【摘要】：目的探討毒蕈堿型膽堿能受體M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化對人肝癌細胞侵襲、轉移能力的影響及其分子機制。方法 Western blot檢測兩種人肝癌細胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受體的表達;采用氯貝膽堿(Beth)及達菲那新(UK88525)處理肝癌Hep G2和SMMC-7721細胞,分為空白對照組、Beth組、Beth+UK88525組、UK88525組,經(jīng)處理48 h后,Transwell實驗檢測兩種肝癌細胞經(jīng)不同分組處理后侵襲、遷移能力的變化,Western blot檢測各組細胞中上皮-間質(zhì)轉化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)標志蛋白的表達及下游信號通路PI3K/Akt的變化;采用shRNA干擾質(zhì)粒經(jīng)Lipofectamine 2000TM轉染肝癌細胞Hep G2以沉默ChRM3,分為空白對照組、Beth組、Beth+sh ChRM3組、sh ChRM3組,分別檢測細胞的侵襲、轉移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改變。結果 Hep G2和SMMC-7721兩種肝癌細胞中均有ChRM3受體的表達;Transwell實驗顯示:Beth單獨處理組對肝癌細胞的遷移和侵襲有明顯的促進作用,而UK88525能夠抑制Beth對肝癌細胞遷移侵襲能力的促進作用(P0.05);Western blot結果顯示:Beth單獨處理組能夠上調(diào)EMT標志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下調(diào)E-Cadherin的表達,UK88525處理后能夠明顯抑制Beth促進Hep G2細胞EMT的過程(解除Beth對Hep G2細胞EMT的促進過程),同時也能夠抑制PI3K/Akt的活化(P0.05);干擾質(zhì)粒沉默ChRM3受體同樣能夠抑制Beth促肝癌細胞遷移、侵襲的作用,并且抑制Beth誘導的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P0.05)。結論 ChRM3活化能夠通過PI3K/Akt信號通路促進肝癌細胞的侵襲和轉移。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of the activation of muscarinic cholinergic receptor M3 (muscarinic cholinergic receptors 3 (ChRM3) on the invasion and metastasis of human hepatoma cells and its molecular mechanism. Methods Western blot was used to detect the expression of ChRM3 receptor in Hep G2 and SMMC-7721 cells. The hepatoma Hep G2 and SMMC-7721 cells were treated with chloroblcholine (Beth) and Tamiflu (UK88525). The cells were divided into three groups: blank control group, Beth UK88525 group and UK88525 group. After 48 hours of treatment, Transwell assay was used to detect the invasion of the two kinds of hepatoma cells treated by different groups. The expression of epithelial-mesenchymal transformation (epithelial-to-mesenchymal transition,EMT) marker protein and the change of downstream signal pathway (PI3K/Akt) were detected by, Western blot. Hep G2 cells were transfected with shRNA interference plasmid (Lipofectamine 2000TM) to silence ChRM3, into control group, Beth sh ChRM3 group and sh ChRM3 group. The invasion and metastasis ability of the cells and the changes of PI3K/Akt downstream of EMT, were detected. Results ChRM3 receptors were expressed in Hep G2 and SMMC-7721 cells. Transwell assay showed that Beth alone could significantly promote the migration and invasion of HCC cells, while UK88525 could inhibit the effect of Beth on the migration and invasion of HCC cells (P0.05). Western blot results showed that Beth alone could up-regulate the expression of E-Cadherin by EMT marker protein N-Cadherin and Vimentin, and UK88525 treatment could significantly inhibit the process of Beth promoting EMT in Hep G2 cells (remove the process of Beth promoting EMT of Hep G2 cells). The activation of PI3K/Akt was also inhibited (P0.05). Interference plasmid silencing ChRM3 receptor also inhibited the migration and invasion of hepatoma cells induced by Beth, and inhibited the activation of EMT and downstream PI3K/Akt induced by Beth (P0.05). Conclusion ChRM3 activation can promote the invasion and metastasis of hepatoma cells through PI3K/Akt signaling pathway.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍肝膽外科研究所;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81272224)~~
【分類號】：R735.7

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本文編號：2402487