【摘要】：研究背景在許多國(guó)家,尤其是中非、西非、東亞和東南亞等非洲和亞洲國(guó)家,肝細(xì)胞肝癌(Hepatocelluar carcinoma,HCC)是導(dǎo)致癌癥死亡的一個(gè)主要原因。通常,肝癌病人確診時(shí)已進(jìn)入進(jìn)展期,且治療后5年復(fù)發(fā)率高達(dá)30-40%。進(jìn)展期肝癌病人中位生存期僅有6-8個(gè)月,而且療效不佳。常規(guī)化療和放療對(duì)HCC無(wú)效。近年來(lái),一系列血管介入治療被應(yīng)用于治療進(jìn)展期肝癌病人,但病人中位生存期并未顯著延長(zhǎng)。因此,需要采用新的治療策略以改善HCC病人預(yù)后。研究表明,一些中藥具有抗癌作用。有報(bào)道稱(chēng)蟾酥、黃連素、漢防己堿等中藥能抑制HCC細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡。葛根作為中藥被廣泛應(yīng)用,在東方國(guó)家也被作為食材使用。葛根含有大量異黃酮,包括葛根素、大豆黃素、大豆苷和染料木黃酮。這些異黃酮具有抗過(guò)敏、抗炎、抗病毒、抗氧化和抗腫瘤等多種功效。葛根素,化學(xué)名為4-7-二羥基-8-β-D-葡萄糖基異黃酮(C21H20O9),是從中藥葛根中提取的主要有效成分之一。葛根素可能對(duì)治療內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、肝纖維化、神經(jīng)中毒性損傷、骨損傷、酒精性肝損傷等多種疾病有效。而且,許多研究顯示葛根素在動(dòng)物體內(nèi)具有抗腫瘤作用；體外腫瘤細(xì)胞系研究表明葛根素可抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖并能誘導(dǎo)其凋亡。一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),葛根素可抑制HS578T、MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng),該作用具有劑量依賴(lài)性特點(diǎn)。來(lái)自細(xì)胞周期分布和凋亡檢測(cè)研究的結(jié)果顯示葛根素通過(guò)Caspase-3途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并使細(xì)胞停滯于G2/M期與此類(lèi)似,有研究表明應(yīng)用低劑量葛根素處理后RL95-2子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi)c-jun表達(dá)下調(diào),導(dǎo)致芳香化酶P450表達(dá)水平下降,P450高表達(dá)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)顯著減慢。另外,葛根素還通過(guò)使細(xì)胞周期停滯于S期或誘導(dǎo)其凋亡,從而抑制急性髓性白血病和急性早幼粒白血病細(xì)胞增殖。近來(lái),新研發(fā)出的葛根素納米懸浮物通過(guò)降低細(xì)胞活力、誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變顯示出更強(qiáng)的抗增殖特性。葛根素納米懸浮物通過(guò)誘導(dǎo)早期凋亡從而抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29生長(zhǎng)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,與游離葛根素相比,葛根素納米懸浮物具有更好的機(jī)體耐受性和更強(qiáng)的抗腫瘤活性。進(jìn)一步研究還揭示葛根素對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移具有抑制作用。然而,葛根素對(duì)HCC的抗癌作用尚無(wú)報(bào)道。因此,本研究擬探討葛根素對(duì)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721的抗癌作用及其機(jī)制,為肝癌治療提供新的藥物。研究目的1.檢測(cè)應(yīng)用葛根素處理后SMMC-7721細(xì)胞活力和凋亡的變化,探討葛根素對(duì)肝癌細(xì)胞的作用。2.測(cè)定經(jīng)不同濃度葛根素處理后線粒體膜電位和細(xì)胞活性氧的變化,闡釋葛根素對(duì)肝癌細(xì)胞代謝狀態(tài)的影響。3.檢測(cè)經(jīng)不同濃度葛根素處理后SMMC-7721細(xì)胞caspase3/8/9和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)mRNA和蛋白質(zhì)水平的變化,闡明葛根素對(duì)肝癌細(xì)胞作用的分子機(jī)制。4.檢測(cè)應(yīng)用葛根素處理不同時(shí)間后SMMC-7721田胞Akt、P38、ERK1和JNK通路蛋白磷酸化水平變化,探討葛根素對(duì)肝癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的影響。