【摘要】：第一部分熒光定量PCR法檢測胃癌微轉(zhuǎn)移可行性研究目的：探討熒光定量PCR法檢測胃癌微轉(zhuǎn)移的敏感性和特異性。方法：1.選取5種不同分化程度的胃癌細胞株作為研究對象,將高分化細胞株AGS的表達量設(shè)定為1.0,RT-PCR法檢測不同胃癌細胞株CK20表達情況,挑選出適合建立體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型的胃癌細胞株。2.應(yīng)用10倍稀釋法和毛細管法分別將10~5、10~4、10~3、10~2、10~1、1個SGC-7901細胞株置入健康人10~8外周血單核細胞中,建成含不同SGC-7901細胞數(shù)的體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型。3.分別采集40例健康志愿者外周血各兩管,每管5ml。應(yīng)用熒光定量PCR法分別檢測健康志愿者兩管外周血中及體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型中CK20mRNA表達情況以確定其檢測胃癌微轉(zhuǎn)移敏感性和特異性。結(jié)果：1.CK20mRNA在不同分化胃癌細胞株中均有表達,其表達強度在各胃癌細胞株之間差異無統(tǒng)計學意義(t=1.734,P=0.181),而在PBMN中未能檢測到CK20mRNA有效表達。在各胃癌細胞株中,SGC-7901表達相對偏低,故體外模型驗證中選擇SGC-7901細胞。2.對SGC-7901體外微轉(zhuǎn)移模型檢測顯示,熒光定量PCR檢測CK20mRNA微轉(zhuǎn)移敏感性為10~(-7)。3.健康志愿者第一管血標本中,CK20熒光定量PCR檢測9例為陽性,31例陰性,假陽性率為22.5%,而第二管血標本中,1例陽性,39例陰性,假陽性率2.5%。結(jié)論：1.CK20在不同分化胃癌細胞株中均有表達,而在PBMN中不表達。2.熒光定量PCR法檢測胃癌外周血微轉(zhuǎn)移的敏感性為10~(-7),特異性為97.5%,是檢測胃癌微轉(zhuǎn)移較好的檢測方法。第二部分 胃癌組織中CK20的表達及意義目的：研究胃癌組織及正常胃粘膜組織中CK20表達情況,分析胃癌組織中CK20表達與患者預(yù)后關(guān)系。方法：1.應(yīng)用免疫組化法檢測了85例胃癌患者腫瘤組織及胃粘膜組織中CK20表達情況。2.對比CK20在胃癌組織及胃粘膜組織中表達差異。3.對胃癌組織及胃粘膜組織中CK20免疫組化積分進行ROC檢驗,獲得CK20免疫組化積分的cut-off值。4.根據(jù)胃癌組織中CK20免疫組化積分及cut-off值將患者分為CK20高表達組和低表達組,以Kaplan-Meier生存函數(shù)分析胃癌組織中CK20表達與患者無復(fù)發(fā)生存及3年總生存的影響。結(jié)果：1.CK20在胃癌組織、胃粘膜組織均不同程度陽性表達。2.胃癌組織中CK20免疫組化積分與胃粘膜組織中CK20免疫組化積分差異無統(tǒng)計學意義(P=0.107)3.至本研究結(jié)束,所有患者隨訪3年,胃癌組織中CK20低表達者與高表達者兩組OS及DFS差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論：1.CK20在胃癌組織、胃粘膜組織均普遍陽性表達。2.CK20在胃癌組織及胃粘膜組織中表達無明顯差異。3.胃癌組織中CK20表達水平對患者OS及DFS無影響。4.CK20可以作為檢測胃癌外周血、胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的標記物。第三部分 胃癌患者外周血中CK20mRNA檢測及意義目的：探索應(yīng)用熒光定量PCR法檢測胃癌患者外周血中CK20mRNA表達的臨床意義。方法：1.應(yīng)用熒光定量PCR法分別檢測了85例胃癌患者、40例良性腫瘤患者手術(shù)前及手術(shù)后外周血中CK20mRNA表達情況。2.分析胃癌患者外周血中CK20mRNA陽性表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系以及手術(shù)前后檢測結(jié)果之間差異。3.應(yīng)用Kaplan-Meier生存函數(shù),分析胃癌患者術(shù)后外周血中CK20mRNA表達對胃癌術(shù)后無復(fù)發(fā)生存及3年總生存的影響。結(jié)果：1.手術(shù)前對照組40例良性腫瘤患者外周血中CK20mRNA檢測結(jié)果均為陰性；85例原發(fā)性胃癌患者中有35例(41.2%)外周血中CK20mRNA陽性；兩組之間差異有顯著性(x~2=22.876,P=-1.72×10~(-6))。2.胃癌患者術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移與患者年齡、性別、腫瘤位置無關(guān)(P0.05)；與腫瘤分化程度相關(guān)(P0.05),與腫瘤大小、Borrmann分型、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、外周血CEA、CA724、CA199值、脈管內(nèi)有無癌栓等病理特征密切相關(guān)(P0.01)。3.手術(shù)后第一天,對照組40例良性腫瘤患者外周血中CK20mRNA檢測結(jié)果仍均為陰性；85例原發(fā)性胃癌患者中有49例(57.6%)外周血中CK20mRNA陽性,兩組之間差異有顯著性(x~2=37.926,P=7.34×10~(-10))。胃癌患者手術(shù)后外周血中CK20mRNA表達與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤分化程度無關(guān)(P0.05)；與腫瘤大小、Borrmann分型、腫瘤浸潤深度、胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、外周血CEA、CA724、CA199值、脈管內(nèi)有無癌栓等病理特征密切相關(guān)(P0.01)。4.