCR法分別檢測(cè)了85例胃癌患者、40例良性腫瘤患者手術(shù)前及手術(shù)后外周血中CK20mRNA表達(dá)情況。2.分析胃癌患者外周血中CK20mRNA陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系以及手術(shù)前后檢測(cè)結(jié)果之間差異。3.應(yīng)用Kaplan-Meier生存函數(shù),分析胃癌患者術(shù)后外周血中CK20mRNA表達(dá)對(duì)胃癌術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存及3年總生存的影響。結(jié)果：1.手術(shù)前對(duì)照組40例良性腫瘤患者外周血中CK20mRNA檢測(cè)結(jié)果均為陰性；85例原發(fā)性胃癌患者中有35例(41.2%)外周血中CK20mRNA陽(yáng)性；兩組之間差異有顯著性(x~2=22.876,P=-1.72×10~(-6))。2.胃癌患者術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移與患者年齡、性別、腫瘤位置無(wú)關(guān)(P0.05)；與腫瘤分化程度相關(guān)(P0.05),與腫瘤大小、Borrmann分型、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、外周血CEA、CA724、CA199值、脈管內(nèi)有無(wú)癌栓等病理特征密切相關(guān)(P0.01)。3.手術(shù)后第一天,對(duì)照組40例良性腫瘤患者外周血中CK20mRNA檢測(cè)結(jié)果仍均為陰性；85例原發(fā)性胃癌患者中有49例(57.6%)外周血中CK20mRNA陽(yáng)性,兩組之間差異有顯著性(x~2=37.926,P=7.34×10~(-10))。胃癌患者手術(shù)后外周血中CK20mRNA表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(P0.05)；與腫瘤大小、Borrmann分型、腫瘤浸潤(rùn)深度、胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、外周血CEA、CA724、CA199值、脈管內(nèi)有無(wú)癌栓等病理特征密切相關(guān)(P0.01)。4.手術(shù)后患者外周血CK20mRNA表達(dá)明顯高于術(shù)前,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x~2=4.612,P=0.032)。5.術(shù)后患者外周血CK20mRNA表達(dá)與患者術(shù)后OS、DFS相關(guān)(P0.05),陽(yáng)性表達(dá)者的3年總生存時(shí)間及無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間均顯著縮短。結(jié)論1.CK20mRNA在胃癌患者外周血中表達(dá)有較高的特異性。2.較多患者術(shù)前外周血存在微轉(zhuǎn)移。3.胃癌患者術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移與腫瘤體積大、分化差、Borrmann分型Ⅲ-Ⅳ型、浸潤(rùn)深度T3-T4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N2-N3、術(shù)前外周血中CEA、CA724、CA199升高、腫瘤組織脈管內(nèi)癌栓等因素相關(guān)。4.手術(shù)操作是促進(jìn)胃癌微轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素。5.術(shù)后患者外周血中CK20表達(dá)可以評(píng)估患者預(yù)后。第四部分 CK20蛋白及基因在胃周淋巴結(jié)中的表達(dá)及其臨床意義目的：通過(guò)對(duì)胃癌患者胃周淋巴結(jié)進(jìn)行微轉(zhuǎn)移檢測(cè),評(píng)價(jià)胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)方法,分析胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)因素以及微轉(zhuǎn)移對(duì)患者預(yù)后的影響。方法：1.對(duì)胃癌患者胃周淋巴結(jié)進(jìn)行HE常規(guī)檢查、CK20免疫組化及CK20mRNA熒光定量PCR檢測(cè)。2.應(yīng)用Kaplan-Meier生存函數(shù),分析各種檢測(cè)方式證實(shí)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)患者預(yù)后的影響。3.分析各臨床病理參數(shù)與胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移之間關(guān)系。4.建立COX風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型,分析基線資料及臨床病理資料對(duì)胃癌患者預(yù)后的影響。結(jié)果：1.HE染色轉(zhuǎn)移陽(yáng)性淋巴結(jié)行免疫組化及熒光定量PCR檢測(cè)均為陽(yáng)性。2.HE染色陰性淋巴結(jié)行CK20免疫組化法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有28枚/16例陽(yáng)性；CK20mRNA熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有137枚/34例胃周淋巴結(jié)陽(yáng)性,并且免疫組化檢測(cè)呈陽(yáng)性的熒光定量PCR法檢測(cè)同時(shí)均為陽(yáng)性。在胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)中,熒光定量PCR法靈敏度更高,與HE染色法比較采用x~2檢驗(yàn),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.經(jīng)免疫組化法和熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)有137枚/34例胃周淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,導(dǎo)致22例患者的臨床病理分期發(fā)生相應(yīng)改變,使得胃癌臨床病理分期更趨準(zhǔn)確。4.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與患者年齡、性別、腫瘤位置、HE檢查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無(wú)關(guān)(P0.05)；與腫瘤大小、Borrmann分型、外周血CEA、CA724、CA199值、外周血微轉(zhuǎn)移情況相關(guān)(P0.05)；與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤脈管內(nèi)有無(wú)癌栓等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)(P0.01)。