材料與方法細(xì)胞系。人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞活力測(cè)定：MTT方法測(cè)定應(yīng)用不同濃度葛根素處理12h,24h和48h后SMMC-7721細(xì)胞活力變化。應(yīng)用自動(dòng)化微孔板讀數(shù)器測(cè)定490nm吸光度,以DMSO作為空白對(duì)照。所有樣本制成5份,至少重復(fù)測(cè)定3次。細(xì)胞凋亡分析。應(yīng)用Annexin-V FITC凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)應(yīng)用不同濃度葛根素(0,500,1000,1500μg/m1)處理12h或24h后細(xì)胞凋亡,應(yīng)用FACSCAN流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)。Hoechst染色。在Leica DM 500B熒光顯微鏡下觀察用不同濃度葛根素(0,500,1000,1500μg/ml)處理12h或24h后凋亡SMMC-7721細(xì)胞發(fā)生的核濃縮和核碎片。線粒體膜電位(MMP)測(cè)定。應(yīng)用Rhodamine 123染料測(cè)定經(jīng)不同濃度葛根素(0,500,1000,1500μg/ml)處理24h后線粒體膜電位變化。應(yīng)用BD FACScan進(jìn)行流式細(xì)胞分析�；钚匝�(ROS)測(cè)定。參考文獻(xiàn)應(yīng)用流式細(xì)胞分析測(cè)定暴露于不同濃度葛根素(0,500,1000,1500μg/ml)12h后細(xì)胞ROS。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(490nm激發(fā),520nm發(fā)射)測(cè)定活性氧熒光強(qiáng)度。qPCR測(cè)定。分別應(yīng)用0,30 (IC25),500 (IC50)或2000μg/ml(IC75)葛根素處理SMMC-7721 12h。應(yīng)用TRIzo1提取處理后的細(xì)胞總RNA。取2μg總RNA應(yīng)用試劑盒first strand cDNA kit按照說(shuō)明進(jìn)行RT-PCR。應(yīng)用試劑盒SYBR Premix Ex Taq kit在ABI 7300熱循環(huán)儀中首先在95℃進(jìn)行預(yù)變性10分鐘,接著95℃15秒,60℃ 45秒,共進(jìn)行40循環(huán)擴(kuò)增。各基因特異引物序列分別為；Caspase-3,5'-AACTGGACTGTGGCATTGAG-3'和5'-ACAAAGCGACTGGATGAACC-3'(擴(kuò)增產(chǎn)物161 bp); caspase-8, 5'-CTGGGAGAAGGAAAGTTG-3'和 5'-TTGGAGAGTCCGAGATTG-3'(擴(kuò)增產(chǎn)物184 bp); caspase-9,5'-GGAAGAGGGACAGATGAATG-3'和5'-TTGTTTGGCACCACTCAG-3'(擴(kuò)增產(chǎn)物 242 bp)； AIF, 5-GCTACAAGCACGCTCTAACATC-3和5'-CAGCCAATCTTCCACTCACAAC-3'(擴(kuò)增產(chǎn)物119 bp)；GAPDH,5'-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3'和 5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3'(擴(kuò)增產(chǎn)物110 bp)。應(yīng)用2-AACT方法對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相對(duì)定量分析,以GAPDH作為內(nèi)參照對(duì)所有樣本基因表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。Western blot分析。應(yīng)用500μg/ml葛根素分別處理1h,3h和6h。應(yīng)用常規(guī)方法制備細(xì)胞裂解物,再用10%SDS-PAGE分離得到20gg蛋白樣本,轉(zhuǎn)至PVDF膜,應(yīng)用含5%低脂牛奶和0.1% Tween-20緩沖液阻斷后,再與小鼠抗人AKT1, p-AKT, P38, p-P38,ERK1, p-ERK1,JNK, p-JNK, AIF和 caspase-3,8,9單克隆抗體(一抗)共孵育。然后與�？剐∈驣gG(二抗)共孵育。最后應(yīng)用化學(xué)發(fā)光液顯影,拍照；應(yīng)用小鼠抗GAPDH單克隆抗體評(píng)估蛋白遷移,應(yīng)用Lab Works Image Acquisition and Analysis Software version4.5對(duì)蛋白條帶進(jìn)行定量分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件(SPSS, Inc., Chicago, IL, USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間差異應(yīng)用t檢驗(yàn),多組間差異應(yīng)用單因素方差分析。