【摘要】：研究背景和目的：卵巢上皮性惡性腫瘤是惡性程度最高,致死率最高的婦產(chǎn)科惡性腫瘤。因?qū)τ谄浣M織起源和發(fā)病機(jī)制知之甚少,盡管醫(yī)學(xué)界對(duì)卵巢癌早期診斷和創(chuàng)新治療方面都做出了諸多嘗試和努力,但效果總體上仍不盡人意。過(guò)去許多研究都曾積極仔細(xì)的在卵巢本身尋找卵巢癌的癌前病變,以期獲得早期診斷和干預(yù)的有效手段,但未能成功。近十年來(lái),眾多研究發(fā)現(xiàn)卵巢上皮性惡性腫瘤的癌前病變常發(fā)生于卵巢之外,卵巢癌并非單一的病種,而是一組在形態(tài)學(xué),免疫表型,分子遺傳學(xué)表型上來(lái)說(shuō),具有高度異質(zhì)性的病變。這提示不同亞型的卵巢癌具有不同的病理起源、前驅(qū)病變和發(fā)病機(jī)制。據(jù)此,對(duì)于卵巢癌的病理學(xué)分類在過(guò)去的十年中發(fā)生了巨大的變化。目前國(guó)際上公認(rèn)的最新的分類方法是依據(jù)腫瘤的不同的臨床和分子遺傳學(xué)特征將卵巢癌分為兩大類型,1型和2型,即卵巢癌分型的二元論。在卵巢1型上皮性腫瘤中,子宮內(nèi)膜樣癌,透明細(xì)胞癌和粘液漿液性癌近年來(lái)被發(fā)現(xiàn)很可能源自于異位于卵巢的子宮內(nèi)膜,而與上述腫瘤不同,1型腫瘤中的粘液性腫瘤的組織病理起源至今尚無(wú)定論。卵巢的原發(fā)粘液性腫瘤在2014版世界衛(wèi)生組織婦產(chǎn)科腫瘤分類方法中,被劃分為在形態(tài)學(xué)上具有腸型分化的特征卵巢上皮性腫瘤。卵巢的粘液性腫瘤的譜系中包括粘液性囊腺瘤,不典型增生性粘液性腫瘤或交界性粘液性腫瘤及粘液性囊腺癌,從發(fā)病機(jī)制上來(lái)說(shuō)常為逐步發(fā)生發(fā)展,呈從良性到交界性再到惡性的過(guò)程,因此在卵巢粘液性癌中�？梢�(jiàn)到良性粘液性上皮及交界性粘液性病灶的成分。但因卵巢自身的解剖結(jié)構(gòu)不具有正常粘液性上皮的成分,卵巢表面上皮的粘液性化生也非常罕見(jiàn),卵巢粘液性腫瘤的組織病理起源至今是一個(gè)謎。卵巢Brenner腫瘤是一類由形態(tài)學(xué)上以類似于泌尿上皮的移行細(xì)胞巢團(tuán)為特征的卵巢上皮性腫瘤。基于其組織形態(tài)學(xué)特征,目前大部分學(xué)者認(rèn)為Brenner腫瘤來(lái)源于位于輸卵管腹膜交界處的Walthard細(xì)胞巢。有趣的是,在Brenner腫瘤特征性的移行細(xì)胞樣巢團(tuán)中經(jīng)常可觀察到一圈內(nèi)襯的高柱狀粘液上皮,并且有研究發(fā)現(xiàn)25%-30%的Brenner腫瘤可同時(shí)伴發(fā)卵巢粘液性腫瘤,而卵巢粘液性腫瘤發(fā)生率與Walthard細(xì)胞巢的相關(guān)性也顯著高于對(duì)照組。鑒于非生殖細(xì)胞來(lái)源的卵巢粘液性腫瘤在形態(tài)學(xué)上與卵巢的Brenner腫瘤有緊密關(guān)聯(lián),有理由推測(cè)卵巢粘液性腫瘤可能起源于卵巢的Brenner腫瘤,但這一假說(shuō)缺乏分子生物學(xué)研究的證據(jù)。與其它卵巢上皮源性腫瘤,特別是卵巢高級(jí)別漿液性癌不同的是,卵巢粘液性癌常發(fā)生于年輕女性,許多患者為小于三十歲的年輕女性,是除生殖細(xì)胞腫瘤之外,發(fā)病年齡最早的卵巢腫瘤之一。