【摘要】：目的：探討核因子κB (nuclear factor-κB, NF-κB)信號(hào)傳導(dǎo)通路中IKKβ、p65基因沉默后對(duì)過表達(dá)Fas相關(guān)因子1(Fas associated factor 1, FAF1)的HGC-27胃癌細(xì)胞的影響,以及NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路在幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, Hp)感染相關(guān)性胃癌中的作用,從而明確Hp感染相關(guān)性胃癌中FAF1與NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路之間的關(guān)系。方法：構(gòu)建針對(duì)IKKβ、p65的siRNA慢病毒表達(dá)載體(LV-IKKβ-RNAi、 LV-p65-RNAi),轉(zhuǎn)染過表達(dá)FAF1的HGC-27胃癌細(xì)胞珠(Lenti-FAF1/HGC-27),實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡(Western blot)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后IKKP、p65、FAF1 mRNA和蛋白表達(dá)水平變化。應(yīng)用CCK8法檢測(cè)siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力的變化。用Hp培養(yǎng)濾液感染經(jīng)siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,用qRT-PCR和Western blot法檢測(cè)Hp感染前后IKKβ、p65、 FAF1mRNA和蛋白表達(dá)水平變化。進(jìn)一步采用Western blot法檢測(cè)Hp感染后NF-κB信號(hào)通路上IKKα/β、p65、IKBα及其相應(yīng)磷酸化基因(P-IKKa/β, P-p65, P-IκBα)蛋白表達(dá)水平變化,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)腫瘤壞死因子a (tumor necrosis factor-a, TNF-a)、白介素-8 (interleukin-8, IL-8)等炎性細(xì)胞因子濃度變化。結(jié)果：1.成功構(gòu)建siRNA慢病毒表達(dá)載體LV-IKKβ-RNAi、LV-p65-RNAi和LV-NC-RNAi,測(cè)序結(jié)果表明,構(gòu)建的重組序列是正確的。2.成功包裝出所需要的慢病毒濃縮液,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后可見大量紅色熒光產(chǎn)生。熒光法測(cè)定慢病毒滴度結(jié)果顯示LV-IKKp-RNAi滴度為3×108TU/ml, LV-p65-RNAi滴度為6×108TU/ml, LV-NC-RNAi滴度為5×108TU/ml。3.細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染針對(duì)IKKβ和p65的siRNA慢病毒后,LV-IKKp-RNAi和LV-p65-RNAi組細(xì)胞原有的梭形形態(tài)變成不規(guī)則形,而空載轉(zhuǎn)染組(LV-NC-RNAi)細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化。轉(zhuǎn)染后72 h,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率達(dá)到90%。4.細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染針對(duì)IKKβ和p65的siRNA'慢病毒后,LV-IKKβ-RNAi和LV-p65-RNAi組IKKβ和p65 mRNA表達(dá)顯著低于LV-NC-RNAi組和未轉(zhuǎn)染組(P均0.01)。LV-NC-RNAi組與未轉(zhuǎn)染組IKKβ、p65 mRNA表達(dá)無顯著差異(P0.05)。轉(zhuǎn)染siRNA'慢病毒后,各組間FAF1 mRNA表達(dá)無顯著差異(P0.05)5.Hp培養(yǎng)濾液感染后,LV-NC-RNAi組和未轉(zhuǎn)染組IKKβ、p65 mRNA和蛋白表達(dá)都顯著高于感染前(P0.01),而FAF1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著低于感染前(P0.01)；Hp感染后LV-IKKp-RNAi組和LV-p65-RNAi組IKKβ、p65、FAF1 mRNA和蛋白表達(dá)與感染前相比無顯著差異(P0.05)。6.CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與LV-NC-RNAi組和未轉(zhuǎn)染組相比,LV-IKKp-RNAi組和LV-p65-RNAi組細(xì)胞增殖水平明顯升高(P0.01),LV-NC-RNAi組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖水平無顯著差異(P0.05)。7.Hp培養(yǎng)濾液感染后,LV-IKKβ-RNAi、LV-p65-RNAi組NF-κB信號(hào)通路上IKKa/β、p65蛋白表達(dá)顯著低于未轉(zhuǎn)染組和LV-NC-RNAi組(P0.05),IκBα蛋白表達(dá)顯著高于未轉(zhuǎn)染組和LV-NC-RNAi組(P0.05);磷酸化IKKα/β、p65、IκBα(P-IKKα/β, P-p65, P-IκBa)蛋白表達(dá)顯著低于未轉(zhuǎn)染組和LV-NC-RNAi組(P0.05)。LV-NC-RNAi組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞蛋白水平無顯著差異(P0.05)。8.Hp培養(yǎng)濾液感染后,LV-IKKp-RNAi、LV-p65-RNAi組炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-8濃度顯著低于未轉(zhuǎn)染組和LV-NC-RNAi組(P0.01)。LV-NC-RNAi組與未轉(zhuǎn)染組TNF-α、IL-8表達(dá)無顯著差異(P0.05)。結(jié)論：通過針對(duì)IKKβ和p65的siRNA慢病毒沉默NF-κB信號(hào)通路基因,能夠影響過表達(dá)FAF1胃癌細(xì)胞的增殖,并抑制Hp感染引起的FAF1表達(dá)下調(diào)及IKKβ、p65表達(dá)上調(diào)；并且還能夠抑制Hp感染調(diào)控的FAF1過表達(dá)胃癌細(xì)胞通路活化及相關(guān)細(xì)胞炎癥反應(yīng)。由此可見,Hp感染可能通過介導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路下調(diào)抑癌因子FAF1的表達(dá)。這可能為將NF-κB通路作為胃癌的治療靶點(diǎn)提供新的思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于成功,李敏,莫?jiǎng)χ?蕭樹東;胃癌細(xì)胞垂體腺苷環(huán)化酶激活肽相關(guān)受體分析[J];胃腸病學(xué);2000年02期