所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)。設(shè)定P0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果應(yīng)用葛根素處理后SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制：分別用100,250,500,1000,1500和2000μg/ml葛根素處理細(xì)胞12小時(shí)后,細(xì)胞活力與對(duì)照組相比出現(xiàn)顯著差異(0.7053±0.002963 vs 0.6943±0.002963,P=0.002；0.7053±0.002963 vs 0.69±0.002963,P=0.000；0.7053±0.002963 vs0.6053±0.002963,P=0.000：0.7053±0.002963 vs 0.5653±0.002963,P=0.000；0.7053±0.002963 vs 0.5273±0.002963,P=0.000：0.7053±0.002963 vs0.4927±0.002963,P=0.000)；繼續(xù)延長(zhǎng)處理時(shí)間發(fā)現(xiàn),葛根素濃度變化對(duì)細(xì)胞活力的影響更明顯：分別利用50,100,250,500,1000,1500,2000 μg/ml葛根素處理24小時(shí),細(xì)胞活力與對(duì)照組相比具有顯著差異(0.8140±0.00246 vs 0.6887±0.00246,P=0.000；0.8140±0.00246 vs0.6773±0.00246,P=0.000；0.8140±0.00246 vs 0.6580±0.00246,P=0.000；0.8140±0.00246 vs 0.5563±0.00246,P=0.000:0.8140±0.00246 vs 0.4817±0.00246, P=0.000；0.8140±0.00246 vs 0.4257±0.00246,P=0.000:0.8140±0.00246 vs 0.3690±0.00246,P=0.000)。利用相同濃度梯度(50,100,250,500,1000,1500,2000 μ g/m1)葛根素處理48小時(shí)后,細(xì)胞活力與對(duì)照組相比具有顯著差異(0.9307±0.002915 vs 0.6593±0.002915,P=0.000；0.9307±0.002915 vs 0.6420±0.002915,P=0.000；0.9307±0.002915 vs 0.6220±0.002915.P=0.000； 0.9307±0.002915 vs 0.4783±0.002915, P=0.000:0.9307±0.002915 vs 0.4153±0.002915,P=0.000;0.9307±0.002915 vs 0.3747±0.002915.P=0.000; 0.9307±0.002915 vs 0.3157±0.002915,P=0.000)。應(yīng)用葛根素處理后SMMC-7721細(xì)胞凋亡率顯著增加,該作用具有時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性特點(diǎn)：用較高濃度葛根素(500,1000,1500p g/ml)處理12h后,樣品的凋亡水平與對(duì)照組相比具有顯著差異(7.70%±0.84% vs11.77%±0.84%,P=0.001; 7.70%±0.84% vs 16.93%±0.84%,P=0.000; 7.70%±0.84% vs 20.63%±0.84%%,P=0.000);同樣用濃度為500,1000,1500μ g/ml的葛根素處理24h,樣品的凋亡水平與對(duì)照組相比具有顯著差異(8.0%±1.08% vs 17.30%±1.08%,P=0.000；8.0%±1.08% vs 28.67%±1.08%, P=0.000;8.0%±1.08% vs 37.17%±1.08％,P=0.000)。應(yīng)用葛根素處理后SMMC-7721細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用葛根素處理后的細(xì)胞比對(duì)照細(xì)胞發(fā)出更加明亮的藍(lán)射光,提示應(yīng)用葛根素處理后的細(xì)胞凋亡率增加。另外,在部分應(yīng)用葛根素處理后的細(xì)胞發(fā)生了染色質(zhì)濃縮,并有凋亡小體樣結(jié)構(gòu)形成。葛根素通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞發(fā)生凋亡。MMP喪失與細(xì)胞凋亡的線粒體通路激活啟動(dòng)有關(guān)。