【摘要】：目的:研究普通肺腺癌細(xì)胞A549和具有云南宣威女性肺腺癌特征的細(xì)胞系XWLC-05體外不同劑量照射后不同時(shí)間生物學(xué)行為的變化,并比較A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞不同劑量放射后不同時(shí)間生物學(xué)行為的變化差異。方法:A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞,接受不同劑量6MvX線照射,各照射組接受劑量分別是4Gy,8 Gy,對(duì)照組(OGy)除未接受照射外其他處理均與照射組一致。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)放射后細(xì)胞存活情況、CCK8增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)放射后殘存細(xì)胞增殖能力、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)放射后殘存細(xì)胞的遷移能力、流式分析放射后殘存細(xì)胞周期分布情況,及凋亡的變化、腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)記蛋白CD133,CD44表達(dá)情況。Western Blot檢測(cè)放射后殘存細(xì)胞PCNA、MMP2, P53的表達(dá)水平。研究放射后普通肺腺癌細(xì)胞A549和宣威肺腺癌細(xì)胞XWLC-05生物學(xué)行為的變化及差異。結(jié)果:①通過(guò)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)放射后細(xì)胞存活情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著放射劑量的增加A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)逐漸降低,且XWLC-05細(xì)胞固有放射敏感性較A549細(xì)胞高。②CCK8增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),X線放射后,殘存A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞增殖能力都呈現(xiàn)先減弱后增強(qiáng)的趨勢(shì),但殘存XWLC-05細(xì)胞增殖能力較A549細(xì)胞強(qiáng),尤其在放射后2周表現(xiàn)尤為明顯。殘存A549細(xì)胞,XWLC-05細(xì)胞不同劑量照射組間增殖能力均相近,并無(wú)明顯差異。③Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)放射后殘存細(xì)胞的遷移能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn),殘存的A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞遷移能力的變化具有時(shí)間依賴(lài)性,表現(xiàn)為先抑制后增強(qiáng)。未照射的A549細(xì)胞遷移能力較XWLC-05細(xì)胞強(qiáng)。在放射后96h內(nèi)殘存A549細(xì)胞遷移能力較殘存XWLC-05細(xì)胞強(qiáng),但在放射336h后,殘存XWLC-05細(xì)胞遷移能力較殘存A549細(xì)胞強(qiáng)。A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞8 Gy照射組間遷移能力較4Gy照射組弱。④流式分析放射后不同時(shí)間(12-192h)殘存細(xì)胞周期分布的變化:(1)殘存A549細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1期阻滯而殘存XWLC-05細(xì)胞G0/G1期比例低于對(duì)照組。A549和XWLC-05細(xì)胞4Gy照射組G0/G1期比例均較8Gy照射組高;(2)殘存A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞G2/M期比例隨著放射時(shí)間的增加都呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢(shì),但二者的比例均高于未照射組。兩株細(xì)胞4Gy照射組G2/M期比例均較8Gy照射組低;(3) A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞放射后S期都發(fā)生先降低后升高的趨勢(shì)。A549細(xì)胞照射組S期比例較對(duì)照組低,但XWLC-05細(xì)胞照射組S期比例在放射后24-48h出現(xiàn)暫時(shí)性的降低,隨后開(kāi)始上升并超過(guò)對(duì)照組。⑤流式分析放射后不同時(shí)間(12-192h)殘存細(xì)胞凋亡的變化。A549細(xì)胞和XWLC-05細(xì)胞放射后,細(xì)胞凋亡率都較對(duì)照組增加,A549細(xì)胞在放射后192h凋亡率達(dá)最大,XWLC-05細(xì)胞的最高凋亡率發(fā)生在放射后48h。兩株細(xì)胞的8Gy照射組凋亡率均比4Gy照射組高。⑥流式分析放射后不同時(shí)間(12-192h)殘存細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞的變化。X線放射后,腫瘤干細(xì)胞表面CD133和CD44的表達(dá)也發(fā)生變化:A549細(xì)胞放射后腫瘤干細(xì)胞表面CD133和CD44的表達(dá)變化不明顯。但XWLC-05細(xì)胞照射后腫瘤干細(xì)胞表面CD44的表達(dá)增加明顯,尤其是放射后192h,XWLC-05細(xì)胞照射組CD44的表達(dá)比例是對(duì)照組的3倍。⑦X線放射后12-336h,MMP-2,PCNA的表達(dá)水平與細(xì)胞遷移,增殖能力的變化并不完全一致,而P53的表達(dá)水與細(xì)胞凋亡的變化整體水平相一致。結(jié)論:放射后殘存A549和XWLC-05細(xì)胞的增殖遷移變化與放射后的時(shí)間相關(guān)。A549細(xì)胞放射后增殖能力受抑制,但有增強(qiáng)的潛力。放射后殘存XWLC-05的增殖能力表現(xiàn)為先減弱后增強(qiáng),其增殖能力較A549強(qiáng)。殘存A549和XWLC-05細(xì)胞放射后較長(zhǎng)時(shí)間遷移能力均增強(qiáng),且XWLC-05照射組遷移能力較A549照射組更強(qiáng)。不同劑量間的比較則表現(xiàn)為8Gy照射組的遷移能力較4Gy照射組弱。照射后A549細(xì)胞CD133, CD44表達(dá)變化不明顯,而殘存XWLC-05細(xì)胞CD133, CD44表達(dá)明顯增加。MMP-2,PCNA可能不是參與放射后細(xì)胞增殖遷移的主要因素,而P53的表達(dá)與放射后細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2332744