5.存在胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移的患者3年總生存時(shí)間及無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間明顯低于無(wú)微轉(zhuǎn)移的患者(P0.05)。6.COX模型統(tǒng)計(jì)分析顯示腫瘤分化、Bormann分型、浸潤(rùn)深度、脈管內(nèi)癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及微轉(zhuǎn)移、外周血微轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素。結(jié)論：1.熒光定量PCR檢測(cè)CK20mRNA表達(dá),是發(fā)現(xiàn)胃癌胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的靈敏檢測(cè)方法。2.通過(guò)胃周淋巴微轉(zhuǎn)移檢測(cè)可以整體提高胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率,為患者提供更準(zhǔn)確的術(shù)后病理分期。3.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后有明顯相關(guān)性,微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的患者具有比較高的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)機(jī)率和死亡率。4.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是胃癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素,是評(píng)估胃癌預(yù)后比較獨(dú)立的檢測(cè)指標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 戴成雨;胃癌20例誤診分析[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2002年03期
2 李秋波,陶智慧,胡奎,韓智,馬勇;胃癌術(shù)前區(qū)域動(dòng)脈灌注化療加手術(shù)聯(lián)合治療的療效觀察(附24例)[J];航空航天醫(yī)藥;2003年03期
3 倪海濱,毛振彪,黃介飛,肖明兵,季穎林,張彥亮,冒海蕾;血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1與胃癌臨床意義的研究[J];南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期
4 邢亞莉;姚春霞;唐曉君;劉春梅;;彩超在胃癌診斷中的價(jià)值[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2007年17期
5 ;日本專(zhuān)家用新技術(shù)提高胃癌診斷準(zhǔn)確率[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2009年02期
6 ;新技術(shù)能提高胃癌診斷準(zhǔn)確率[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2009年07期
7 高春光;;胃癌患者的臨床治療體會(huì)[J];中國(guó)民族民間醫(yī)藥;2009年14期
8 高瑞鳳;朱曄;劉興姣;;37例進(jìn)展期胃癌的超聲分析[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2010年25期
9 姜可偉;;規(guī)范全球第二大致死率疾病的診斷——《胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)》解讀[J];中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理;2010年04期
10 張常華;何裕隆;詹文華;吳英;;多學(xué)科小組與胃癌診治[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年06期
相關(guān)會(huì)議論文 前10條
1 武淑蘭;魏志杰;殷宇明;;胃癌致微血管病性溶血性貧血的診斷[A];第十一屆全國(guó)紅細(xì)胞疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年
2 丁濤;;超聲在診斷胃癌中的應(yīng)用[A];中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)肌肉骨骼超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2011年
3 陳曉康;呂國(guó)榮;蘇若瑟;;應(yīng)用彩色能量多普勒血流顯像對(duì)胃癌的診斷價(jià)值[A];慶祝中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)成立20周年——第八屆全國(guó)超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年
4 于吉人;;胃癌的術(shù)前系統(tǒng)評(píng)估[A];2004年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年
5 楊軍樂(lè);寧文德;董季平;徐敏;;多層螺旋CT在胃癌診斷中的應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年
6 張曉鵬;;胃癌磁共振成像研究進(jìn)展[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議教育集[C];2006年
7 張麗紅;常維平;黃賢會(huì);;螺旋CT在特殊部位胃癌診斷中的應(yīng)用[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)放射醫(yī)師分會(huì)首屆會(huì)員大會(huì)暨第四屆醫(yī)學(xué)影像山東論壇、山東省第16次放射學(xué)會(huì)議暨山東省第14屆醫(yī)學(xué)影像學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年