文獻(xiàn)中報(bào)道可有11%的卵巢畸胎瘤有伴發(fā)的粘液性腫瘤。伴發(fā)于卵巢畸胎瘤的卵巢粘液性腫瘤(其中包括卵巢粘液性癌)與單獨(dú)發(fā)生的卵巢粘液癌的免疫表型(CK7+/CK20-或CK7+CK20+)完全不同,常表現(xiàn)為CK7-/CK20+或CK7+CK20+,與發(fā)生于胃腸道的粘液性癌的免疫表型重合。由于正常卵巢自身的解剖結(jié)構(gòu)中缺乏粘液性上皮的存在,而畸胎瘤中卻常發(fā)生多種形態(tài)的粘液性上皮(包括胃腸道和呼吸道的粘液性上皮),因此推測(cè)伴發(fā)于畸胎瘤的粘液性癌可能起源于畸胎瘤的消化道上皮成分,但這一假說(shuō)仍局限于形態(tài)學(xué)和免疫表型上的觀察,相關(guān)的分子生物學(xué)研究和證據(jù)仍非常缺乏�？紤]到畸胎瘤是發(fā)生于卵巢的最常見(jiàn)的生殖細(xì)胞腫瘤,伴發(fā)的兩種卵巢腫瘤也有可能為不具有克隆相關(guān)性的“碰撞瘤”或位于卵巢的粘液性癌為原發(fā)灶位于胃腸道的轉(zhuǎn)移性癌。此外,卵巢的粘液性腫瘤也是卵巢腫瘤中體積最大的一類腫瘤,平均體積達(dá)10cm以上,可呈膨脹性過(guò)度生長(zhǎng)至數(shù)十公分。在卵巢畸胎瘤和粘液性癌或粘液性腫瘤并存的病例中,畸胎瘤成分常為局限性,其病灶遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于共存的膨脹性生長(zhǎng)的巨大的粘液性腫瘤,這在理論上增加了畸胎瘤被過(guò)度增生的粘液性腫瘤所掩蓋,甚至被漏檢的可能。因此,未發(fā)現(xiàn)畸胎瘤卵巢粘液性癌,尤其是發(fā)生于年輕女性的卵巢粘液性癌,是否也存在生殖細(xì)胞起源的可能也成為一個(gè)值得深入探討的課題。據(jù)此,本課題第一部分從伴發(fā)于Brenner腫瘤和成熟畸胎瘤的兩型卵巢原發(fā)性粘液性腫瘤出發(fā),探討卵巢粘液性腫瘤的組織起源和發(fā)病機(jī)制。研究目的包括：1,卵巢Brenner腫瘤與粘液性腫瘤的克隆關(guān)系；2,在同側(cè)卵巢并發(fā)的粘液性癌和成熟性畸胎瘤的克隆關(guān)系；3,研究分別發(fā)生于年輕女性和年長(zhǎng)女性的不伴發(fā)成熟性畸胎瘤的卵巢粘液性癌的分子基因型,以探討無(wú)成熟性畸胎瘤依據(jù)的卵巢粘液性癌,尤其是在發(fā)生于的年輕患者(30歲)的卵巢粘液性癌,是否存在生殖細(xì)胞起源的可能性。對(duì)于卵巢2型上皮性腫瘤的組織病理起源和發(fā)病機(jī)制研究,特別是對(duì)于高級(jí)別漿液性癌的早期病變和前驅(qū)病變的分子遺傳學(xué)研究在近十年中取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展。卵巢高級(jí)別漿液性癌占卵巢漿液性癌的90%,是一種發(fā)病率高,侵襲性高,病死率高的婦產(chǎn)科惡性疾病。近十年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),高級(jí)別漿液性癌的的前驅(qū)病變不在卵巢內(nèi),而是位于輸卵管傘端,即漿液性輸卵管上皮內(nèi)癌,以及更早期的p53印跡,后者可能是腫瘤起始細(xì)胞的克隆性增生,但卵巢高級(jí)別漿液性癌的腫瘤起始細(xì)胞的細(xì)胞表型和發(fā)病機(jī)制中的早期分子事件尚不明確。