分別應(yīng)用不同濃度(500,1000,1500 μg/m1)葛根素處理SMMC-7721細(xì)胞處理24小時(shí)可引起細(xì)胞MMP顯著去極化(286961.71±4406.06 vs 194289.39±4406.06,P=0.000;286961.71±4406.06 vs 169679.15±4406.06, P=0.000; 286961.71±4406.06 vs 123012.49±4406.06,P=0.000)。該作用具有劑量依賴(lài)特點(diǎn)。ROS產(chǎn)生也與線粒體有關(guān)。分別應(yīng)用不同濃度葛根素(500,1000和1500μ g/m1)處理SMMC-7721細(xì)胞12h,細(xì)胞內(nèi)ROS積聚顯著增加,該作用具有劑量依賴(lài)性特點(diǎn)(P0.05)。當(dāng)葛根素濃度為500 μ g/ml時(shí),處理12h后與對(duì)照組相比,細(xì)胞的活性氧并無(wú)顯著變化(6.17±0.515536 vs 7.29±0.515536,P=0.061)：但當(dāng)葛根素濃度增加到1000 μ g/ml時(shí),活性氧濃度變化顯著(6.17±0.515536 vs13.5±0.515536,P=0.000)；葛根素濃度為1500μg/ml時(shí),細(xì)胞的活性氧有顯著變化(6.17±0.515536 vs 19.57±0.515536,P=0.000)凋亡相關(guān)基因表達(dá)水平。應(yīng)用30,500,2000μg/ml葛根素處理12h后凋亡細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)25%,50%,75%(即IC25,IC50,IC75),SMMC-7721細(xì)胞內(nèi)caspase3 mRNA的量與對(duì)照組相比有顯著差異：(0.8567%±0.7631% vs 2.6633%±0.7631%,P=0.045;0.8567%±0.7631% vs 4.9867%±0.7631%,P=0.001； 0.8567%±0.7631% vs 9.4%±0.7631%,P=0.000)應(yīng)用30,500,2000μg/ml葛根素處理12h后SMMC-7721細(xì)胞內(nèi)caspase8 mRNA的量與對(duì)照組相比有顯著差異：(1.7667%±0.8432% vs 4.9267%±0.8432%,P=0.006:1.7667%±0.8432% vs 6.6567%±0.8432％,P=0.001； 1.7667%±0.8432% vs 15.08%±0.8432%,P=0.000)。用30μg/ml葛根素處理12h后SMMC-7721細(xì)胞內(nèi)caspase9 mRNA的量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(0.3867%±1.5079% vs 2.2167%±1.5079%,P=0.259),當(dāng)葛根素濃度增加到500,2000 μg/ml時(shí),caspase9 mRNA的量與對(duì)照組相比有顯著差異(0.3867%±1.5079% vs 9.7467%±1.5079%,P=0.000；0.3867%±1.5079% vs 18.9467%±1.5079%,P=0.000)用30,500,2000 μg/ml葛根素處理細(xì)胞12h,細(xì)胞內(nèi)AIF mRNA的量與對(duì)照組相比,具有顯著差異(9.517%士5.9340% vs 23.36%±5.9340%,P=0.048；9.517%±5.9340% vs 34.89%±5.9340%,P=0.003；9.517%±5.9340% vs88.473%±5.9340%,P=0.000)隨后,應(yīng)用Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平和各種激酶磷酸化水平。應(yīng)用500μg/ml葛根素處理3h或6h后,SMMC-7721細(xì)胞內(nèi)AKT,P38,ERK1和JNK磷酸化水平呈時(shí)間依賴(lài)性增加,Caspase-9和AIF蛋白表達(dá)水平上調(diào)。結(jié)論1.高濃度葛根素能夠顯著抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖,該抑制作用具有時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性特點(diǎn)。2.葛根素可通過(guò)線粒體通路誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721凋亡。3.葛根素誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡與MMP喪失和ROS產(chǎn)生有關(guān)。總之,本研究表明葛根素可抑制肝癌細(xì)胞系SMMC-7721生長(zhǎng)并可通過(guò)線粒體通路誘導(dǎo)其凋亡,為HCC治療提供一個(gè)安全、有效的新選擇。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

