【摘要】：研究背景及目的胰腺癌是一種常見的惡性腫瘤,起病隱匿,發(fā)病迅速,預(yù)后極差,除早期手術(shù)治療外,其他治療方法收效甚微。腫瘤的生物治療是腫瘤治療的新趨勢,同時也是胰腺癌綜合診治的研究熱點。研究開發(fā)能夠激活宿主的天然免疫防御機制或直接使用天然或基因工程產(chǎn)生的靶向藥物是生物治療的核心。白細(xì)胞介素27(Interleukin-27, IL-27)是來源于IL-6/IL-12細(xì)胞因子家族的異源二聚體細(xì)胞因子,其對不同類型的免疫細(xì)胞具有廣泛調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)IL-27不僅可以通過調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗腫瘤作用,并具有直接殺傷腫瘤細(xì)胞的功能。IL-27對于機體的免疫功能具有調(diào)節(jié)作用,可以作為潛在的腫瘤免疫治療因子,然而關(guān)于IL-27對于胰腺癌的相關(guān)作用研究甚少。為了更好的了解IL-27的生物學(xué)功能及其對胰腺癌細(xì)胞的作用,本研究擬通過探討IL-27對胰腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為可能存在的直接和間接的影響以及可能的作用機制,為IL-27可能成為胰腺癌生物治療新靶點提供理論及實驗依據(jù)。研究內(nèi)容一、檢測IL-27對多株胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及遷移侵襲能力的影響。二、建立巨噬細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系,檢測IL-27是否能通過影響巨噬細(xì)胞干預(yù)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。研究方法一、利用Real-time PCR及Western blot技術(shù)檢測多株胰腺癌細(xì)胞中IL-27特異性受體WSX-1的表達(dá)情況。IL-27直接作用于胰腺癌細(xì)胞后,CCK-8法檢測胰腺癌細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡情況,利用Transwell法檢測胰腺癌的遷移、侵襲能力。二、采用PMA將人組織淋巴瘤細(xì)胞株U937細(xì)胞誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞(Mφ),流式細(xì)胞檢測巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD68分子的表達(dá)情況。采用IL-4將Mφφ誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞,Real-time PCR檢測M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD86、IL-12p40,M2犁巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206的表達(dá)情況,驗證M2型巨噬細(xì)胞是否誘導(dǎo)成功。IL-27刺激M2型巨噬細(xì)胞,Real-time PCR檢測CD86、IL-12p40、CD206的表達(dá),觀察IL-27對于M2型巨噬細(xì)胞表型的影響。建立M2型巨噬細(xì)胞/胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系,加入IL-27進(jìn)行刺激,CCK-8檢測胰腺癌細(xì)胞增殖能力的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡情況,Western blot檢測細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)蛋白的變化。利用Transwell法檢測胰腺癌的遷移、侵襲能力改變。Western blot檢測侵襲相關(guān)蛋白,探索可能的作用機制。結(jié)果一、多株胰腺癌細(xì)胞內(nèi)WSX-1的表達(dá)水平顯著低于脾組織及U937細(xì)胞。IL-27對胰腺癌細(xì)胞的增殖能力、周期、凋亡、遷移及侵襲能力無明顯的直接作用。二、PMA誘導(dǎo)的U937細(xì)胞經(jīng)流式檢測CD68分子的表達(dá)顯著升高,說明巨噬細(xì)胞(Mφ)誘導(dǎo)成功。IL-4誘導(dǎo)Mφ為M2型巨噬細(xì)胞后,M2型巨噬細(xì)胞的CD86、IL-12p40顯著低于Mφ,而CD206顯著高于Mφ,提示M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成功。M2型巨噬細(xì)胞的IL-27特異性受體WSX-1的表達(dá)水平也顯著高于Mφ。IL-27刺激M2型巨噬細(xì)胞后,CD86、IL-12p40表達(dá)顯著升高,CD206表達(dá)顯著降低,提示IL-27可能誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化。在M2型巨噬細(xì)胞/胰腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入IL-27后,胰腺癌細(xì)胞的增殖能力、遷移及侵襲能力顯著下降,吉西他濱誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡程度顯著上升。Western blot顯示,在共培養(yǎng)體系中加入IL-27后,胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4、CyclinD1表達(dá)下降,凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-9顯著上調(diào),侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白p-STAT3, JAK2, vimentin顯著下調(diào)。結(jié)論IL-27特異性受體WSX-1在胰腺癌細(xì)胞株內(nèi)表達(dá)水平均較低,IL-27無明顯的直接抑制胰腺癌細(xì)胞的作用。U937可以在體外誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞,利用共培養(yǎng)體系可以研究巨噬細(xì)胞與胰腺癌細(xì)胞的相互作用,IL-27可以在體外將M2型巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化,從而間接抑制胰腺癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9
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本文編號：2293710