【摘要】：背景乳腺癌是威脅全球女性健康的一種疾病,近年來發(fā)病率不斷攀升,已經(jīng)成為女性腫瘤中死亡率最高的疾病。乳腺癌的轉(zhuǎn)移是導致高死亡率的主要原因,轉(zhuǎn)移的發(fā)生通常伴隨著腫瘤細胞的遷移與侵襲。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-Mesenchymal Transitions,EMT)是乳腺癌細胞從上皮表型轉(zhuǎn)化成間質(zhì)型細胞的一個現(xiàn)象。EMT的發(fā)生伴隨著許多的生理和病理的變化活動,一些與EMT相關(guān)的生物標志物發(fā)生了變化,如上皮標志分子E-Cadherin表達的減少;間質(zhì)標志分子N-cadherin、Vimentin表達的增多;EMT轉(zhuǎn)錄分子Snail,Slug和Twist表達的增多。生長因子TGF-β(TransformingGrowthFactor-β)是一種EMT誘導因子,TGF-βⅠ和TGF-βⅡ形成復合體,激活Smad2和Smad3,并介導EMT的活動。文獻報道,鈣電流可以影響EMT,特別是鈣庫調(diào)控的鈣電流(Store-Operated Calcium Entry,SOCE)�；|(zhì)交感分子 1(Stromal Interaction Molecule 1,STIM1)是SOCE的重要組成部分,是存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜上的一種蛋白,當感應到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)里的Ca2+濃度的減低時,它就會聚集并轉(zhuǎn)位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和細胞質(zhì)膜交匯處的近膜區(qū),打開SOCE通道,外鈣內(nèi)流�；|(zhì)交感分子2(Stromal Interaction Molecule2,STIM2)與STIM1是同系物,但是關(guān)于它的研究甚少而且具有爭議,有部分研究指出STIM2介導SOCE,但又有實驗指出STIM2會抑制SOCE,因此STIM2在SOCE中的作用需要深入研究。目的關(guān)于STIM1與SOCE的關(guān)系的研究已經(jīng)相對清晰,但是在TGF-β誘導產(chǎn)生EMT后,STIM1、STIM2在其中又起著怎樣的作用仍需要深入研究。本實驗主要是探究STIM1與STIM2在介導TGF-β產(chǎn)生的EMT之間的區(qū)別,并探討其影響轉(zhuǎn)移的鈣信號機制。方法1.在Kmplot腫瘤患者預后數(shù)據(jù)庫中檢測STIM1和STIM2在乳腺癌患者中的生存曲線。2.采用慢病毒干擾和過表達STIM1與STIM2,并用嘌呤霉素進行篩選。3.采用免疫印跡法對干擾和過表達STIM1與STIM2的不同處理組進行蛋白量的檢測,觀察干擾和過表達的效果。4.采用Transwell方法,對TGF-β刺激24h后的不同處理組的MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌細胞進行侵襲力變化的觀察。5.采用RT-qPCR方法和免疫印跡法檢測EMT標志物E-Cadherin、Vimentin、Snaill,觀察不同處理組STIM1與STIM2的EMT的強弱。6.采用膜片鉗實驗技術(shù)觀察不同處理組的SOCE的大小。7.采用Confocal實驗檢測不同處理組SOCE與非SOCE的大小。結(jié)果1.Kmplot數(shù)據(jù)庫檢測到在乳腺癌臨床患者中STIM1與STIM2表達高的患者預后差。2.免疫印跡檢測出慢病毒干擾和過表達STIM1與STIM2效果顯著。3.Transwell結(jié)果顯示乳腺癌細胞在干擾STIM1和干擾STIM2后侵襲力減弱,過表達STIM1和STIM2后侵襲力增強。4.RT-qPCR方法和免疫印跡法發(fā)現(xiàn),乳腺癌細胞在TGF-β刺激24h后,干擾STIM1組和干擾STIM2組的EMT現(xiàn)象減弱,過表達STIM1組和STIM2組EMT增強。5.膜片鉗和Confocal結(jié)果顯示,乳腺癌細胞在TGF-β刺激24h后,干擾STIM1組和STIM2組的SOCE減小,過表達STIM1組和STIM2組的SOCE增強。而干擾和過表達STIM1組的非SOCE大小無顯著性差異,干擾STIM2組的非SOCE減小,而過表達STIM2組非SOCE增強。結(jié)論本實驗中,我們證明了 STIM蛋白參與了乳腺癌細胞的TGF-β刺激后的EMT過程。我們區(qū)分了 STIM1和STIM2在TGF-β刺激后的鈣電流中的作用,同時,我們發(fā)現(xiàn)STIM1通過調(diào)節(jié)SOCE介導TGF-β刺激后的EMT。而STIM2可以同時調(diào)節(jié)SOCE與非SOCE介導TGF-β刺激后的EMT。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：2417338