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7 張立實(shí);丁曉琴;;葛根素的生物學(xué)作用及其應(yīng)用現(xiàn)狀[A];第二屆中國(guó)西部營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)題報(bào)告及論文摘要匯編[C];2006年

8 李洪玉;戴詩(shī)文;壽旦;章建民;;葛根中葛根素的高效液相色譜分析[A];第九屆全國(guó)中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)大會(huì)報(bào)告及論文集[C];2007年

9 張立實(shí);;葛根素生物學(xué)作用研究進(jìn)展(綜述)[A];第四屆第二次中國(guó)毒理學(xué)會(huì)食品毒理學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)與營(yíng)養(yǎng)食品所毒理室聯(lián)合召開(kāi)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

10 曲濤;周繡棣;慕宏杰;魏俊花;孫考祥;;樹(shù)枝狀聚合物聚酰胺-胺對(duì)葛根素在角膜上皮細(xì)胞攝取及滲透的影響[A];2011年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第11屆中國(guó)藥師周論文集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 副主任醫(yī)師 羅建國(guó);葛根素可用治多種疾病[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2000年

2 李立安;葛根素的臨床新用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

3 劉海文;葛根素治療糖尿病血管并發(fā)癥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

4 陶春祥;葛根素的臨床應(yīng)用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

5 王利；魏品康；秦志豐;研究揭示：葛根素可解決腫瘤MDR難題[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

6 常怡勇;注意葛根素的不良反應(yīng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

7 楊嘉珍邋歐陽(yáng)作憲;葛根素對(duì)腦細(xì)胞損傷有保護(hù)作用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

8 楊衛(wèi)彬;葛根素治療強(qiáng)直性脊柱炎的臨床觀察[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

9 程書(shū)權(quán);葛根素的臨床應(yīng)用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

10 青云;葛根素制劑的研究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張靜;葛根素對(duì)慢性缺血誘發(fā)的血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能障礙的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 曾艷平;葛根素聯(lián)合5-FU對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7721作用的研究[D];武漢大學(xué);2015年

3 楊希;葛根素作為牙周炎宿主調(diào)節(jié)治療藥物的研究[D];武漢大學(xué);2015年

4 張衛(wèi)國(guó);葛根素對(duì)人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

5 李耿;克服溶血的復(fù)方葛根素注射制劑生物評(píng)價(jià)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 潘洪平;葛根素的吸收動(dòng)力學(xué)及對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用研究[D];華中科技大學(xué);2010年

7 羅承鋒;葛根素固體脂質(zhì)納米粒的藥動(dòng)學(xué)及其代謝產(chǎn)物研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

8 吳純潔;葛根素眼用新型給藥系統(tǒng)的研究[D];四川大學(xué);2005年

9 李翼飛;葛根素特異性敲除技術(shù)方法及應(yīng)用研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

10 孫曉輝;葛根素治療糖尿病的作用機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 閆春林;葛根素對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡過(guò)程中p53及相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 陳貴洪;地塞米松聯(lián)合葛根素治療急性百草枯中毒大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 粟鳳;葛根素預(yù)處理對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[D];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院;2015年

4 康鑫;葛根素促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及信號(hào)調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2015年

5 賴(lài)松青;葛根素抗大鼠離體心臟缺氧復(fù)氧損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2013年

6 孫艷;葛根素下調(diào)組織蛋白酶B抑制TGF-β誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 周禮仕;芪燈明目膠囊化學(xué)成分分析與質(zhì)量控制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 金鑫;葛根素聯(lián)用沙格列汀對(duì)糖尿病大鼠血糖、腎臟纖維化及高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖的影響[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

9 國(guó)海東;葛根素高效檢測(cè)、分離及穩(wěn)定性和增溶研究[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 施榮楓;利用免疫分析法解析葛根素在正常大鼠和MCAO模型大鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)特征[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：2428898