【摘要】：原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC),作為肝臟惡性腫瘤的一種,是臨床上原發(fā)性肝癌的主要形式,為世界五大常見(jiàn)惡性腫瘤之一,每年世界范圍內(nèi)近25萬(wàn)人死于肝癌,在全球腫瘤致死率中高居第三位。中國(guó)是肝癌大國(guó),全球50%以上的新發(fā)和死亡肝癌患者發(fā)生在中國(guó)。流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)研究資料表明,乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃曲霉素、酒精等是我國(guó)肝癌發(fā)病的主要病因。研究顯示,大部分肝癌患者都會(huì)經(jīng)歷從肝炎到肝硬化,最后進(jìn)展到肝細(xì)胞癌的過(guò)程。目前,肝癌的五年生存率仍不到10%。由于肝癌起病隱匿,發(fā)病時(shí)多數(shù)患者已處于肝癌晚期,失去了治療的機(jī)會(huì)。因此,肝癌的早期診斷尤為重要。目前,組織活檢和病理檢查是肝癌診斷的"金標(biāo)準(zhǔn)”,然而由于其有創(chuàng)性,臨床應(yīng)用有限。血清甲胎蛋白(AFP)自上世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)后逐漸應(yīng)用于臨床,作為迄今為止臨床診斷HCC的首選指標(biāo),AFP的診斷靈敏度只有約60%,在一些非肝癌疾病如肝臟良性疾病、炎癥反應(yīng)時(shí)也可見(jiàn)其升高,其診斷效果同樣不能讓人滿意。肝癌的起病及進(jìn)展由多個(gè)蛋白分子參與,是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程,而研究表明血中過(guò)半的蛋白分子都存在糖基化現(xiàn)象。AFP-L3,即核心巖藻糖基化的甲胎蛋白早在2005年就已被美國(guó)食品藥品管理局(FDA)采納應(yīng)用于臨床。研究發(fā)生特定糖基化改變的蛋白與肝臟疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系對(duì)于肝病的診治及預(yù)后都具有十分重要的作用。與此同時(shí),近年來(lái)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)也取得了巨大的技術(shù)進(jìn)步,以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)越來(lái)越多地被應(yīng)用于臨床。本課題將圍繞血清中發(fā)生核心巖藻糖基化改變的蛋白,從兩個(gè)方面探討核心巖藻糖基化蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的臨床意義。第一部分:凝集素親和富集尋找血清中的原發(fā)性肝癌差異糖蛋白本研究對(duì)收集的健康對(duì)照(Healthy control,HC)、肝硬化(Liver cirrhosis,LC)及原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者的血清差異核心巖藻糖基化蛋白進(jìn)行篩選。LCA可與核心巖藻糖基化聚糖發(fā)生特異性結(jié)合親和富集HC、LC及HCC人群血清蛋白,利用質(zhì)譜技術(shù)尋找三組間差異蛋白。通過(guò)先初篩再驗(yàn)證的策略,旨在綜合不同質(zhì)譜技術(shù)差異,篩選核心巖藻糖基化差異蛋白。利用orbitrap質(zhì)譜分析檢測(cè)并進(jìn)行三組樣本間差異蛋白分析;隨后擴(kuò)大樣本,采用兩種不同的質(zhì)譜方法對(duì)初篩結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,并對(duì)兩種不同質(zhì)譜方法差異展開(kāi)分析討論。