【摘要】：目的:探討小分子化合物G1活化微環(huán)境腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancerassociated fibroblast,CAF)中G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)對(duì)外分泌細(xì)胞因子高遷移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的影響,以及對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞自噬和增殖能力的影響。方法:構(gòu)建靶向干擾GPER基因的GPER-shRNA慢病毒,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至CAF中;分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)陰性對(duì)照慢病毒感染組(CAF-shNC組)與GPER-shRNA慢病毒感染組(CAFshGPER組)中GPER mRNA和蛋白的表達(dá)情況。利用GPER特異性激動(dòng)劑G1(1μmol/L)處理以上2組細(xì)胞后,分別得到G1+CAF-shNC組與G1+CAF-shGPER組細(xì)胞;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法、蛋白質(zhì)印跡法及ELISA法檢測(cè)上述4組細(xì)胞中細(xì)胞因子HMGB1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平,以及條件培養(yǎng)液中HMGB1的分泌量。收集以上各組細(xì)胞的條件培養(yǎng)液處理MCF-7細(xì)胞后,應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞自噬蛋白標(biāo)志物Beclin1、p62及LC3的表達(dá)情況,CCK-8法檢測(cè)對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果:攜帶有GPER-shRNA的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)入CAF后,GPER mRNA及蛋白的表達(dá)水平被明顯抑制(P值均0.01)。GPER特異性激動(dòng)劑G1可明顯上調(diào)CAF-shNC組細(xì)胞中細(xì)胞因子HMGB mRNA及蛋白的表達(dá)水平,進(jìn)一步上調(diào)條件培養(yǎng)液中HMGB1蛋白的分泌量(P值均0.05)。在G1+CAF-shGPER組,中以上效應(yīng)則被明顯抑制。外分泌至條件培養(yǎng)液中的HMGB1可通過(guò)上調(diào)Beclin1和LC3蛋白以及降低p62蛋白的表達(dá)水平增強(qiáng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的自噬水平及其增殖能力(P值均0.01)。結(jié)論:小分子化合物G1通過(guò)活化微環(huán)境CAF中GPER,增加細(xì)胞因子HMGB1的分泌量,進(jìn)而誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞發(fā)生自噬,保護(hù)MCF-7細(xì)胞并促進(jìn)其生長(zhǎng)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of G protein-coupled estrogen receptor (G protein-coupled estrogen receptor) on exocrine cytokine high mobility group protein 1 (high mobility group box-1 protein 1 (HMGB1) in cancerassociated fibroblast associated fibroblasts (cancerassociated fibroblast caf) activated by small molecule G 1. And the effect on autophagy and proliferation of breast cancer MCF-7 cells. Methods: GPER-shRNA lentivirus targeting GPER gene was constructed and stably transfected into CAF. The expression of GPER mRNA and protein in lentiviral infection group (CAF-shNC group) and GPER-shRNA lentivirus infection group (CAFshGPER group) were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting respectively. After treated with GPER specific agonist G1 (1 渭 mol/L), the cells of G1 CAF-shNC group and G1 CAF-shGPER group were obtained, respectively. The expression of cytokine HMGB1 mRNA and protein and the secretion of HMGB1 in conditioned medium were detected by Western blot and ELISA. After MCF-7 cells were treated with conditioned medium, the expression of Beclin1p62 and LC3 in tumor cells was detected by Western blotting. The effect of CCK-8 on the proliferation of MCF-7 cells was detected by CCK-8 method. Results: the expression of GPER mRNA and protein in lentivirus carrying GPER-shRNA was significantly inhibited (P = 0. 01). GPER specific agonist G1 could significantly up-regulate the expression of cytokine HMGB mRNA and protein in the cells of CAF-shNC group. The secretion of HMGB1 protein in conditioned medium was further up-regulated (P < 0. 05). In G 1 CAF-shGPER group, the above effects were significantly inhibited. HMGB1 secreted into conditioned medium could enhance the autophagy level and proliferation ability of breast cancer MCF-7 cells by up-regulating Beclin1 and LC3 protein and decreasing the expression of p62 protein (P < 0.01). Conclusion: small molecule compound G1 increases the secretion of cytokine HMGB1 by activating GPERin microenvironment CAF, and then induces autophagy, protects MCF-7 cells and promotes the growth of MCF-7 cells in breast cancer.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌乳腺外科;江西省腫瘤醫(yī)院乳腺外科;重慶醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號(hào):81372398)~~
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2171417