8 陳靜;;彩色多普勒超聲檢查在胃癌的應(yīng)用[A];中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)腹部超聲學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年
9 劉池波;梁勇;王海寶;楊林軍;梁津逍;;胃癌患者中血清淀粉樣蛋白A的測(cè)定及臨床意義[A];第二屆中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)改革會(huì)議論文集[C];2008年
10 吳厚賓;;腹腔鏡在胃癌診治中的應(yīng)用進(jìn)展(綜述)[A];江西省第二屆胃腸外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨江西省第十二次中西醫(yī)結(jié)合普通外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年
相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條
1 錢(qián)錚;新技術(shù)能提高胃癌診斷準(zhǔn)確率[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年
2 記者 陳青;胃癌患者從“存活”邁向“樂(lè)活”[N];文匯報(bào);2010年
3 李楠;胃癌診斷敏感性從不足30%提高到57.4%[N];健康報(bào);2008年
4 通訊員 李楠;胃癌“轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)”研究見(jiàn)成效[N];上�？萍紙�(bào);2008年
5 記者 楚燕 通訊員 那偉 高樹(shù)灼;廈門(mén)胃癌研究達(dá)國(guó)際領(lǐng)先水平[N];廈門(mén)日?qǐng)?bào);2009年
6 胡德榮;新型胃癌分子標(biāo)志物研究獲突破[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年
7 本報(bào)記者 周芳;改善飲食習(xí)慣 早發(fā)現(xiàn)早治療[N];吉林日?qǐng)?bào);2006年
8 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院 楊燕貽;胃癌防治有哪些錯(cuò)誤觀念[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年
9 特約記者 程守勤;胃癌診斷又有新方法[N];家庭醫(yī)生報(bào);2003年
10 重慶萬(wàn)州 黃瓊;胃癌的手術(shù)治療[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 孫大志;基于microRNA 21的調(diào)控作用探討從痰論治胃癌的作用機(jī)制[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2012年
2 陳悅之;TNFAIP8在胃癌中的表達(dá)和對(duì)調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞增殖，影響侵襲及遷移中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年
3 殷繼鵬;腫瘤血管靶向肽GX1用于胃癌的分子影像研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年
4 蔡習(xí)強(qiáng);TFEB介導(dǎo)的自噬在胃癌耐藥中的作用及其機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年
5 趙曉迪;microRNA-7調(diào)控胃癌惡性生物學(xué)行為的功能與分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年
6 尚華;MicroRNA-125a在胃癌中表達(dá)水平的研究及其臨床意義[D];山東大學(xué);2015年
7 關(guān)中正;TGF-β在胃癌免疫逃逸中作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年
8 黃勇;AEG-1/MT qDH、NF-κB、MMP-9在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性的研究[D];山東大學(xué);2015年
9 謝黎明;胃癌中miR-124表達(dá)的意義及作用機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2015年
10 劉佳寧;SOX9和CEACAM1在胃癌組織中表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響[D];山東大學(xué);2015年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 徐海蓉;胃癌危險(xiǎn)因素的流行病學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2002年
2 張軍利;p27、PTEN與VEGF蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及其意義[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年
3 馬春婷;胃癌與幽門(mén)螺桿菌的相關(guān)性研究[D];石河子大學(xué);2015年
4 王士杰;腹腔鏡手術(shù)治療進(jìn)展期遠(yuǎn)端胃癌的臨床療效及患者術(shù)后隨訪生存質(zhì)量研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年
5 李浩;胃癌血清蛋白標(biāo)記物的篩選與鑒定[D];鄭州大學(xué);2015年
6 王巍;胃癌患者血液樣品的光譜分析[D];鄭州大學(xué);2015年
7 李玉博;高場(chǎng)磁共振在胃癌術(shù)前T分期與分級(jí)的價(jià)值[D];鄭州大學(xué);2015年
8 張?zhí)K鈺;SOX4和P53蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及貞芪扶正膠囊對(duì)胃癌術(shù)后輔助治療作用的觀察[D];蘭州大學(xué);2015年
9 黎進(jìn);基于超高效液相色譜—四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用的胃癌患者血漿代謝組學(xué)分析[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2016年
10 羅金龍;胎盤(pán)生長(zhǎng)因子在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年
，
本文編號(hào)：
2435023
