【摘要】：目的:研究普通肺腺癌細胞A549和具有云南宣威女性肺腺癌特征的細胞系XWLC-05體外不同劑量照射后不同時間生物學行為的變化,并比較A549細胞和XWLC-05細胞不同劑量放射后不同時間生物學行為的變化差異。方法:A549細胞和XWLC-05細胞,接受不同劑量6MvX線照射,各照射組接受劑量分別是4Gy,8 Gy,對照組(OGy)除未接受照射外其他處理均與照射組一致。采用克隆形成實驗檢測放射后細胞存活情況、CCK8增殖實驗檢測放射后殘存細胞增殖能力、Transwell遷移實驗檢測放射后殘存細胞的遷移能力、流式分析放射后殘存細胞周期分布情況,及凋亡的變化、腫瘤干細胞表面標記蛋白CD133,CD44表達情況。Western Blot檢測放射后殘存細胞PCNA、MMP2, P53的表達水平。研究放射后普通肺腺癌細胞A549和宣威肺腺癌細胞XWLC-05生物學行為的變化及差異。結果:①通過平板克隆形成實驗檢測放射后細胞存活情況,結果發(fā)現,隨著放射劑量的增加A549細胞和XWLC-05細胞存活分數逐漸降低,且XWLC-05細胞固有放射敏感性較A549細胞高。②CCK8增殖實驗發(fā)現,X線放射后,殘存A549細胞和XWLC-05細胞增殖能力都呈現先減弱后增強的趨勢,但殘存XWLC-05細胞增殖能力較A549細胞強,尤其在放射后2周表現尤為明顯。殘存A549細胞,XWLC-05細胞不同劑量照射組間增殖能力均相近,并無明顯差異。③Transwell遷移實驗檢測放射后殘存細胞的遷移能力,結果發(fā)現,殘存的A549細胞和XWLC-05細胞遷移能力的變化具有時間依賴性,表現為先抑制后增強。未照射的A549細胞遷移能力較XWLC-05細胞強。在放射后96h內殘存A549細胞遷移能力較殘存XWLC-05細胞強,但在放射336h后,殘存XWLC-05細胞遷移能力較殘存A549細胞強。A549細胞和XWLC-05細胞8 Gy照射組間遷移能力較4Gy照射組弱。④流式分析放射后不同時間(12-192h)殘存細胞周期分布的變化:(1)殘存A549細胞出現G0/G1期阻滯而殘存XWLC-05細胞G0/G1期比例低于對照組。A549和XWLC-05細胞4Gy照射組G0/G1期比例均較8Gy照射組高;(2)殘存A549細胞和XWLC-05細胞G2/M期比例隨著放射時間的增加都呈現出逐漸降低的趨勢,但二者的比例均高于未照射組。兩株細胞4Gy照射組G2/M期比例均較8Gy照射組低;(3) A549細胞和XWLC-05細胞放射后S期都發(fā)生先降低后升高的趨勢。A549細胞照射組S期比例較對照組低,但XWLC-05細胞照射組S期比例在放射后24-48h出現暫時性的降低,隨后開始上升并超過對照組。⑤流式分析放射后不同時間(12-192h)殘存細胞凋亡的變化。A549細胞和XWLC-05細胞放射后,細胞凋亡率都較對照組增加,A549細胞在放射后192h凋亡率達最大,XWLC-05細胞的最高凋亡率發(fā)生在放射后48h。兩株細胞的8Gy照射組凋亡率均比4Gy照射組高。⑥流式分析放射后不同時間(12-192h)殘存細胞腫瘤干細胞的變化。X線放射后,腫瘤干細胞表面CD133和CD44的表達也發(fā)生變化:A549細胞放射后腫瘤干細胞表面CD133和CD44的表達變化不明顯。但XWLC-05細胞照射后腫瘤干細胞表面CD44的表達增加明顯,尤其是放射后192h,XWLC-05細胞照射組CD44的表達比例是對照組的3倍。⑦X線放射后12-336h,MMP-2,PCNA的表達水平與細胞遷移,增殖能力的變化并不完全一致,而P53的表達水與細胞凋亡的變化整體水平相一致。結論:放射后殘存A549和XWLC-05細胞的增殖遷移變化與放射后的時間相關。A549細胞放射后增殖能力受抑制,但有增強的潛力。放射后殘存XWLC-05的增殖能力表現為先減弱后增強,其增殖能力較A549強。殘存A549和XWLC-05細胞放射后較長時間遷移能力均增強,且XWLC-05照射組遷移能力較A549照射組更強。不同劑量間的比較則表現為8Gy照射組的遷移能力較4Gy照射組弱。照射后A549細胞CD133, CD44表達變化不明顯,而殘存XWLC-05細胞CD133, CD44表達明顯增加。MMP-2,PCNA可能不是參與放射后細胞增殖遷移的主要因素,而P53的表達與放射后細胞的凋亡密切相關。
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【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2332744