手術(shù)后患者外周血CK20mRNA表達明顯高于術(shù)前,兩者差異有統(tǒng)計學意義(x~2=4.612,P=0.032)。5.術(shù)后患者外周血CK20mRNA表達與患者術(shù)后OS、DFS相關(guān)(P0.05),陽性表達者的3年總生存時間及無復(fù)發(fā)生存時間均顯著縮短。結(jié)論1.CK20mRNA在胃癌患者外周血中表達有較高的特異性。2.較多患者術(shù)前外周血存在微轉(zhuǎn)移。3.胃癌患者術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移與腫瘤體積大、分化差、Borrmann分型Ⅲ-Ⅳ型、浸潤深度T3-T4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N2-N3、術(shù)前外周血中CEA、CA724、CA199升高、腫瘤組織脈管內(nèi)癌栓等因素相關(guān)。4.手術(shù)操作是促進胃癌微轉(zhuǎn)移的一個重要因素。5.術(shù)后患者外周血中CK20表達可以評估患者預(yù)后。第四部分 CK20蛋白及基因在胃周淋巴結(jié)中的表達及其臨床意義目的：通過對胃癌患者胃周淋巴結(jié)進行微轉(zhuǎn)移檢測,評價胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測方法,分析胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移危險因素以及微轉(zhuǎn)移對患者預(yù)后的影響。方法：1.對胃癌患者胃周淋巴結(jié)進行HE常規(guī)檢查、CK20免疫組化及CK20mRNA熒光定量PCR檢測。2.應(yīng)用Kaplan-Meier生存函數(shù),分析各種檢測方式證實的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對患者預(yù)后的影響。3.分析各臨床病理參數(shù)與胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移之間關(guān)系。4.建立COX風險預(yù)測模型,分析基線資料及臨床病理資料對胃癌患者預(yù)后的影響。結(jié)果：1.HE染色轉(zhuǎn)移陽性淋巴結(jié)行免疫組化及熒光定量PCR檢測均為陽性。2.HE染色陰性淋巴結(jié)行CK20免疫組化法檢測發(fā)現(xiàn)有28枚/16例陽性；CK20mRNA熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)有137枚/34例胃周淋巴結(jié)陽性,并且免疫組化檢測呈陽性的熒光定量PCR法檢測同時均為陽性。在胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測中,熒光定量PCR法靈敏度更高,與HE染色法比較采用x~2檢驗,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.經(jīng)免疫組化法和熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)有137枚/34例胃周淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,導致22例患者的臨床病理分期發(fā)生相應(yīng)改變,使得胃癌臨床病理分期更趨準確。4.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與患者年齡、性別、腫瘤位置、HE檢查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)(P0.05)；與腫瘤大小、Borrmann分型、外周血CEA、CA724、CA199值、外周血微轉(zhuǎn)移情況相關(guān)(P0.05)；與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、腫瘤脈管內(nèi)有無癌栓等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)(P0.01)。5.存在胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移的患者3年總生存時間及無復(fù)發(fā)生存時間明顯低于無微轉(zhuǎn)移的患者(P0.05)。6.COX模型統(tǒng)計分析顯示腫瘤分化、Bormann分型、浸潤深度、脈管內(nèi)癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及微轉(zhuǎn)移、外周血微轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的危險因素。結(jié)論：1.熒光定量PCR檢測CK20mRNA表達,是發(fā)現(xiàn)胃癌胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的靈敏檢測方法。2.通過胃周淋巴微轉(zhuǎn)移檢測可以整體提高胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率,為患者提供更準確的術(shù)后病理分期。3.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后有明顯相關(guān)性,微轉(zhuǎn)移陽性的患者具有比較高的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)機率和死亡率。4.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是胃癌預(yù)后的危險因素,是評估胃癌預(yù)后比較獨立的檢測指標。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 戴成雨;胃癌20例誤診分析[J];實用醫(yī)學雜志;2002年03期

