【摘要】：背景與目的現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)Nm23-H1還存在胞核表達,而既往的研究都是以過表達或抑制胞漿Nm23-H1為研究手段,由于Nm23-H1本身缺乏核引導序列,其研究結果并不能真實反映或重復臨床中Nm23-H1以胞核定位為主的實際生物學效應。因此,本研究通過構建帶有核引導序列的Nm23-H1載體并轉染A549細胞以探討Nm23-H1從胞漿向胞核轉位對肺癌細胞增殖的影響。方法采用基因重組技術構建帶核定位信號序列的p Lentis-CMV-NME1-IRES2-PURO慢病毒載體,酶切和測序鑒定正確后,穩(wěn)定轉染A549細胞后用Western blot和激光共聚焦檢測Nm23-H1蛋白的定位和表達,用CCK-8法檢測細胞的增殖,流式細胞術檢測細胞周期變化。結果成功構建了核內定向表達Nm23-H1的慢病毒載體。轉染組在72 h、96 h和120 h時增殖率與空載體組相比均顯著升高(P0.000,1)。空載體組A549細胞在G0期/G1期所占比例為35.69%,高于轉染組的28.28%(t=1.461,P=0.217);而轉染組細胞在G2期/M期所占比例為58.7%,空載體組為31.30%(t=4.560,P=0.010)。結論 Nm23-H1在人肺腺癌A549細胞的核內過表達使細胞主要分布在G2期/M期并促進了細胞的體外增殖。
[Abstract]:Background & AIM existing studies have found that Nm23-H1 still exists nuclear expression, but previous studies have been carried out by overexpression or inhibition of cytoplasmic Nm23-H1, due to the lack of nucleocapsid sequence in Nm23-H1 itself. The results can not truly reflect or repeat the actual biological effects of nuclear localization of Nm23-H1 in clinical practice. Therefore, we constructed a Nm23-H1 vector with nucleocapsid sequence and transfected A549 cells to investigate the effect of Nm23-H1 translocation from cytoplasm to nucleus on the proliferation of lung cancer cells. Methods the vector of p Lentis-CMV-NME1-IRES2-PURO lentivirus with nuclear localization signal sequence was constructed by gene recombination technique. After confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing, the localization and expression of Nm23-H1 protein were detected by Western blot and confocal laser scanning after stable transfection into A549 cells. CCK-8 assay was used to detect cell proliferation and flow cytometry was used to detect cell cycle changes. Results Lentivirus vector expressing Nm23-H1 in nucleus was successfully constructed. The proliferation rate of the transfected group was significantly higher than that of the blank vector group at 72 h and 120 h (P0.0001). The percentage of A549 cells in G _ 0 / G _ 1 phase was 35.699.It was higher than that in transfection group (28.28%), while the proportion of transfected A549 cells in G _ 2 / M phase was 58.7% and 31.30% in empty vector group (t _ (4.560) P _ (0.010). Conclusion overexpression of Nm23-H1 in the nucleus of human lung adenocarcinoma A549 cells makes the cells mainly distribute in G2 phase and promote the proliferation of A549 cells in vitro.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所腫瘤中心;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(No.81272599)資助~~
【分類號】：R734.2

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