【摘要】：目的：研究中藥單體吳茱萸堿(Evodiamine, Evo)聯(lián)合常用化療藥物奧沙利鉑(Oxaliplatin, Oxa)及5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)對(duì)常見(jiàn)消化道腫瘤細(xì)胞,人腸癌細(xì)胞株SW480、人胃癌細(xì)胞株SGC-7901以及人食管癌細(xì)胞株TE1的體外相互作用及其可能作用機(jī)制。方法：1)采用MTT法分別檢測(cè)Evo、Oxa、5-Fu不同濃度各單藥作用于指數(shù)增殖期的人腸癌細(xì)胞株SW480、人胃癌細(xì)胞株SGC-7901以及人食管癌細(xì)胞株TE1,由此確定各個(gè)單藥的ICs0；2)根據(jù)各單藥的ICs0,確定Evo與Oxa, Evo與5-Fu,兩藥聯(lián)合作用時(shí)的藥物濃度梯度,并采用MTT法再次分別檢測(cè)Evo聯(lián)合Oxa、5-Fu作用于上述三株不同種類的腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)；3)運(yùn)用中效原理(Median-effect Principle),分別繪制出各單藥、兩藥聯(lián)合用藥對(duì)三株腫瘤細(xì)胞的增殖抑制曲線,以及聯(lián)合用藥對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的合用指數(shù)曲線,以此來(lái)判定聯(lián)合用藥的兩藥之間的相互作用關(guān)系；4)采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析在不同藥物濃度下合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)的兩藥對(duì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。結(jié)果：1)人腸癌細(xì)胞株SW480:Evo、Oxa和5-Fu對(duì)于指數(shù)增殖期的SW480細(xì)胞均有增殖抑制作用,藥物作用48小時(shí)后的IC50分別為：Evo:(10.295±0.568)μg/ml, Oxa: (9.438±1.750)μg/ml,5-Fu:(6.8754±2.733)μg/ml。利用中效原理分析,Evo聯(lián)合Oxa時(shí),在較低濃度(Fa0.65)時(shí),兩藥合用效應(yīng)表現(xiàn)為協(xié)同；Evo聯(lián)合5-Fu時(shí),在Fa0.75時(shí),兩藥合用效應(yīng)表現(xiàn)為協(xié)同。2)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901:Evo、Oxa和5-Fu對(duì)于對(duì)指數(shù)增殖期的SGC-7901細(xì)胞均有增殖抑制作用,作用48小時(shí)后的IC50分別為：Evo:(9.114±1.261)μg/ml, Oxa: (9.895±0.432)μg/ml,5-Fu：(15.149±2.903)μg/ml。利用中效原理分析,；Evo聯(lián)合Oxa,在較低濃度(Fa0.45)時(shí),兩藥合用效應(yīng)表現(xiàn)為協(xié)同；Evo聯(lián)合5-Fu時(shí),在較大濃度時(shí)(Fa0.45),兩藥合用效應(yīng)為協(xié)同。3)人食管癌細(xì)胞株TE1:Evo、Oxa和5-Fu對(duì)于指數(shù)增殖期的TE1細(xì)胞均有增殖抑制作用,作用48小時(shí)后的IC50分別為:Evo:(6.935±0.698)μg/ml, Oxa:(21.679±7.201)μg/ml, 5-Fu:(25.840±6.422)μg/ml。利用中效原理分析,Evo聯(lián)合Oxa時(shí),無(wú)論是在較大濃度,亦是在較低濃度,兩藥聯(lián)合作用時(shí)合用效應(yīng)均為協(xié)同；Evo聯(lián)合5-Fu時(shí),在Fa0.80時(shí),兩藥合用效應(yīng)為協(xié)同。4)流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞凋亡：在單藥低細(xì)胞毒劑量IC25左右濃度,即Evo: 4μg/ml、Oxa:10μg/ml、Evo+Oxa:(4+10) μg/ml左右濃度,作用于TE1細(xì)胞48 h后,聯(lián)合用藥組與對(duì)照組、單藥組相比總凋亡率顯著升高(聯(lián)合用藥組凋亡率為45.7%),并以晚期凋亡為主(41.1%)。5)流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞周期：在單藥低細(xì)胞毒劑量IC25左右濃度,即IEvo:4μg/ml、 Oxa:10μg/ml、Evo+Oxa:(4+10)μg/ml左右濃度,作用于TE1細(xì)胞48 h后,Evo組(54.25%)較對(duì)照組(27.54%)G0/G1期細(xì)胞比例升高,聯(lián)合Oxa作用后G0/G1期細(xì)胞比例進(jìn)一步升高(71.30%)。結(jié)論：1) Evo對(duì)SW480、SGC-7901及TE1細(xì)胞均有抑制增殖的作用,相同藥物濃度情況下,食管癌TE1細(xì)胞對(duì)Evo最敏感。2)Evo聯(lián)合Oxa、5-Fu作用于SW480細(xì)胞,在一定濃度下具有協(xié)同作用,其產(chǎn)生協(xié)同作用的濃度是：Evo(7.328±0.905) μg/ml、Oxa(9.160±1.132) μg/ml和Evo(21.033±2.308) μg/ml.5-Fu(442.010±229.117)μg/l。3)Evo聯(lián)合Oxa作用于SGC-7901細(xì)胞,在較低濃度下具有協(xié)同作用,其產(chǎn)生協(xié)同作用的濃度是：Evo(7.892±1.295)μg/ml、Oxa(8.686±0.462) μg/ml; Evo聯(lián)合5-Fu作用于SGC-7901細(xì)胞,在較高濃度下具有協(xié)同作用,其產(chǎn)生協(xié)同作用的濃度是：Evo(7.892±1.295)μg/ml、5-Fu(7.631±1.598)μg/ml。4)Evo聯(lián)合Oxa作用于TE1細(xì)胞,無(wú)論在低濃度或是在較高濃度均產(chǎn)生協(xié)同作用；Evo聯(lián)合5-Fu作用于TE1細(xì)胞,在一定濃度作用下產(chǎn)生協(xié)同作用,其產(chǎn)生協(xié)同作用的濃度是：Evo(16.939±1.292) μg/ml、5-Fu(5678.333±6957.5)Evo聯(lián)合Oxa作用于TE1細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)的機(jī)制可能是：①誘導(dǎo)TE1細(xì)胞凋亡,尤其是晚期凋亡；②將TE-1細(xì)胞周期阻滯在Go/G1期。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2404206