【摘要】：食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一,在我國男性中的發(fā)病率排在第三位,女性中排在第五位。我國食管癌的病理類型多為食管鱗癌,目前對于食管鱗癌的治療手段有效,病人預后差,五年生存率低。因此研究食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,為食管鱗癌的臨床診斷和治療提供分子標志物或藥物靶點顯得尤為重要。課題組前期通過對食管鱗癌組織樣本進行全基因組測序和比較基因組雜交分析,發(fā)現(xiàn)了一個高頻擴增區(qū)域14q32.2-32.33,且此區(qū)域的擴增與局部淋巴結轉移密切相關。為了研究長鏈非編碼RNA在食管鱗癌中的功能和作用機制,我們在此擴增區(qū)域篩選出一個在食管鱗癌細胞中表達,并且其表達與DNA擴增相關的長鏈非編碼RNA,linc00638。通過RACE實驗、Northern blot實驗以及PCR實驗,我們確定了 linc00638的全長核酸序列。在對食管鱗癌組織標本及其配對癌旁組織標本進行RNA原位雜交實驗時發(fā)現(xiàn),linc00638的細胞定位發(fā)生了變化:在166例癌旁組織中,linc00638定位于細胞核,而在84例癌組織中,linc00638定位于細胞核和細胞漿。Linc00638核漿均有分布的食管鱗癌組織樣本對應著更高的淋巴結轉移率。為了探究linc00638定位改變的分子機制,我們采用RNA pull-down實驗聯(lián)合質譜分析,發(fā)現(xiàn)PTB可以和linc00638結合,并調控linc00638的表達和細胞定位。體外的細胞實驗表明linc00638可以促進食管鱗癌細胞的增殖、克隆形成、侵襲遷移,促進淋巴內皮細胞的遷移和成管。體內的動物實驗進一步證實linc00638可以促進食管鱗癌細胞在動物體內的淋巴結轉移。這些實驗結果表明linc00638具有促癌作用。分子機制研究發(fā)現(xiàn),位于細胞漿的linc00638可以直接與VEGF-C mRNA結合,并增加mRNA的穩(wěn)定性,促進VEGF-C的表達;此外,linc00638還可以與miR-216b相互作用,調控miR-216b靶基因KRAS的表達。以上研究表明長鏈非編碼RNAlinc00638在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的促進作用,為將來的食管鱗癌的診斷和治療提供了理論基礎和分子標志物。
[Abstract]:Esophageal cancer is one of the most common malignant tumors in China. Esophageal squamous cell carcinoma is the pathological type of esophageal cancer in China. At present, the treatment of esophageal squamous cell carcinoma is effective, the prognosis of patients is poor, and the 5-year survival rate is low. Therefore, it is very important to study the molecular mechanism of esophageal squamous cell carcinoma, to provide molecular markers or drug targets for the clinical diagnosis and treatment of esophageal squamous cell carcinoma. A high frequency amplification region of 14q32.2-32.33 was found by genomic sequencing and comparative genomic hybridization analysis of esophageal squamous cell carcinoma tissue samples, and the amplification of this region was closely related to local lymph node metastasis. In order to study the function and mechanism of long chain noncoding RNA in esophageal squamous cell carcinoma, we screened out a long strand noncoding RNA,linc00638. expressed in esophageal squamous cell carcinoma cells in this amplification region, and its expression was associated with DNA amplification. The full length nucleic acid sequence of linc00638 was determined by, Northern blot and PCR experiments in RACE experiment. RNA in situ hybridization of esophageal squamous cell carcinoma and its matched adjacent tissues showed that the cellular localization of linc00638 had changed: in 166 paracancerous tissues, linc00638 was located in the nucleus, while in 84 cancer tissues. Linc00638 was located in the nucleus and cytoplasm of the esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) with the distribution of Linc00638 nucleus and cytoplasm. The higher lymph node metastasis rate was found in the samples of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). In order to explore the molecular mechanism of linc00638 localization, we found that PTB can bind to linc00638 and regulate the expression of linc00638 and cellular localization by RNA pull-down experiment combined with mass spectrometry. Cell experiments in vitro showed that linc00638 could promote the proliferation, clone formation, invasion and migration of esophageal squamous carcinoma cells, and promote the migration of lymphatic endothelial cells and the formation of tubules. Animal experiments in vivo further confirmed that linc00638 can promote lymph node metastasis of esophageal squamous cell carcinoma cells in vivo. These results suggest that linc00638 can promote cancer. The molecular mechanism showed that linc00638 located in cytoplasm could bind directly to VEGF-C mRNA, increase the stability of mRNA and promote the expression of VEGF-C. In addition, linc00638 could interact with miR-216b to regulate the expression of miR-216b target gene KRAS. These studies suggest that long chain noncoding RNAlinc00638 plays an important role in the development of esophageal squamous cell carcinoma and provides a theoretical basis and molecular marker for the diagnosis and treatment of esophageal squamous cell carcinoma in the future.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

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