【摘要】：目的:我國是一個胃癌大國,在我國胃癌具有的發(fā)病率高、早期檢出率低、死亡率高的特點(diǎn),嚴(yán)重威脅著我國人民的生命和健康。目前,手術(shù)雖是目前胃癌的主要治療手段,但是對于進(jìn)展期胃癌患者化療更是術(shù)后綜合治療中的重中之重。不過化療藥物作用的效果是有限的,并且毒副作用較大,因此尋找新的藥物用于胃癌治療意義顯得較為重要。中醫(yī)藥聯(lián)合化療藥物治療胃癌術(shù)后,在提高生存質(zhì)量、延長生存期、提高免疫功能、減輕骨髓抑制等方面均優(yōu)于單純化療。莪術(shù)醇,又名姜黃環(huán)奧醇,為具有半縮酮的氫化奧類化合物,是中藥莪術(shù)的提取物莪術(shù)揮發(fā)油中莪二酮在加熱或路易斯酸的催化作用下異構(gòu)而成。目前研究發(fā)現(xiàn)莪術(shù)醇對于宮頸癌、卵巢癌、胃癌、食管癌、肝癌等多種癌癥具有明顯的治療作用,并且其抗菌抗病毒、抗肝肺纖維化、活血化瘀等也均有明顯的效應(yīng),是一種對臨床疾病具有良好前景的藥物。但關(guān)于莪術(shù)醇治療胃癌的研究大部分尚集中在體外研究上,體內(nèi)抗腫瘤的研究相對罕見,且其機(jī)制尚未十分明確。本研究擬觀察莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑對人胃癌細(xì)胞(BGC-823)裸鼠皮下移植瘤生長及Bcl-2和Caspase-3表達(dá)的影響,并初步探索其作用機(jī)制。方法:1建立人胃癌BGC-823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型。選取4-5周齡的BALB/c雄性裸鼠2只,在SPF級環(huán)境下飼養(yǎng)。取處于對數(shù)生長期的人胃癌BGC-823細(xì)胞(3.0×106個/ml)0.2ml注射于右側(cè)腋部皮下,待瘤體長出后每2天測量皮下瘤長短徑,在皮下瘤體直徑約1.0cm時取出,剪成大小約1mm3的瘤塊分別種植于20只4-5周齡的BALB/c雄性裸鼠的右側(cè)腋部皮下,同樣等瘤體長出后每2天測量皮下瘤長短徑,在皮下瘤體直徑均約1.0cm時表明建立胃癌BGC-823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型成功。2實(shí)驗(yàn)分組及藥物干預(yù)。將20只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為陰性對照組(n=5)、莪術(shù)醇(100mg/kg;n=5)治療組、奧沙利鉑(30mg/kg;n=5)治療組,莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑(莪術(shù)醇100mg/kg,奧沙利鉑30mg/kg;n=5)治療組。對照組給同量的生理鹽水。將藥分成4次給藥,每4天給一次藥、稱量一次體重、測量一次瘤體長短徑。觀察17天后處死荷瘤裸鼠,取瘤體。根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求,分別存放。3結(jié)果處理及分析。計(jì)算腫瘤體積并繪制腫瘤體積生長曲線,稱量瘤重、計(jì)算抑瘤率。采用MTT比色法探究腫瘤細(xì)胞的生長情況。采用免疫組化、熒光定量RT-PCR法檢測各組的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell leukermia/lymphoma-2,Bcl-2)的蛋白表達(dá)和m RNA的情況,并計(jì)算差異。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 21.0軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,多組樣本間均數(shù)差異比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果:1荷瘤裸鼠移植瘤的生長曲線及體積變化給藥前各組裸鼠腫瘤體積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。從用藥的第一天開始,每4天測量一次腫瘤體積。第17天莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組的平均體積低于對照組腫瘤的平均體積,腫瘤平均體積差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。莪術(shù)醇組的平均體積高于奧沙利鉑組的平均體積,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組平均體積高于聯(lián)合用藥組平均體積,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2荷瘤裸鼠移植瘤的瘤重、腫瘤抑制率第17天經(jīng)頸椎脫臼處死荷瘤裸鼠,完整剖離瘤體,稱量瘤重,并計(jì)算腫瘤抑制率,用SPSS21.0計(jì)算后,莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組瘤重低于與對照組腫瘤瘤重,腫瘤重量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。莪術(shù)醇組與奧沙利鉑組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組平均瘤重高于聯(lián)合用藥組平均瘤重,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑對裸鼠移植瘤細(xì)胞的生長影響對荷瘤裸鼠移植瘤單細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行MTT比色法測定其生長狀態(tài),結(jié)果發(fā)現(xiàn)光密度OD值與對照組相比,24h、48h、72h莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組和聯(lián)合用藥組OD值均低于對照組OD值,差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。并計(jì)算細(xì)胞存活率。24h、48h、72h莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組和聯(lián)合用藥組的細(xì)胞存活率均低于對照組細(xì)胞存活率(P0.05);24h聯(lián)合用藥組的細(xì)胞生長抑制與單獨(dú)應(yīng)用奧沙利鉑組未見明顯有效(P0.05)但優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用莪術(shù)醇(P0.05)。48h、72h聯(lián)合用藥組的細(xì)胞生長抑制作用更優(yōu)于單藥組(P0.05)。4荷瘤裸鼠腫瘤Bcl-2、Caspass-3的m RNA表達(dá)水平的改變與對照組相比,莪術(shù)組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組Caspase-3m RNA表達(dá)均顯著升高(P0.01),Bcl-2 m RNA表達(dá)均顯著下降(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5荷瘤裸鼠腫瘤Bcl-2、Caspass-3蛋白表達(dá)水平的改變免疫組織化學(xué)染色中,Bcl-2以細(xì)胞質(zhì)或胞膜呈棕黃色顆粒為陽性,Caspase-3免疫組化染色陽性細(xì)胞呈胞漿內(nèi)棕黃色顆粒。結(jié)果顯示Bcl-2在對照組、莪術(shù)組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組中的表達(dá)強(qiáng)陽性率分別為86.67%、23.33%、25.00%、13.33%;Caspase-3在對照組、莪術(shù)組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組中的表達(dá)強(qiáng)陽性率分別為26.67%、66.67%、86.67%、93.33%。Bcl-2在莪術(shù)組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組中表達(dá)低于對照組,Caspase-3在莪術(shù)組、奧沙利鉑組、聯(lián)合用藥組中表達(dá)高于對照組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1莪術(shù)醇組、奧沙利鉑組及莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑組對胃癌裸鼠移植瘤生長均具有抑制作用。其中莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑相比于單獨(dú)莪術(shù)醇或奧沙利鉑的荷瘤裸鼠的皮下移植瘤的體積及重量均低,說明莪術(shù)醇和奧沙利鉑聯(lián)合應(yīng)用可以增強(qiáng)奧沙利鉑的抗腫瘤的療效。2莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑可以增強(qiáng)奧沙利鉑對裸鼠胃癌移植瘤細(xì)胞的抑制作用。3莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑抑制裸鼠胃癌移植瘤的機(jī)制可能是通過上調(diào)Caspase-3的表達(dá)和下調(diào)Bcl-2的表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉志敏,徐立春;莪術(shù)醇水溶性的提高及其抗腫瘤作用研究近況[J];中國基層醫(yī)藥;2005年07期