2 薛英威,耿敬姝,劉曉民,劉立人,高小敏,陳國林,張豈凡,趙家宏;胃癌細(xì)胞的流式分析及臨床意義[J];腫瘤防治研究;2000年03期

3 陳堅(jiān),林庚金,錢立平,程建,施冬云,張亞東,劉珊林;內(nèi)源性活性氧水平及錳型超氧化物歧化酶的表達(dá)與胃癌細(xì)胞分化、增殖相關(guān)[J];生物物理學(xué)報(bào);2003年02期

4 李瑩,藥立波,韓炯,王立峰,韓月恒,劉新平,林樹新,俞強(qiáng);胃癌細(xì)胞抗脫落凋亡的分子機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

5 羅和生,王維,包鵬輝,張翼;核因子-κB活性增強(qiáng)參與胃癌細(xì)胞長春新堿耐藥[J];中華消化雜志;2004年08期

6 劉冀紅,曹偉新,紀(jì)玉寶,張軼,劉炳亞,朱正綱,燕敏,林言箴;右旋甲硫氨酸對(duì)胃癌細(xì)胞作用初探[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2005年01期

7 齊元玲;于皆平;劉啟勝;鄧全軍;曹俊;于紅剛;;抑癌基因PTEN在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年03期

8 何必立;呂賓;徐毅;苗青;范一宏;;溫郁金對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用及其對(duì)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2006年09期

9 郭強(qiáng);李榮;李慶芳;夏紹友;杜曉輝;王立生;;高表達(dá)鞘氨醇激酶對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年12期

10 陳先來;肖曉旦;楊榮;劉建平;;基于誤差反向傳播神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的胃癌細(xì)胞識(shí)別研究[J];中國循證醫(yī)學(xué)雜志;2007年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 韓霜;雷婷;韓者藝;劉杰;郭雪艷;丁睿;吳開春;丁杰;樊代明;;分化抑制因子1對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

2 陳韶華;吳靈嬌;吳鴻儒;吳雅春;厲有名;;低濃度酒精對(duì)胃癌細(xì)胞活性及周期抑制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 陳韶華;吳靈嬌;吳鴻儒;吳雅春;厲有名;;低濃度酒精對(duì)胃癌細(xì)胞活性及周期抑制[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

4 李娜;郭瑞芳;李文梅;邵建敏;汪浩;趙康;李書婷;王敬強(qiáng);王融;徐寧志;劉斯奇;呂有勇;;大蒜素處理在胃癌細(xì)胞中引發(fā)的蛋白質(zhì)表達(dá)響應(yīng)[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

