【摘要】：目的檢測阿帕替尼對結腸癌HCT-116細胞的抑制作用,探討其可能的作用機制及其影響的信號通路。方法 MTT方法檢測不同濃度(0、0.5、1、1.5、2μmol/L)的阿帕替尼對結腸癌HCT-116細胞的毒性作用,并設置卡培他濱陽性對照組;Annexin VFITC/PI雙染法檢測上述不同濃度的阿帕替尼處理后結腸癌HCT-116細胞的凋亡情況,實時熒光定量PCR及Western Blotting技術檢測其對凋亡相關基因及蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的影響,Western blotting技術檢測其對Akt、p-Akt、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白表達的影響。結果 MTT細胞毒性檢測結果表明,阿帕替尼在體外能有效抑制HCT-116細胞的增殖,IC50為1.335μmol/L。Annexin-V/PI雙染法細胞凋亡檢測結果表明,阿帕替尼能顯著的誘導HCT-116細胞凋亡,并且呈濃度依賴性。實時熒光定量PCR和Western blotting結果表明,阿帕替尼可以誘導促凋亡基因Bax和Caspase-3的表達,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達。Western blotting檢測信號通路蛋白的結果表明,在阿帕替尼處理后p-Akt和p-Erk1/2的表達顯著降低,而Akt和Erk總蛋白水平?jīng)]有變化。結論阿帕替尼可通過抑制MAPK/Erk、PI3K/Akt信號轉導通路來實現(xiàn)誘導細胞凋亡,從而達到抑制HCT-116細胞增殖的目的。
[Abstract]:Aim to investigate the inhibitory effect of apatiinib on colon cancer HCT-116 cells and explore its possible mechanism and signal pathway. Methods MTT method was used to detect the toxic effect of apatinib on colon cancer HCT-116 cells at different concentrations (0. 5 ~ 1. 5 渭 mol/L), and capecitabine positive control group was set up. Annexin VFITC/PI double staining was used to detect the apoptosis of HCT-116 cells treated with different concentrations of apatinib, and real-time quantitative PCR and Western Blotting were used to detect the effect of Apatinib on apoptosis related genes and protein Bcl-2,Bax,Caspase-3. Western blotting technique was used to detect the expression of Akt,p-Akt,Erk1/2 and p-Erk1/2 protein. Results the results of MTT cytotoxicity test showed that apatidyl could effectively inhibit the proliferation of HCT-116 cells in vitro, and the apoptosis of HCT-116 cells was detected by double staining with IC50 of 1.335 渭 mol/L.Annexin-V/PI. Apatitini could induce apoptosis of HCT-116 cells in a concentration dependent manner. The results of real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting showed that apatinib could induce the expression of apoptosis-promoting gene Bax and Caspase-3, and inhibit the expression of anti-apoptotic gene Bcl-2 by. Western blotting. The expression of p-Akt and p-Erk1/2 decreased significantly after treatment with apatinib, but the total protein levels of Akt and Erk did not change. Conclusion Apatinide can inhibit the proliferation of HCT-116 cells by inhibiting the MAPK/Erk,PI3K/Akt signal transduction pathway to induce apoptosis.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院腫瘤科;昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院;昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院血管外科;
【分類號】：R735.35

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本文編號：2368931