【摘要】：背景胃癌(GastricCancer,GC)是我國最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率居消化道腫瘤之首,死亡率列全部腫瘤的2～3位,是嚴重威脅我國人民生命健康的疾病之一。目前胃癌治療方法主要包括根治性手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療(簡稱"化療")以及分子靶向治療等。在我國,絕大部分胃癌患者確診時多為進展期,而進展期胃癌患者必須有賴于新輔助化療或術(shù)后輔助化療以改善其長期生存,而化療耐藥的產(chǎn)生常導(dǎo)致化療失敗,嚴重影響患者預(yù)后。順鉑(cisplatin,cDDP)作為治療胃癌的一線化療藥物之一,其耐藥性也在不斷上升。因此,深入研究胃癌對順鉑化療的耐藥機制,降低胃癌對順鉑的耐藥性,是提高胃癌療效的重要策略之一。水通道蛋白3(aquaporin3,AQP3)是水通道蛋白家族(aquaporins,AQPs)成員之一,具有介導(dǎo)滲透壓依賴性跨生物膜水轉(zhuǎn)運作用,對甘油等小分子物質(zhì)亦具有通透性。我們前期研究表明AQP3在胃癌組織中過表達,AQP3在胃癌的腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用,AQP3的上調(diào)通過促進上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和胃癌細胞的干細胞干性促進GC細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。但是,AQP3在胃癌對化療藥物耐藥中的作用尚不清楚。自噬(autophagy)是真核細胞胞質(zhì)內(nèi)的大分子物質(zhì)和細胞器被運送至溶酶體隔離并降解的過程,從而實現(xiàn)細胞自身的代謝需要和某些細胞器的更新。自噬是生理條件和病理條件下普遍存在的現(xiàn)象,不僅參與維持細胞穩(wěn)態(tài),同時還與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及腫瘤耐藥密切相關(guān)。深入了解AQP3在促進胃癌細胞自噬中的作用,有助于闡明胃癌化療耐藥的機制,進一步明確AQP3在胃癌化療耐藥中的作用,將為AQP3作為胃癌治療的靶點提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。方法1.選取三種胃癌細胞株,即MGC803、SGC7901和AGS細胞,分別用慢病毒轉(zhuǎn)染,使MGC803和SGC7901低表達AQP3(標記為MGC803-AQP3low,SGC7901-AQP3low),AGS 高表達 AQP3(標記為 AGS-AQP3high)。2.采用CCK-8細胞毒性試驗檢測不同AQP3表達水平的細胞對cDDP的敏感性以及對cDDP和氯喹(chloroquine,CQ)聯(lián)合用藥的敏感性。3.采用Western blot、激光共聚焦等方法檢測AQP3與自噬相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果1.胃癌細胞中AQP3的表達水平與其對化療藥物順鉑的敏感性顯著相關(guān):低表達 AQP3 后,MGC803-AQP3low及 SGC7901-AQ3low對 cDDP 敏感性增強;高表達AQP3后,AGS-AQP3high對cDDP敏感性降低。2.胃癌細胞中AQP3表達水平與細胞自噬水平顯著相關(guān):低表達AQP3后,MGC803-AQP3low及SGC7901-AQP3low自 噬水平減弱;高表達 AQP3 后,AGS-AQP3high自噬水平增強。3.聯(lián)合CQ處理后,胃癌細胞對cDDP的敏感性增強。CQ可以逆轉(zhuǎn)AQP3誘導(dǎo)的胃癌細胞對cDDP耐藥。結(jié)論AQP3通過促進胃癌細胞自噬增強其對順鉑的耐藥性,AQP3有望成為胃癌化療耐藥研究的新靶標。
[Abstract]:Background gastric cancer (GastricCancer,GC) is one of the most common malignant tumors in China. Its incidence rate is the highest in digestive tract tumors, and the mortality rate is 2 / 3 of all tumors. It is one of the diseases that seriously threaten the life and health of the people in our country. At present, the treatment of gastric cancer mainly includes radical surgery, chemotherapeutic therapy and molecular targeted therapy. In China, the majority of patients with gastric cancer are advanced when diagnosed, and advanced gastric cancer patients must rely on neoadjuvant chemotherapy or postoperative adjuvant chemotherapy to improve their long-term survival, and the emergence of chemotherapeutic resistance often leads to the failure of chemotherapy. The prognosis is seriously affected. Cisplatin (cisplatin,cDDP) is one of the first-line chemotherapeutic agents for gastric cancer, and its drug resistance is on the rise. Therefore, it is one of the important strategies to improve the curative effect of gastric cancer to study the drug resistance mechanism of gastric cancer to cisplatin chemotherapy and to reduce the resistance of gastric cancer to cisplatin. Aquaporin 3 (aquaporin3,AQP3) is one of the members of aquaporin family (aquaporins,AQPs), which can mediate osmotic pressure dependent transmembrane water transport, and also has permeability to glycerol and other small molecules. Our previous studies have shown that overexpression of AQP3 in gastric cancer may play an important role in carcinogenesis and progression of gastric cancer. The up-regulation of AQP3 may promote GC by promoting epithelial-mesenchymal transformation of (EMT) and stem cell dryness of gastric cancer cells. Invasion and metastasis of cells. However, the role of AQP3 in chemotherapeutic resistance of gastric cancer remains unclear. Autophagy (autophagy) is a process in which macromolecules and organelles in the cytoplasm of eukaryotic cells are transported to lysosomes for isolation and degradation, thus realizing the metabolic needs of the cells themselves and the renewal of some organelles. Autophagy is a common phenomenon in physiological and pathological conditions. Autophagy is not only involved in maintaining cell homeostasis, but also closely related to tumor development and drug resistance. A deeper understanding of the role of AQP3 in promoting autophagy of gastric cancer cells is helpful to elucidate the mechanism of chemoresistance of gastric cancer, to further clarify the role of AQP3 in chemotherapeutic resistance of gastric cancer, and to provide theoretical and experimental basis for AQP3 as a target of gastric cancer therapy. Method 1. Three gastric cancer cell lines, MGC803,SGC7901 and AGS, were selected and transfected with lentivirus, respectively. MGC803 and SGC7901 were transfected with low expression of AQP3 (labeled MGC803-AQP3low,SGC7901-AQP3low) and high expression of AQP3 (labeled AGS-AQP3high). 2. CCK-8 cytotoxicity test was used to detect the sensitivity of cells with different levels of AQP3 expression to cDDP and to the combination of cDDP and chloroquine (chloroquine,CQ). The expression of AQP3 and autophagy related protein was detected by Western blot, laser confocal method. Result 1. The expression of AQP3 in gastric cancer cells was significantly correlated with its sensitivity to cisplatin: the sensitivity of MGC803-AQP3low and SGC7901-AQ3low to cDDP was increased after low expression of AQP3, and the sensitivity of AGS-AQP3high to cDDP was decreased after high expression of AQP3. There was a significant correlation between the expression of AQP3 and autophagy in gastric cancer cells: the decrease of MGC803-AQP3low and SGC7901-AQP3low autophagy after low expression of AQP3, and the enhancement of high autophagy level of AGS-AQP3 after high expression of AQP3. After treated with CQ, the sensitivity of gastric cancer cells to cDDP was enhanced. CQ could reverse the drug resistance of gastric cancer cells induced by AQP3 to cDDP. Conclusion AQP3 can enhance cisplatin resistance by promoting autophagy of gastric cancer cells. AQP3 may be a new target for the study of chemotherapeutic resistance of gastric cancer.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

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本文編號：2216785