【摘要】：食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在我國(guó)男性中的發(fā)病率排在第三位,女性中排在第五位。我國(guó)食管癌的病理類(lèi)型多為食管鱗癌,目前對(duì)于食管鱗癌的治療手段有效,病人預(yù)后差,五年生存率低。因此研究食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,為食管鱗癌的臨床診斷和治療提供分子標(biāo)志物或藥物靶點(diǎn)顯得尤為重要。課題組前期通過(guò)對(duì)食管鱗癌組織樣本進(jìn)行全基因組測(cè)序和比較基因組雜交分析,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)高頻擴(kuò)增區(qū)域14q32.2-32.33,且此區(qū)域的擴(kuò)增與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。為了研究長(zhǎng)鏈非編碼RNA在食管鱗癌中的功能和作用機(jī)制,我們?cè)诖藬U(kuò)增區(qū)域篩選出一個(gè)在食管鱗癌細(xì)胞中表達(dá),并且其表達(dá)與DNA擴(kuò)增相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA,linc00638。通過(guò)RACE實(shí)驗(yàn)、Northern blot實(shí)驗(yàn)以及PCR實(shí)驗(yàn),我們確定了 linc00638的全長(zhǎng)核酸序列。在對(duì)食管鱗癌組織標(biāo)本及其配對(duì)癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行RNA原位雜交實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),linc00638的細(xì)胞定位發(fā)生了變化:在166例癌旁組織中,linc00638定位于細(xì)胞核,而在84例癌組織中,linc00638定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿。Linc00638核漿均有分布的食管鱗癌組織樣本對(duì)應(yīng)著更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。為了探究linc00638定位改變的分子機(jī)制,我們采用RNA pull-down實(shí)驗(yàn)聯(lián)合質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn)PTB可以和linc00638結(jié)合,并調(diào)控linc00638的表達(dá)和細(xì)胞定位。體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明linc00638可以促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的增殖、克隆形成、侵襲遷移,促進(jìn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和成管。體內(nèi)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)linc00638可以促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明linc00638具有促癌作用。分子機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),位于細(xì)胞漿的linc00638可以直接與VEGF-C mRNA結(jié)合,并增加mRNA的穩(wěn)定性,促進(jìn)VEGF-C的表達(dá);此外,linc00638還可以與miR-216b相互作用,調(diào)控miR-216b靶基因KRAS的表達(dá)。以上研究表明長(zhǎng)鏈非編碼RNAlinc00638在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用,為將來(lái)的食管鱗癌的診斷和治療提供了理論基礎(chǔ)和分子標(biāo)志物。
[Abstract]:Esophageal cancer is one of the most common malignant tumors in China. Esophageal squamous cell carcinoma is the pathological type of esophageal cancer in China. At present, the treatment of esophageal squamous cell carcinoma is effective, the prognosis of patients is poor, and the 5-year survival rate is low. Therefore, it is very important to study the molecular mechanism of esophageal squamous cell carcinoma, to provide molecular markers or drug targets for the clinical diagnosis and treatment of esophageal squamous cell carcinoma. A high frequency amplification region of 14q32.2-32.33 was found by genomic sequencing and comparative genomic hybridization analysis of esophageal squamous cell carcinoma tissue samples, and the amplification of this region was closely related to local lymph node metastasis. In order to study the function and mechanism of long chain noncoding RNA in esophageal squamous cell carcinoma, we screened out a long strand noncoding RNA,linc00638. expressed in esophageal squamous cell carcinoma cells in this amplification region, and its expression was associated with DNA amplification. The full length nucleic acid sequence of linc00638 was determined by, Northern blot and PCR experiments in RACE experiment. RNA in situ hybridization of esophageal squamous cell carcinoma and its matched adjacent tissues showed that the cellular localization of linc00638 had changed: in 166 paracancerous tissues, linc00638 was located in the nucleus, while in 84 cancer tissues. Linc00638 was located in the nucleus and cytoplasm of the esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) with the distribution of Linc00638 nucleus and cytoplasm. The higher lymph node metastasis rate was found in the samples of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). In order to explore the molecular mechanism of linc00638 localization, we found that PTB can bind to linc00638 and regulate the expression of linc00638 and cellular localization by RNA pull-down experiment combined with mass spectrometry. Cell experiments in vitro showed that linc00638 could promote the proliferation, clone formation, invasion and migration of esophageal squamous carcinoma cells, and promote the migration of lymphatic endothelial cells and the formation of tubules. Animal experiments in vivo further confirmed that linc00638 can promote lymph node metastasis of esophageal squamous cell carcinoma cells in vivo. These results suggest that linc00638 can promote cancer. The molecular mechanism showed that linc00638 located in cytoplasm could bind directly to VEGF-C mRNA, increase the stability of mRNA and promote the expression of VEGF-C. In addition, linc00638 could interact with miR-216b to regulate the expression of miR-216b target gene KRAS. These studies suggest that long chain noncoding RNAlinc00638 plays an important role in the development of esophageal squamous cell carcinoma and provides a theoretical basis and molecular marker for the diagnosis and treatment of esophageal squamous cell carcinoma in the future.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：2379780