【摘要】：目的獲得靶向人Her2納米抗體。方法使用重組人Her2蛋白免疫羊駝,分離免疫后羊駝的淋巴細(xì)胞提取總RNA,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增羊駝Ig G的可變區(qū)(VHH)基因片段,構(gòu)建噬菌體表面展示的納米抗體文庫,采用Her2抗原對文庫進(jìn)行親和篩選,將篩選到的克隆轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,鎳離子親和層析柱純化獲得納米抗體并用ELISA技術(shù)和Biacore檢測其與抗原Her2的親和力,采用免疫組化方法檢測Her2陽性乳腺癌組織中Her2的表達(dá)。結(jié)果第二輪篩選后得到2個(gè)抗體H3和H5,ELISA結(jié)果顯示兩者都具有抗原結(jié)合活性,其中H5的親和力達(dá)8.106×10~(-10)mol/L。H5可識別乳腺癌組織中Her2抗原的表達(dá)。結(jié)論從Her2免疫的羊駝體內(nèi),通過噬菌體展示技術(shù)篩選獲得了1個(gè)具有較高抗原結(jié)合活性的抗Her2納米抗體,可用于乳腺癌的病理診斷。
[Abstract]:Objective to obtain the target human Her2 antibody. Methods the recombinant human Her2 protein was used to immunize alpaca. The total RNAs were isolated from the lymphocytes of alpaca after immunization. The variable region (VHH) gene fragment of Ig G was amplified by PCR technique, and the phage surface displayed nano-antibody library was constructed. The Her2 antigen was used to screen the library, and the selected clones were transformed into E. coli BL21 (DE3) to induce the expression of recombinant protein. The nano-antibody was purified by nickel ion affinity chromatography column and its affinity to Her2 antigen was detected by ELISA and Biacore. Immunohistochemical method was used to detect the expression of Her2 in Her2 positive breast cancer tissues. Results after the second round of screening, two antibodies H3 and H5 showed antigen-binding activities. The affinity of H5 to 8.106 脳 10 ~ (-10) mol/L.H5 could recognize the expression of Her2 antigen in breast cancer tissues. Conclusion A high antigen-binding antibody against Her2 was obtained from alpaca immunized with Her2. It can be used in the pathological diagnosis of breast cancer.
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;山東綠葉制藥有限公司;山東國際生物科技園發(fā)展有限公司;
【分類號】：R737.9

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本文編號：2148788