【摘要】：目的研究高轉(zhuǎn)移肺腺癌細(xì)胞株的腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特征。方法肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549接種裸鼠皮下成瘤后,取肺的轉(zhuǎn)移灶,通過機(jī)械分離法獲取肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞,體外擴(kuò)大培養(yǎng)后,再次接種裸鼠。如此反復(fù)接種裸鼠,獲得穩(wěn)定肺轉(zhuǎn)移的細(xì)胞株A549-V13。采用無血清懸浮培養(yǎng)及PKH26染色確定A549-V13存在腫瘤干細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)和分選A549和A549-V13中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133的表達(dá)并進(jìn)行體內(nèi)外生物學(xué)特征實(shí)驗(yàn)。結(jié)果建立穩(wěn)定高轉(zhuǎn)移A549-V13細(xì)胞株。無血清懸浮培養(yǎng)A549-V13,7天后形成的球形細(xì)胞團(tuán)中存在單個(gè)PKH26陽性細(xì)胞。FACS檢測(cè)顯示,與A549中CD133~+細(xì)胞相比,高轉(zhuǎn)移A549-V13細(xì)胞株中CD133~+細(xì)胞的表達(dá)比例顯著提高4.85倍。A549-V13中CD133~+細(xì)胞具有更強(qiáng)的自我更新能力,侵襲能力提高1.42倍,耐藥能力也顯著增強(qiáng),其IC50提高1.26倍,A549-V13的CD133~+細(xì)胞在裸鼠皮下接種2×10~2個(gè)細(xì)胞3月致瘤4/6,而接種2×10~2個(gè)A549的CD133~+細(xì)胞3月才致瘤2/6。結(jié)論建立高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞株A549-V13,伴隨CD133~+細(xì)胞表達(dá)比例的增加,其體內(nèi)外生物學(xué)功能顯著增強(qiáng)。
[Abstract]:Objective to study the biological characteristics of tumor stem cells in high metastatic lung adenocarcinoma cell lines. Methods Lung adenocarcinoma cell line A549 was inoculated into nude mice to form subcutaneous tumor. Lung metastatic cells were obtained by mechanical separation. After expanded culture in vitro, nude mice were inoculated again. After repeated inoculation in nude mice, a stable lung metastasis cell line A549-V13 was obtained. Serum free suspension culture and PKH26 staining were used to determine the existence of tumor stem cells in A549-V13. The expression of tumor stem cell marker (CD133) in A549 and A549-V13 was detected by flow cytometry (FACS) and the biological characteristics of A549 and A549-V13 were studied in vitro and in vivo. Results stable and highly metastatic A549-V13 cell lines were established. A single PKH26 positive cell was found in the globular cell mass formed after 7 days of serum-free suspension culture of A549-V13C. FACS analysis showed that compared with A549, CD133~ cells were found to be positive. The expression rate of CD133~ cells in high metastatic A549-V13 cell lines was significantly increased by 4.85 times. CD133~ cells in A549-V13 had a stronger self-renewal ability, a 1.42 fold increase in invasion ability, and a significant increase in drug resistance, and a 1.26 fold increase in IC50. A549-V13 CD133~ cells were inoculated subcutaneously for 2 脳 10 ~ 2 cells in nude mice for 3 months to induce tumor 4 / 6, while CD133~ cells inoculated with 2 脳 10 ~ 2 A549 cells for 3 months resulted in 2 / 6 tumors. Conclusion the establishment of high metastatic lung cancer cell line A549-V13 was accompanied by an increase in the expression of CD133~ cells, and its biological function in vivo and in vitro was significantly enhanced.
【作者單位】： 北京國家癌癥中心/中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院細(xì)胞及分子生物學(xué)研究室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31371445) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)青年科學(xué)家專題(2014AA020537)
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2332010