結(jié)果:綜合初篩及兩種不同質(zhì)譜方法的驗(yàn)證結(jié)果,LC與HC組間的差異蛋白為:血清淀粉樣組分P(Serum amyloid p-component),孕區(qū)蛋白(Pregnancy zone protein),觸珠蛋白相關(guān)蛋白(Haptoglobin-related protein),核心巖藻糖基化的三種蛋白HC組水平顯著高于LC組;HCC與HC組間的差異蛋白為性激素結(jié)合蛋白(Sex hormone binding protein)、多聚免疫球蛋白受體(Polymeric immunoglobulin receptor),核心巖藻糖基化的兩種蛋白在HCC組水平顯著高于HC組;HCC與LC組間的差異蛋白包括血清淀粉樣組分P(Serum amyloid p-component),觸珠蛋白(Haptoglobin),甲狀腺素運(yùn)載蛋白(Transthyretin)及載脂蛋白L1(Apolipoprotein L1),四種核心巖藻糖基化蛋白在HCC組水平均顯著高于LC組。結(jié)論:本研究利用糖鏈與凝集素的結(jié)合特性,在親和純化的基礎(chǔ)上,利用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)從糖基化層面尋找肝癌、肝硬化的差異蛋白,本實(shí)驗(yàn)得到的差異糖基化蛋白中核心巖藻糖基化的血清淀粉樣組分P、孕區(qū)蛋白、觸珠蛋白相關(guān)蛋白可能具有鑒別診斷HC與LC的潛力;核心巖藻糖基化的性激素結(jié)合蛋白、多聚免疫球蛋白受體或可用于HCC與HC的鑒別診斷;核心巖藻糖基化的血清淀粉樣組分P、觸珠蛋白、甲狀腺素運(yùn)載蛋白及載脂蛋白L1或具有鑒別診斷HCC與LC的潛在價(jià)值。這些發(fā)現(xiàn)均有待后續(xù)研究驗(yàn)證。第二部分:四種特定糖蛋白對(duì)HCC診斷及手術(shù)療效判斷意義分析通過(guò)閱讀文獻(xiàn)及分析臨床檢測(cè)的可及性,本研究對(duì)鐵蛋白(Ferritin,Fer)、IgG、α2-M及轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin,Trf)這四種特定蛋白及其核心巖藻糖基化組分(以下簡(jiǎn)稱為異質(zhì)體)在原發(fā)性細(xì)胞癌中的診斷意義及其在肝細(xì)胞癌根治切除術(shù)前后的隨訪價(jià)值進(jìn)行了初步探討。結(jié)果顯示Fer異質(zhì)體%、α2-M、α2-M異質(zhì)體%及Trf在HCC組與非HCC組間存在差異,其中α2-M、α2-M異質(zhì)體%HCC組水平高于非HCC組。四種特定蛋白與AFP及AFP-L3%相關(guān)性比較中,IgG異質(zhì)體%、Trf異質(zhì)體%均與AFP-L3%呈正相關(guān)。四種特定蛋白及其異質(zhì)體%對(duì)HCC的診斷陽(yáng)性率均不及目前臨床廣泛應(yīng)用的AFP及AFP-L3%;四種特定蛋白中,只有α2-M及其異質(zhì)體%對(duì)HCC診斷的AUC0.6(p0.05)。聯(lián)合檢測(cè)AFP、α2-M及α2-M異質(zhì)體%可顯著提高對(duì)HCC的診斷價(jià)值,尤其是診斷靈敏度從單獨(dú)檢測(cè)AFP時(shí)的不足85%提升到90%。對(duì)四種特定蛋白與HCC腫瘤大小的相關(guān)研究顯示,HCC腫瘤直徑與Trf-L3%正相關(guān)。在30例行肝癌根治性切除術(shù)的標(biāo)本中,Fer異質(zhì)體、Fer異質(zhì)體%、IgG、IgG異質(zhì)體、Trf異質(zhì)體在術(shù)前術(shù)后有顯著性差異,其中Fer異質(zhì)體、Fer異質(zhì)體%術(shù)后水平較術(shù)前降低。在HCC根治性切除術(shù)前術(shù)后AFP顯著下降組中,術(shù)后較術(shù)前顯著降低的指標(biāo)有Fer異質(zhì)體、Fer異質(zhì)體%及IgG異質(zhì)體%;在術(shù)前AFP陰性的術(shù)前術(shù)后配對(duì)標(biāo)本中,α2-M異質(zhì)體及α2-M異質(zhì)體%水平在術(shù)后較術(shù)前顯著降低。結(jié)論:四種臨床常用的特定蛋白Fer、IgG、α2-M、Trf中,α2-M及其異質(zhì)體%在HCC的早期輔助診斷及肝細(xì)胞癌根治性切除術(shù)效果的隨訪上具有重要潛在應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2422295