發(fā)布時(shí)間：2018-07-04 18:01

  本文選題：霍奇金淋巴瘤 + 嵌合抗原受體　； 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin's lymphoma,cHL)是霍奇金淋巴瘤的病理類(lèi)型之一,是起源于淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,主要發(fā)生于年輕及老年患者。目前常規(guī)化療療效較好,但難治/復(fù)發(fā)型cHL仍缺少有效的治療方法,因此如何減少并發(fā)癥、優(yōu)化、個(gè)體化治療成為目前研究重點(diǎn)。嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞(chimeric antigen receptor-modified T cell,CART )是近年來(lái)迅速發(fā)展的免疫治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。目前靶向性針對(duì)CD30-CART細(xì)胞免疫治療在我院臨床治療工作中已收獲一定成就,但療效仍待進(jìn)一步優(yōu)化。目的:本研究選擇不同抗原表位的兩種單克隆抗體Ki-4及Ber-H2,優(yōu)化性構(gòu)建不同的CAR基因片段的載體,比較兩種CART細(xì)胞對(duì)CD30陽(yáng)性的cHL細(xì)胞系L428的殺傷作用,以及其機(jī)制與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)性進(jìn)行研究。方法:①構(gòu)建攜帶不同抗原表位的CD30-CAR基因片段的慢病毒載體;②兩種不同抗原表位的CART-30細(xì)胞的培養(yǎng);③兩種不同抗原表位CART-30細(xì)胞對(duì)cHL細(xì)胞株的殺傷效率的比較;④CD30-CARs對(duì)cHL細(xì)胞株NF-κB機(jī)制的影響。結(jié)果:①成功構(gòu)建出不同抗原表位的CD30-CART細(xì)胞,陽(yáng)性率平均值約為65.7%左右;②Ki-4組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為35.15%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為66.99%; Ber-H2組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為31.95%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為56.11%; CD19組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為21.92%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為45.49%; CIK組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為16.99%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為32.22%。P0.05,不同效應(yīng)細(xì)胞間及不同效靶比間的殺傷效應(yīng)均有差異,且此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③Western蛋白印跡法結(jié)果示:TNF-α組及Ki-42h及3h組P-P65呈強(qiáng)陽(yáng)性,IκBα蛋白呈弱陽(yáng)性;而空白對(duì)照組、Ki-4的Oh組及Ber-H2各組P-P65及IκBα蛋白均呈現(xiàn)弱陽(yáng)性。結(jié)論:①不同抗原表位的CD30-CART細(xì)胞對(duì)經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤細(xì)胞殺傷作用不同;②Ki-4的scFv能有效激活NF-κB信號(hào)通路,但Ber-H2-CARs不能激活NF-κB信號(hào)通路。
[Abstract]:Background: classical Hodgkin's lymphoma (classical Hodgkin's lymphoma) is one of the pathological types of Hodgkin's lymphoma. It is a malignant tumor originating from the lymphatic hematopoietic system and mainly occurs in young and elderly patients. The efficacy of conventional chemotherapy is good, but there is still a lack of effective treatment for refractory / relapsed cHL. Therefore, how to reduce complications, optimize, individualized treatment has become the focus of current research. Chimeric antigen receptor modified T cell (chimeric antigen receptor-modified T cell cart is a hot topic in the field of immunotherapy. At present, targeted CD30-cart cellular immunotherapy has achieved some achievements in our clinical treatment, but the curative effect still needs to be optimized. Aim: in this study, we selected two monoclonal antibodies Ki-4 and Ber-H2 from different antigenic epitopes to construct the vectors of different car gene fragments and compare the killing effects of two kinds of cart cells on CD30 positive CHL cell line L428. The relationship between NF- 魏 B signaling pathway and its mechanism was studied. Methods the cell culture of CART-30 cells containing different epitopes of CD30-CAR gene containing different antigen epitopes was carried out. The cytotoxicity of two different epitopes of CART-30 cells to cHL cell line was compared. 4 the effect of CD30-CARs on the mechanism of NF- 魏 B in CHL cells. Results the CD30-CART cells with different epitopes were successfully constructed with the average positive rate of 65.7%. 2The average killing efficiency of Ki-4 group was 35.15 when 1:1, 66.99 at 10:1, 31.95 at 1:1 in Ber-H2 group, 56.11 at 1:1 in Ber-H2 group. The average killing efficiency of CIK group is 21.92 at 1:1 and 45.49 at 10:1, the average killing efficiency of CIK is 16.999when 1:1, the average killing efficiency is 32.22.P0.05at 1:1. The cytotoxicity between cells and different target ratios was different. The difference was statistically significant. The results of Western blot showed that P-P65 was weakly positive in the w TNF- 偽 group, Ki-42 h and 3 h group, but weakly positive in the blank control group in the Oh group of Ki-4 and Ber-H2 group, and the protein of P-P65 and I 魏 B 偽 was weakly positive in the control group. Conclusion CD30-CART cells with different antigen epitopes have different killing effects on classical Hodgkin's lymphoma cells. SCFv of 2Ki-4 can effectively activate NF- 魏 B signaling pathway, but Ber-H2-CARs can not activate NF- 魏 B signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R733.1

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本文編號(hào)：2096899