【摘要】：目的克隆基質金屬蛋白酶(MMP)-2基因5'上游1.7 kb啟動子,構建啟動子-螢光素酶報告基因載體pGL3-MMP-2 pro,探討缺氧誘導因子(HIF)-2α對MMP-2啟動子轉錄活性的影響。方法采用PCR擴增MMP-2啟動子上游區(qū)域基因片段,插入到含有螢光素酶報告基因的載體PGL3-basic中構建重組子,經雙酶切和測序鑒定后,將重組子轉染MCF-7細胞,通過雙螢光素酶活性分析HIF-2α對MMP-2啟動子轉錄活性的影響。結果 PCR擴增的1.7 kb片段經測序正確無誤,pGL3-MMP-2 pro轉染MCF-7細胞48 h后,雙螢光素酶活性測定結果顯示加CoCl_2誘導的pGL3-MMP-2 pro+HIF-2α組啟動子活性顯著高于pGL3-MMP-2 pro組、陰性對照組和空白對照組(均P0.05)。結論 HIF-2α促進了MMP-2啟動子轉錄活性。
[Abstract]:Objective to clone the 5 'upstream 1.7 kb promoter of matrix metalloproteinase (MMP) 2 gene and construct the promoter luciferase reporter gene vector pGL3-MMP-2 pro, To investigate the effect of hypoxia inducible factor (HIF)-2 偽 on the transcriptional activity of MMP-2 promoter. Methods the upstream region of MMP-2 promoter was amplified by PCR and inserted into the vector PGL3-basic containing luciferase reporter gene. After double enzyme digestion and sequencing, the recombinant gene was transfected into MCF-7 cells. The effect of HIF-2 偽 on the transcriptional activity of MMP-2 promoter was analyzed by double luciferase activity. Results the 1.7 kb fragment amplified by PCR was correctly sequenced, and pGL3-MMP-2 pro was transfected into MCF-7 cells for 48 h. The results of double luciferase activity test showed that the promoter activity of pGL3-MMP-2 pro HIF-2 偽 group induced by CoCl_2 was significantly higher than that of pGL3-MMP-2 pro group, negative control group and blank control group (P0.05). Conclusion HIF-2 偽 promotes the transcriptional activity of MMP-2 promoter.
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學院;新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院;
【基金】：河南省自然科學基金面上項目(16230041220) 河南省高校青年骨干教師資助項目(2012GGJS-136) 新鄉(xiāng)醫(yī)學院聯合培育基金資助項目(2014QN113) 河南省教育廳高等學校重點科研項目(16A310002) 河南省衛(wèi)生廳醫(yī)學科技攻關項目(201403133)
【分類號】：R730.2

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本文編號：2370449