腫瘤起始細(xì)胞被認(rèn)為是起源于體細(xì)胞的干細(xì)胞,或起源于獲得了干細(xì)胞特征的早期始祖細(xì)胞,與正常體細(xì)胞干細(xì)胞具有相似的特性。乙醛脫氫酶1家族成員A1(ALDH1A1)是視黃酸信號(hào)通路中的重要因素,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞自我更新和正常干細(xì)胞的分化。ALDH1A1是一種被廣泛研究的候選干細(xì)胞標(biāo)記。在小鼠模型中,干細(xì)胞位于卵巢門部區(qū)域,表達(dá)ALDH1A1蛋白且具有惡性轉(zhuǎn)化傾向。這項(xiàng)有趣的發(fā)現(xiàn)在人體中的意義尚未得到驗(yàn)證。研究方法：1,本課題第一部分A采用與X染色體關(guān)聯(lián)的人類雄激素受體基因克隆分析法(HUMARA)對(duì)復(fù)合性Brenner一粘液性腫瘤中的兩種腫瘤細(xì)胞成分分別進(jìn)行了X染色體失活狀態(tài)分析和克隆比對(duì)。對(duì)復(fù)合性Brenner-粘液性腫瘤和卵巢成熟性畸胎瘤進(jìn)行了微衛(wèi)星位點(diǎn)基因分型和比較。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法研究PAX8蛋白(高度特異性的苗勒管上皮標(biāo)記)在兩種腫瘤成分中的表達(dá)情況。第一部分B采用激光捕獲顯微切割和微衛(wèi)星位點(diǎn)基因分型的方法,分析了并存的粘液性癌及畸胎瘤及正常對(duì)照組織(輸卵管)的分子基因型,并加以比較。進(jìn)一步對(duì)于畸胎瘤與粘液性癌成分基因型不符合的病例進(jìn)行HUMARA克隆分析研究。分別對(duì)發(fā)生于年輕女性(13-30歲)及發(fā)生于年長(zhǎng)女性(41-67歲)的單純性卵巢粘液性癌行分子基因型分析。2,本課題第二部分運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)ALDH1A1蛋白在人體輸卵管上皮的表達(dá)進(jìn)行分析,具體研究對(duì)象包括輸卵管上皮腹膜轉(zhuǎn)化區(qū)(輸卵管腹膜交界處),卵巢表面上皮,卵巢高級(jí)別漿液性癌及卵巢高級(jí)別漿液性癌癌前病變—漿液性輸卵管原位癌和p53印跡。通過(guò)對(duì)人類癌癥和基因組圖譜中mRNA表達(dá)數(shù)據(jù)的分析研究ALDH1A1的表達(dá)水平與整體生存率的關(guān)聯(lián)性。研究結(jié)果：1,本課題第一部分A中符合HUMARA分析法的要求(能提供信息)的復(fù)合性Brenner-一粘液性腫瘤中的兩種腫瘤成分均為單克隆性,并顯示了一致的X染色體失活形式,提示兩種腫瘤成分來(lái)自同一細(xì)胞克隆(p=0.0039)。復(fù)合性Brenner-粘液性腫瘤的微衛(wèi)星位點(diǎn)基因分型研究顯示兩種腫瘤均為雜合性基因型,與相對(duì)應(yīng)的輸卵管組織完全吻合,而對(duì)照組中的卵巢畸胎瘤顯示為完全純合性(宿主單親二體型)或高度純合性的基因型。