【摘要】：目的克隆基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2基因5'上游1.7 kb啟動(dòng)子,構(gòu)建啟動(dòng)子-螢光素酶報(bào)告基因載體pGL3-MMP-2 pro,探討缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-2α對(duì)MMP-2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法采用PCR擴(kuò)增MMP-2啟動(dòng)子上游區(qū)域基因片段,插入到含有螢光素酶報(bào)告基因的載體PGL3-basic中構(gòu)建重組子,經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定后,將重組子轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞,通過雙螢光素酶活性分析HIF-2α對(duì)MMP-2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果 PCR擴(kuò)增的1.7 kb片段經(jīng)測(cè)序正確無誤,pGL3-MMP-2 pro轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞48 h后,雙螢光素酶活性測(cè)定結(jié)果顯示加CoCl_2誘導(dǎo)的pGL3-MMP-2 pro+HIF-2α組啟動(dòng)子活性顯著高于pGL3-MMP-2 pro組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(均P0.05)。結(jié)論 HIF-2α促進(jìn)了MMP-2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性。
[Abstract]:Objective to clone the 5 'upstream 1.7 kb promoter of matrix metalloproteinase (MMP) 2 gene and construct the promoter luciferase reporter gene vector pGL3-MMP-2 pro, To investigate the effect of hypoxia inducible factor (HIF)-2 偽 on the transcriptional activity of MMP-2 promoter. Methods the upstream region of MMP-2 promoter was amplified by PCR and inserted into the vector PGL3-basic containing luciferase reporter gene. After double enzyme digestion and sequencing, the recombinant gene was transfected into MCF-7 cells. The effect of HIF-2 偽 on the transcriptional activity of MMP-2 promoter was analyzed by double luciferase activity. Results the 1.7 kb fragment amplified by PCR was correctly sequenced, and pGL3-MMP-2 pro was transfected into MCF-7 cells for 48 h. The results of double luciferase activity test showed that the promoter activity of pGL3-MMP-2 pro HIF-2 偽 group induced by CoCl_2 was significantly higher than that of pGL3-MMP-2 pro group, negative control group and blank control group (P0.05). Conclusion HIF-2 偽 promotes the transcriptional activity of MMP-2 promoter.
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院;
【基金】：河南省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(16230041220) 河南省高校青年骨干教師資助項(xiàng)目(2012GGJS-136) 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院聯(lián)合培育基金資助項(xiàng)目(2014QN113) 河南省教育廳高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目(16A310002) 河南省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)項(xiàng)目(201403133)
【分類號(hào)】：R730.2

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本文編號(hào)：2370449