發(fā)布時間：2018-07-04 16:28

  本文選題：NPAS2 + CDC25A��； 參考：《第四軍醫(yī)大學》2017年博士論文

【摘要】：【背景】肝細胞肝癌的發(fā)生率近年持續(xù)增加,目前已成為全球腫瘤相關性死亡的第二大原因,全球每年約有80萬人死于肝細胞肝癌。我國是世界肝癌發(fā)病率最高和死亡人數(shù)最多的國家。目前肝癌的治療分為根治性治療、姑息性治療和對癥治療。雖然早期根治性手術的五年生存率能達到75%,但是多數(shù)肝癌患者發(fā)現(xiàn)較晚,不能進行根治性手術,導致肝癌患者五年生存率很低。常用的肝癌診斷標記物的敏感度和特異度并不十分理想。因此,目前臨床急需尋找到特異性和敏感性更高的診斷標志物,特別是早期肝癌的分子標記物。另外,在肝癌的分子靶向治療方面,目前包括較為有效的索拉菲尼在內(nèi)的所有靶向藥物都只對部分患者有效,且療效有限。因此,目前肝癌的臨床早期診斷及治療仍面臨諸多問題。深入探討肝癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)控機制,尋找到早期肝癌的分子標記物及生物靶向治療的新靶點,對于我國肝癌的防治具有重大意義。晝夜節(jié)律調(diào)控人體的各種代謝和生理功能。目前發(fā)現(xiàn),晝夜節(jié)律是由核心生物節(jié)律基因通過轉(zhuǎn)錄、翻譯后形成負反饋環(huán)路而產(chǎn)生的。到目前為止已經(jīng)在人類染色體定位并克隆出10種核心生物節(jié)律基因(NPAS2、CLOCK、BMAL1、PER1、PER2、PER3、CRY1、CRY2、TIM和CKI)。這些核心生物節(jié)律基因直接參與調(diào)控包括細胞增殖、細胞凋亡、細胞代謝和細胞免疫在內(nèi)眾多細胞的生命活動。越來越多的證據(jù)表明節(jié)律基因的紊亂與腫瘤的發(fā)生和進展直接相關。NPAS2是核心生物節(jié)律基因中的一個重要成員。它參與調(diào)控包括DNA損傷修復、炎癥反應、激素分泌、細胞代謝等諸多生理活動。NPAS2的異常與包括高血壓、胎兒肝臟代謝、非酒精性脂肪性肝病、冬季抑郁癥、慢性疲勞綜合征及腫瘤在內(nèi)的多種疾病密切相關。我們前期預實驗結(jié)果提示NPAS2分子在肝癌組織中表達顯著升高。目前對NPAS2分子的認識尚不全面,NPAS2在肝癌中的作用還未有報道。因此,深入探討NPAS2可能的促肝癌生長的作用和分子機制對于全面了解肝癌進展的病理過程具有重要意義�！灸康摹�1.明確節(jié)律分子NPAS2在肝癌中的表達情況,分析NPAS2表達強度對于患者預后的影響。2.分析NPAS2分子在肝癌細胞中的生物學作用。3.闡明NPAS2分子在肝癌細胞中發(fā)揮其生物學功能的具體分子機制�！痉椒ā�1.以收集的肝癌組織樣本及肝癌公共數(shù)據(jù)庫為研究對象,利用q RT-PCR、Western Blot和免疫組織化學染色檢測NPAS2在肝癌中的表達情況,同時與患者預后及臨床參數(shù)進行分析。2.利用MTS、克隆形成、Ed U、流式細胞術和Western Blot實驗,分析NPAS2對肝癌細胞生長的作用。3.利用裸鼠皮下成瘤實驗,在體內(nèi)分析NPAS2對腫瘤生長的影響。4.利用q RT-PCR、Western Blot、IHC、雙熒光素酶報告基因、Chip-PCR和Co-IP實驗,分析NPAS2對肝癌細胞生長作用的分子機制。5.利用BMAL1干涉片段及細胞生長表型實驗分析BMAL1是否參與了NPAS2對肝癌細胞生長作用的調(diào)控。【結(jié)果】1.NPAS2在肝癌組織中的表達是顯著高于癌旁組織,NPAS2表達高的肝癌患者總生存期及無復發(fā)生存期均較低表達NPAS2的患者短。NPAS2表達水平與肝癌患者AFP水平和腫瘤大小呈正相關。2.通過體內(nèi)、外實驗證實了NPAS2分子促進肝癌細胞的增殖,抑制肝癌細胞凋亡,最終效應是促進肝癌細胞存活,促進腫瘤生長。3.肝癌細胞中NPAS2直接轉(zhuǎn)錄上調(diào)CDC25A的表達,進而通過CDC25A激活CDK2/4/6,促進細胞G1期到S期的轉(zhuǎn)換;通過CDC25A介導去磷酸化p-Bcl-2(Thr69),抑制肝癌細胞凋亡。4.節(jié)律分子BMAL1協(xié)同NPAS2參與NPAS2促進肝癌細胞生長的作用,NPAS2/BMAL1異源二聚體在肝癌的進展中發(fā)揮著重要作用�！窘Y(jié)論】我們通過臨床組織樣本的檢測、生物信息學的分析、體外細胞實驗和體內(nèi)動物實驗,首次發(fā)現(xiàn)肝癌組織中NPAS2表達升高,同時其表達水平與患者預后呈負相關性。BMAL1協(xié)同NPAS2通過CDC25A介導促進肝癌細胞增殖、抑制細胞凋亡,最終加速肝癌細胞生長,促進腫瘤進展。因此,NPAS2有可能成為未來肝癌預后的分子標記物及生物靶向治療的新靶點。
[Abstract]:In recent years , the incidence of hepatocellular carcinoma in hepatocellular carcinoma ( HCC ) has been continuously increased in recent years . It has become the second largest cause of global tumor - related death . There are about 800,000 people dying from hepatocellular carcinoma every year . The effects of NPAS2 on the growth of liver cancer cells were analyzed by means of q - RT - PCR , Western Blot , IHC , dual luciferase reporter gene , Chip - PCR and Co - IP . The expression level of NPAS2 in liver cancer cells was significantly higher than that of NPAS2 .
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7
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本文編號：2096665