【摘要】：研究背景:原發(fā)性肝癌(簡稱肝癌)是臨床上常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年上升,據(jù)報道,全球每年新增50多萬肝癌患者,其中約有一半在我國,病死率居我國惡性腫瘤的第二位。目前肝癌治療方法有限,肝臟部分切除及肝移植是潛在的最佳選擇,但僅僅只有10%-20%的患者有條件進(jìn)行治療;對不能手術(shù)切除的中晚期肝癌患者,微創(chuàng)治療雖能一定程度控制局部腫瘤病灶生長,緩解局部癥狀但無法根治腫瘤,大多數(shù)肝癌患者最終死于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,因此,迫切需要尋求一種安全、更有效、低毒的治療方法。近期研究發(fā)現(xiàn)MTDH/AEG-1具有癌基因的功能,能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移,增加腫瘤耐藥性,在許多惡性腫瘤中參與腫瘤進(jìn)展的各主要過程。相比良性肝腫瘤及正常肝組織細(xì)胞,MTDH/AEG-1在肝癌組織和培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞中表達(dá)明顯升高。本課題擬在建立采用Hep G2肝癌細(xì)胞系,通過小干擾RNA技術(shù)(small interfering RNA,si RNA)下調(diào)MTDH的表達(dá),觀察其對肝癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡等生物學(xué)行為的影響,通過以上研究來驗證以MTDH/AEG-1作為靶點是否能有效預(yù)防和抑制肝癌生長、轉(zhuǎn)移。目的:探討研究干擾下調(diào)MTDH基因表達(dá)對肝癌Hep G2細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的影響。方法:采用si RNA技術(shù),下調(diào)肝癌Hep G2細(xì)胞MTDH基因的表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)及Western bolt實驗檢測干擾效果。MTT實驗檢測MTDH基因下調(diào)對Hep G2細(xì)胞增殖的影響,TUNEL細(xì)胞凋亡實驗檢測細(xì)胞凋亡情況,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞周期,劃痕實驗觀察細(xì)胞遷移能力,RT-PCR檢測Bcl-2、Bax m RNA表達(dá)驗證促進(jìn)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:通過MTDH-si RNA干擾下調(diào)MTDH基因表達(dá)后,肝癌Hep G2細(xì)胞增殖能力明顯下降,作用48小時和96小時的增殖抑制率分別達(dá)到43.8%和64.6%;細(xì)胞明顯阻滯于靜止期(G0)或DNA合成前期(G1),細(xì)胞凋亡速比例增加,凋亡率增加23.46%,細(xì)胞遷移能力顯著降低,Bax基因表達(dá)明顯上調(diào),而Bcl-2表達(dá)下調(diào),促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:MTDH-si RNA干擾下調(diào)MTDH基因表達(dá)可抑制Hep G2細(xì)胞增殖,阻滯其于G0/G1期,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,可明顯抑制肝癌Hep G2細(xì)胞的遷移能力。MTDH基因有望成為肝癌治療的新靶點。
[Abstract]:Background: primary liver cancer (HCC) is one of the most common malignant tumors in clinic, and its incidence is increasing year by year. It is reported that there are more than half a million liver cancer patients in the world every year, about half of which are in our country. The fatality rate is the second most common malignant tumor in China. At present, the treatment of liver cancer is limited. Partial hepatectomy and liver transplantation are the best potential options, but only 10% to 20% of the patients have the conditions to be treated. Although minimally invasive therapy can control the growth of local tumor focus to some extent, alleviate local symptoms but can not cure the tumor, most patients with liver cancer eventually die from invasion and metastasis of tumor. Therefore, it is urgent to seek a kind of safety and more effective. A low toxicity treatment. Recent studies have found that MTDH/AEG-1 has the function of oncogene, which can promote tumor cell proliferation, invasion and metastasis, increase tumor resistance, and participate in the main process of tumor progression in many malignant tumors. The expression of MTDH- AEG-1 in HCC and cultured hepatoma cells was significantly higher than that in benign and normal hepatoma cells. In this study, Hep G2 hepatoma cell line was established. The expression of MTDH was down-regulated by small interfering RNA (small interfering RNA,si RNA), and the effects of MTDH on proliferation, migration and apoptosis of HCC cells were observed. To verify whether MTDH/AEG-1 as a target can effectively prevent and inhibit the growth and metastasis of liver cancer. Aim: to investigate the effects of interference down-regulation of MTDH gene expression on proliferation, migration and apoptosis of Hep G2 cells. Methods: si RNA technique was used to down-regulate the expression of MTDH gene in Hep G2 cells. The effects of down-regulation of MTDH gene on the proliferation of Hep G2 cells were detected by immunocytochemistry and Western bolt assay. The apoptosis of Hep G2 cells was detected by Tunel cell apoptosis assay, and the cell cycle was detected by flow cytometry (FCM). The cell migration ability was observed by scratch test and the expression of Bcl-2,Bax m RNA was detected by RT-PCR. Results: after down-regulation of MTDH gene expression by MTDH-si RNA interference, the proliferation ability of hepatoma Hep G2 cells decreased significantly. The inhibition rates of proliferation were 43.8% and 64.6% at 48 and 96 hours, respectively. The cells were significantly blocked in the quiescent phase (G0) or DNA synthesis phase (G1), the rate of apoptosis increased, the apoptosis rate increased 23.46%, and the ability of cell migration decreased significantly the expression of Bax gene increased significantly. However, the expression of Bcl-2 was down-regulated and promoted apoptosis. Conclusion the down-regulation of MTDH gene expression by the interference of RNA from Hep to MTDH-si can inhibit the proliferation of Hep G2 cells, block their proliferation in G0/G1 phase, induce apoptosis, and inhibit the migration ability of Hep G2 cells. MTDH gene may be a new target for the treatment of HCC.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

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