2 李秋波,陶智慧,胡奎,韓智,馬勇;胃癌術(shù)前區(qū)域動脈灌注化療加手術(shù)聯(lián)合治療的療效觀察(附24例)[J];航空航天醫(yī)藥;2003年03期

3 倪海濱,毛振彪,黃介飛,肖明兵,季穎林,張彥亮,冒海蕾;血清可溶性細胞間粘附分子-1與胃癌臨床意義的研究[J];南通醫(yī)學院學報;2003年01期

4 邢亞莉;姚春霞;唐曉君;劉春梅;;彩超在胃癌診斷中的價值[J];基層醫(yī)學論壇;2007年17期

5 ;日本專家用新技術(shù)提高胃癌診斷準確率[J];生物醫(yī)學工程與臨床;2009年02期

6 ;新技術(shù)能提高胃癌診斷準確率[J];中華中醫(yī)藥學刊;2009年07期

7 高春光;;胃癌患者的臨床治療體會[J];中國民族民間醫(yī)藥;2009年14期

8 高瑞鳳;朱曄;劉興姣;;37例進展期胃癌的超聲分析[J];中國實用醫(yī)藥;2010年25期

9 姜可偉;;規(guī)范全球第二大致死率疾病的診斷——《胃癌診斷標準》解讀[J];中國衛(wèi)生標準管理;2010年04期

10 張常華;何裕隆;詹文華;吳英;;多學科小組與胃癌診治[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 武淑蘭;魏志杰;殷宇明;;胃癌致微血管病性溶血性貧血的診斷[A];第十一屆全國紅細胞疾病學術(shù)會議暨學習班論文匯編[C];2007年

2 丁濤;;超聲在診斷胃癌中的應(yīng)用[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第三屆全國肌肉骨骼超聲醫(yī)學學術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

3 陳曉康;呂國榮;蘇若瑟;;應(yīng)用彩色能量多普勒血流顯像對胃癌的診斷價值[A];慶祝中國超聲醫(yī)學工程學會成立20周年——第八屆全國超聲醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

4 于吉人;;胃癌的術(shù)前系統(tǒng)評估[A];2004年浙江省外科學學術(shù)年會論文匯編[C];2004年

5 楊軍樂;寧文德;董季平;徐敏;;多層螺旋CT在胃癌診斷中的應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學會第十三屆全國放射學大會論文匯編（下冊）[C];2006年

6 張曉鵬;;胃癌磁共振成像研究進展[A];第四屆中國腫瘤學術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張麗紅;常維平;黃賢會;;螺旋CT在特殊部位胃癌診斷中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會放射醫(yī)師分會首屆會員大會暨第四屆醫(yī)學影像山東論壇、山東省第16次放射學會議暨山東省第14屆醫(yī)學影像學學術(shù)研討會論文集[C];2007年

8 陳靜;;彩色多普勒超聲檢查在胃癌的應(yīng)用[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第七屆全國腹部超聲學術(shù)會議學術(shù)論文匯編[C];2007年

