【摘要】：苦蕎凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)是一類兼具核糖體失活蛋白N-糖苷酶活性和蘆丁水解酶活性的糖蛋白,具有顯著的抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的功能。先前研究表明,TBL可以下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116中包括miR-135a和miR-135b在內(nèi)的一些oncomiRs的表達(dá),并且可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的增殖。因此,我們推測(cè)TBL可能通過調(diào)控oncomiRs從而抑制HCT116細(xì)胞的增殖。本研究中,我們構(gòu)建了包含miR-135a和miR-135b結(jié)合位點(diǎn)的腺瘤性結(jié)腸息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)的3'-UTR區(qū)。雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)表明,經(jīng)過TBL處理后,實(shí)驗(yàn)組的熒光素酶活性較對(duì)照組高,而且用miR-135ab的反義核酸anti-miR-135ab處理后和實(shí)驗(yàn)組有相似的結(jié)果。Western印跡分析表明,TBL處理HCT116細(xì)胞24 h后,細(xì)胞中APC和p-β-catenin的表達(dá)上調(diào),總β-catenin的表達(dá)下調(diào),且存在劑量依賴效應(yīng),而對(duì)GSK-3β的表達(dá)無(wú)明顯影響。進(jìn)一步探究了TBL進(jìn)入細(xì)胞的方式,我們發(fā)現(xiàn),加入TBL作用2 h后,其主要存在于HCT116細(xì)胞的表面,部分進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,在細(xì)胞表面可以同半乳糖凝集素galectin-3競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合細(xì)胞膜表面受體,并且存在劑量和時(shí)間依賴性。這些結(jié)果表明:TBL以HCT116細(xì)胞表面的galectin-3受體為靶點(diǎn),通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,進(jìn)而調(diào)控HCT116細(xì)胞中miR-135ab的表達(dá),影響Wnt信號(hào)通路而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖。
[Abstract]:Tartary buckwheat lectin (tartary buckwheat lectin,TBL) is a kind of glycoprotein with both ribosomal inactivating protein N-glycosidase activity and rutin hydrolase activity. Previous studies have shown that TBL can down-regulate the expression of some oncomiRs including miR-135a and miR-135b in HCT116 of colon cancer cells and inhibit the proliferation of HCT116 cells. Therefore, we speculate that TBL may inhibit the proliferation of HCT116 cells by regulating oncomiRs. In this study, we constructed the 3'-UTR region of adenomatous colonic polyposis gene (adenomatous polyposis coli,APC containing miR-135a and miR-135b binding sites. The double luciferase report system showed that the luciferase activity of the experimental group was higher than that of the control group after TBL treatment, and the results were similar to those of the experimental group treated with miR-135ab antisense nucleic acid anti-miR-135ab. Western blot analysis showed that TBL treated HCT116 cells for 24 h. The expression of APC and p- 尾-catenin was up-regulated and the expression of total 尾-catenin was down-regulated in a dose-dependent manner, but had no effect on the expression of GSK-3 尾. We found that TBL mainly existed on the surface of HCT116 cells after 2 h of TBL treatment, and some of them entered into the cells. On the cell surface, galactose agglutinin (galectin-3) can compete with galactose agglutinin (galectin-3) to bind to cell membrane receptors in a dose-and time-dependent manner. These results suggest that TBL targeting the galectin-3 receptor on the surface of HCT116 cells enters the cells through endocytosis and then regulates the expression of miR-135ab in HCT116 cells and inhibits the proliferation of colon cancer cells by affecting the Wnt signaling pathway.
【作者單位】： 化學(xué)生物學(xué)與分子工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山西大學(xué)生物技術(shù)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31171659/31300653) 山西省科技平臺(tái)項(xiàng)目(No.2014091028)資助~~
【分類號(hào)】：R735.35

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本文編號(hào)：2288268