5 ;多西紫杉醇對(duì)胃癌細(xì)胞作用及其機(jī)制的研究[A];第四屆中國腫瘤大會(huì)中國藥理學(xué)會(huì)腫瘤藥理專業(yè)委員會(huì)分會(huì)場(chǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

6 樓儷泓;;15-羥基前列腺素脫氫酶對(duì)胃癌細(xì)胞周期影響的試驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

7 朗瑋;;中藥方劑1號(hào)對(duì)胃癌細(xì)胞體外生長及細(xì)胞粘附分子的影響[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化專業(yè)第八次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省中西醫(yī)結(jié)合消化系疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

8 鞏龍靜;馬君;周涵婧;鄭榮兒;;胃癌細(xì)胞的表面增強(qiáng)拉曼光譜研究[A];中國光學(xué)學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2011年

9 謝少茹;沈洪;趙崧;張國新;郝波;劉增巍;施瑞華;;黃芪多糖對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第十九次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2007年

10 劉文超;任軍;張學(xué)庸;劉智廣;張曉楠;;防御素對(duì)胃癌細(xì)胞殺傷的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前8條

1 記者 陸葉清;發(fā)現(xiàn)抑制胃癌細(xì)胞的重要基因[N];上�？萍紙�(bào);2010年

2 衣曉峰　喬蕤琳 記者 趙宇清;抑制胃癌細(xì)胞生長研究有新發(fā)現(xiàn)[N];黑龍江日?qǐng)?bào);2010年

3 記者 衣曉峰　通訊員 喬蕤琳;維生素E衍生物能抑制胃癌細(xì)胞生長[N];健康報(bào);2010年

4 王振嶺;我國抑制胃癌細(xì)胞生長研究有重要發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

5 王振嶺;抗癌藥抑制胃癌細(xì)胞生長研究獲重要發(fā)現(xiàn)[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2002年

6 王振嶺;7種抗癌藥體外抑制胃癌細(xì)胞的研究有新發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

7 張中橋;胃癌細(xì)胞MDR機(jī)制研究取得新進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

8 吳一福 蘇玉軍;白藜蘆醇可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞脫落凋亡[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李雙玲;IGF-1通過抑制Fox01核保留促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 胡偉國;腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中Thy-1激活誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 周韻斕;應(yīng)激條件下胃癌細(xì)胞高表達(dá)線粒體活性氧和前梯度蛋白2促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

4 徐同鵬;SP1誘導(dǎo)的長非編碼RNA TINCR通過調(diào)控KLF2 mRNA穩(wěn)定性影響胃癌細(xì)胞的增殖與凋亡[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王暢;miR-34a通過miR-34a-c-myc/Bmi-1負(fù)反饋通路負(fù)調(diào)控胃癌干細(xì)胞樣特性[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 羅貫虹;MGr1-Ag/37LRP參與PrP~C介導(dǎo)的胃癌細(xì)胞多藥耐藥[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

7 默董亮;人類解旋酶RecQL4調(diào)控胃癌細(xì)胞耐藥性分子機(jī)制研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2016年

8 劉皎婧;PI3K/Akt/GSK3β/p190ARhoGAP/RhoA信號(hào)通路在Wnt5a誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞遷移中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

9 Muhammad Kamran（卡姆拉）;[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

10 王瑛;PKGⅡ?qū)PA誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞徖移及RhoA和Rac1激活的影響[D];江蘇大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林光錟;CyclinA/CDK2介導(dǎo)BAG3 Ser291位點(diǎn)的磷酸化并影響胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 蔡洙哲;p12-LOX對(duì)胃癌細(xì)胞MKN-28的增殖和遷移的影響[D];延邊大學(xué);2015年

3 李龍;Her-2高表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響[D];長江大學(xué);2015年

4 趙婷婷;GPIbα對(duì)胃癌細(xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的影響及其機(jī)制的初步探討[D];蘭州大學(xué);2015年

5 謝瑞霞;盤狀結(jié)構(gòu)域受體1調(diào)控上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響胃癌侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 王東倉;NM23-H2通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞的侵襲遷移[D];蘭州大學(xué);2015年

7 朱瑞雪;NDRG2基因?qū)ξ赴┘?xì)胞惡性表型的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

8 董凱楠;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 單爭爭;二甲雙胍在IL-6誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞EMT中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

10 田莉;NM23-H2通過誘導(dǎo)自噬抑制胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生[D];蘭州大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2261797