9 劉池波;梁勇;王海寶;楊林軍;梁津逍;;胃癌患者中血清淀粉樣蛋白A的測定及臨床意義[A];第二屆中國醫(yī)學細胞生物學學術(shù)大會暨細胞生物學教學改革會議論文集[C];2008年

10 吳厚賓;;腹腔鏡在胃癌診治中的應(yīng)用進展(綜述)[A];江西省第二屆胃腸外科學術(shù)會議暨江西省第十二次中西醫(yī)結(jié)合普通外科學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 錢錚;新技術(shù)能提高胃癌診斷準確率[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

2 記者 陳青;胃癌患者從“存活”邁向“樂活”[N];文匯報;2010年

3 李楠;胃癌診斷敏感性從不足30%提高到57.4%[N];健康報;2008年

4 通訊員 李楠;胃癌“轉(zhuǎn)化醫(yī)學”研究見成效[N];上海科技報;2008年

5 記者 楚燕　通訊員 那偉 高樹灼;廈門胃癌研究達國際領(lǐng)先水平[N];廈門日報;2009年

6 胡德榮;新型胃癌分子標志物研究獲突破[N];中國醫(yī)藥報;2010年

7 本報記者 周芳;改善飲食習慣 早發(fā)現(xiàn)早治療[N];吉林日報;2006年

8 中南大學湘雅二醫(yī)院 楊燕貽;胃癌防治有哪些錯誤觀念[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

9 特約記者 程守勤;胃癌診斷又有新方法[N];家庭醫(yī)生報;2003年

10 重慶萬州 黃瓊;胃癌的手術(shù)治療[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 孫大志;基于microRNA 21的調(diào)控作用探討從痰論治胃癌的作用機制[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2012年

2 陳悅之;TNFAIP8在胃癌中的表達和對調(diào)節(jié)胃癌細胞增殖，影響侵襲及遷移中的作用研究[D];山東大學;2015年

3 殷繼鵬;腫瘤血管靶向肽GX1用于胃癌的分子影像研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

4 蔡習強;TFEB介導的自噬在胃癌耐藥中的作用及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

5 趙曉迪;microRNA-7調(diào)控胃癌惡性生物學行為的功能與分子機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

6 尚華;MicroRNA-125a在胃癌中表達水平的研究及其臨床意義[D];山東大學;2015年

7 關(guān)中正;TGF-β在胃癌免疫逃逸中作用及機制研究[D];山東大學;2015年

8 黃勇;AEG-1/MT qDH、NF-κB、MMP-9在胃癌中的表達及相關(guān)性的研究[D];山東大學;2015年

9 謝黎明;胃癌中miR-124表達的意義及作用機制研究[D];南華大學;2015年

10 劉佳寧;SOX9和CEACAM1在胃癌組織中表達及其對胃癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響[D];山東大學;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 徐海蓉;胃癌危險因素的流行病學研究[D];南京醫(yī)科大學;2002年

2 張軍利;p27、PTEN與VEGF蛋白在胃癌組織中的表達及其意義[D];泰山醫(yī)學院;2014年

3 馬春婷;胃癌與幽門螺桿菌的相關(guān)性研究[D];石河子大學;2015年

4 王士杰;腹腔鏡手術(shù)治療進展期遠端胃癌的臨床療效及患者術(shù)后隨訪生存質(zhì)量研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

5 李浩;胃癌血清蛋白標記物的篩選與鑒定[D];鄭州大學;2015年

6 王巍;胃癌患者血液樣品的光譜分析[D];鄭州大學;2015年

7 李玉博;高場磁共振在胃癌術(shù)前T分期與分級的價值[D];鄭州大學;2015年

8 張?zhí)K鈺;SOX4和P53蛋白在胃癌組織中的表達及貞芪扶正膠囊對胃癌術(shù)后輔助治療作用的觀察[D];蘭州大學;2015年

9 黎進;基于超高效液相色譜—四級桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用的胃癌患者血漿代謝組學分析[D];浙江中醫(yī)藥大學;2016年

10 羅金龍;胎盤生長因子在胃癌中的表達及臨床意義[D];四川醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：2435023