2 朱亞爾;朱曉平;;毛細(xì)管氣相色譜法測定莪術(shù)中莪術(shù)醇的含量[J];中國中藥雜志;2006年05期

3 婁月芬;陸錦芳;張健;;用氣相色譜法測定復(fù)方莪術(shù)微囊中莪術(shù)醇的含量[J];藥學(xué)服務(wù)與研究;2007年01期

4 曾建紅;陳旭;潘艷薇;舒麗清;;莪術(shù)醇的研究進(jìn)展[J];中藥材;2008年01期

5 王婷;李鐵福;林紹強(qiáng);姚崇舜;李校X;;莪術(shù)醇的分離鑒定及含量測定[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2008年05期

6 王耀霞;徐立春;;莪術(shù)醇抗腫瘤研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年22期

7 楊新平;陳旭;李芳耀;阮方;林家遜;鐘海雁;;中藥莪術(shù)中抗腫瘤成分莪術(shù)醇人工抗原的合成與鑒定[J];時珍國醫(yī)國藥;2010年05期

8 鐘章鋒;陳修平;吳鐵;王一濤;;莪術(shù)醇的研究進(jìn)展[J];中國藥房;2010年31期

9 曹雪;李悅青;劉季紅;趙偉杰;;一種新型的莪術(shù)醇衍生物的波譜學(xué)分析[J];波譜學(xué)雜志;2011年03期

10 趙曉;劉玉玲;;莪術(shù)醇亞微乳劑含量及有關(guān)物質(zhì)測定方法的建立[J];中國新藥雜志;2008年19期

相關(guān)會議論文 前3條

1 袁文娟;田頌九;張啟明;;柱前衍生化氣相色譜法測定莪術(shù)油中莪術(shù)醇含量[A];2008年《藥物分析雜志》第三屆普析通用杯論文集[C];2008年

2 樓燕;張卉;何昊;彭開鋒;魏星川;李雪改;陳麗霞;邱峰;;莪術(shù)醇大鼠體內(nèi)代謝研究[A];中國化學(xué)會第八屆天然有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 韓鳳娟;湯欣;李威;王龍;蔡冬燕;吳效科;;莪術(shù)醇對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株JAK2/STAT3信號通路影響的研究[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會論文及摘要集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 陳旭;廣西莪術(shù)多糖生物活性與莪術(shù)醇免疫分析方法的研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2012年

2 張卉;莪術(shù)醇的微生物轉(zhuǎn)化及大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物研究[D];沈陽藥科大學(xué);2005年

3 梁大偉;欖香烯型分子母核的構(gòu)建與莪術(shù)醇的結(jié)構(gòu)修飾及活性研究[D];沈陽藥科大學(xué);2014年

4 李文杰;莪術(shù)醇肝靶向脂質(zhì)體的制備及其抗腫瘤研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

5 樓燕;溫郁金化學(xué)成分及莪術(shù)醇大鼠體內(nèi)代謝研究[D];沈陽藥科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 郭志朋;莪術(shù)醇聯(lián)合奧沙利鉑對裸鼠胃癌移植瘤生長及Bcl-2和Caspase-3表達(dá)影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王耀霞;莪術(shù)醇對人胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其機(jī)制的初步研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

3 金鑫;莪術(shù)醇納米脂質(zhì)體的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2009年

4 馬旭;天然藥物莪術(shù)醇的結(jié)構(gòu)修飾[D];大連理工大學(xué);2010年

5 趙曉;莪術(shù)醇靜脈注射亞微乳劑的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

6 曹雪;愈創(chuàng)木烷類衍生物的合成研究及波譜學(xué)分析[D];大連理工大學(xué);2011年

7 唐淵;莪術(shù)醇對肝癌、結(jié)腸癌的影響及機(jī)理研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 陳海燕;莪術(shù)醇對SGC7901細(xì)胞生長效應(yīng)的影響及部分機(jī)制的初步研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2012年

9 賈冰;莪術(shù)醇、沒食子酸配伍對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

10 侯艷芳;抗莪術(shù)醇單鏈抗體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號：2416725