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示PAX8蛋白(高度特異性的苗勒管上皮標(biāo)記)在兩種腫瘤成分中的表達(dá)完全缺失。在第一部分B中被研究的8例與成熟畸胎瘤伴發(fā)的卵巢粘液性腫瘤(4例粘液性癌,3例不典型增生性粘液性腫瘤及1例粘液性囊腺瘤)有7例(87.5%)顯示為完全純合性或高度純合性的分子基因型。在有畸胎瘤的分子基因型可對(duì)比的6對(duì)病例中,有5例粘液性腫瘤(83.3%)顯示出與畸胎瘤完全吻合或高度吻合的基因型,并且不同于正常對(duì)照組織的體細(xì)胞基因型。在1例伴發(fā)于單側(cè)畸胎瘤的雙側(cè)卵巢粘液性癌中,同側(cè)卵巢中的癌與畸胎瘤在多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上基因型不一致,而位于雙側(cè)卵巢的粘液性癌的基因型完全吻合。]HUMARA克隆分析顯示該例中同側(cè)卵巢的粘液性癌與畸胎瘤具有不同的X染色失活狀態(tài),提示癌與畸胎瘤來(lái)自于不同的細(xì)胞克隆。在單純性卵巢粘液性癌研究組中,16例發(fā)生于年輕女性(13-30歲)及6例發(fā)生于年長(zhǎng)女性(41-67歲)的腫瘤的分子基因型的純合性位點(diǎn)數(shù)目顯著少于伴發(fā)于畸胎瘤的粘液性腫瘤。22例單純性粘液性癌中無(wú)任何一例具有完全純合性的基因型。2,本課題第二部分發(fā)現(xiàn)ALDH1A1在輸卵管正常粘膜中的分泌細(xì)胞和纖毛細(xì)胞,輸卵管腹膜交界處和卵巢表面上皮均有表達(dá),但在漿液性輸卵管上皮內(nèi)癌(STIC)和p53印跡中未見(jiàn)表達(dá),在高級(jí)別漿液性癌僅有少量局灶單個(gè)細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)。卵巢高級(jí)別漿液性癌的ALDH1A1的表達(dá)低于正常輸卵管上皮,并且未發(fā)現(xiàn)ALDH1A1的表達(dá)水平與整體生存率相關(guān)聯(lián)。研究結(jié)論：本研究第一部分發(fā)現(xiàn)并證實(shí)卵巢原發(fā)性粘液性腫瘤在組織病理起源上至少具有兩種以上不同的機(jī)制。一部分卵巢粘液性腫瘤與Brenner瘤具有克隆相關(guān)性。在復(fù)合性Brenner--粘液性腫瘤中,兩種不同的腫瘤成分具有相同的克隆和細(xì)胞起源,在發(fā)病機(jī)制上為密切相關(guān)的同源性疾病。伴發(fā)于畸胎瘤的卵巢粘液性腫瘤與畸胎瘤具有相同的分子基因型,為生殖細(xì)胞起源,但本研究也發(fā)現(xiàn)同側(cè)卵巢中并存的原發(fā)性粘液癌與畸胎瘤可能不具有克隆相關(guān)性,為具有不同組織起源的碰撞瘤。未伴發(fā)于畸胎瘤的單純性的卵巢粘液性癌,在組織起源上發(fā)生于為非生殖細(xì)胞的其它通路。本研究第二部分發(fā)現(xiàn)ALDH1A1蛋白的表達(dá)丟失是卵巢高級(jí)別漿液性癌發(fā)病機(jī)制過(guò)程中的一項(xiàng)早期事件。ALDH1A1并不是一個(gè)恰當(dāng)?shù)娜祟愝斅压苌掀さ母杉?xì)胞標(biāo)記。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2259271