【摘要】：苦蕎凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)是一類兼具核糖體失活蛋白N-糖苷酶活性和蘆丁水解酶活性的糖蛋白,具有顯著的抑制結(jié)腸癌細胞增殖的功能。先前研究表明,TBL可以下調(diào)結(jié)腸癌細胞HCT116中包括miR-135a和miR-135b在內(nèi)的一些oncomiRs的表達,并且可以抑制結(jié)腸癌細胞HCT116的增殖。因此,我們推測TBL可能通過調(diào)控oncomiRs從而抑制HCT116細胞的增殖。本研究中,我們構(gòu)建了包含miR-135a和miR-135b結(jié)合位點的腺瘤性結(jié)腸息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)的3'-UTR區(qū)。雙熒光素酶報告系統(tǒng)表明,經(jīng)過TBL處理后,實驗組的熒光素酶活性較對照組高,而且用miR-135ab的反義核酸anti-miR-135ab處理后和實驗組有相似的結(jié)果。Western印跡分析表明,TBL處理HCT116細胞24 h后,細胞中APC和p-β-catenin的表達上調(diào),總β-catenin的表達下調(diào),且存在劑量依賴效應,而對GSK-3β的表達無明顯影響。進一步探究了TBL進入細胞的方式,我們發(fā)現(xiàn),加入TBL作用2 h后,其主要存在于HCT116細胞的表面,部分進入細胞內(nèi)部,在細胞表面可以同半乳糖凝集素galectin-3競爭結(jié)合細胞膜表面受體,并且存在劑量和時間依賴性。這些結(jié)果表明:TBL以HCT116細胞表面的galectin-3受體為靶點,通過內(nèi)吞作用進入細胞,進而調(diào)控HCT116細胞中miR-135ab的表達,影響Wnt信號通路而抑制結(jié)腸癌細胞的增殖。
[Abstract]:Tartary buckwheat lectin (tartary buckwheat lectin,TBL) is a kind of glycoprotein with both ribosomal inactivating protein N-glycosidase activity and rutin hydrolase activity. Previous studies have shown that TBL can down-regulate the expression of some oncomiRs including miR-135a and miR-135b in HCT116 of colon cancer cells and inhibit the proliferation of HCT116 cells. Therefore, we speculate that TBL may inhibit the proliferation of HCT116 cells by regulating oncomiRs. In this study, we constructed the 3'-UTR region of adenomatous colonic polyposis gene (adenomatous polyposis coli,APC containing miR-135a and miR-135b binding sites. The double luciferase report system showed that the luciferase activity of the experimental group was higher than that of the control group after TBL treatment, and the results were similar to those of the experimental group treated with miR-135ab antisense nucleic acid anti-miR-135ab. Western blot analysis showed that TBL treated HCT116 cells for 24 h. The expression of APC and p- 尾-catenin was up-regulated and the expression of total 尾-catenin was down-regulated in a dose-dependent manner, but had no effect on the expression of GSK-3 尾. We found that TBL mainly existed on the surface of HCT116 cells after 2 h of TBL treatment, and some of them entered into the cells. On the cell surface, galactose agglutinin (galectin-3) can compete with galactose agglutinin (galectin-3) to bind to cell membrane receptors in a dose-and time-dependent manner. These results suggest that TBL targeting the galectin-3 receptor on the surface of HCT116 cells enters the cells through endocytosis and then regulates the expression of miR-135ab in HCT116 cells and inhibits the proliferation of colon cancer cells by affecting the Wnt signaling pathway.
【作者單位】： 化學生物學與分子工程教育部重點實驗室山西大學生物技術研究所;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.31171659/31300653) 山西省科技平臺項目(No.2014091028)資助~~
【分類號】：R735.35

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本文編號：2288268