本文選題：NPAS2 + CDC25A��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：【背景】肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生率近年持續(xù)增加,目前已成為全球腫瘤相關(guān)性死亡的第二大原因,全球每年約有80萬(wàn)人死于肝細(xì)胞肝癌。我國(guó)是世界肝癌發(fā)病率最高和死亡人數(shù)最多的國(guó)家。目前肝癌的治療分為根治性治療、姑息性治療和對(duì)癥治療。雖然早期根治性手術(shù)的五年生存率能達(dá)到75%,但是多數(shù)肝癌患者發(fā)現(xiàn)較晚,不能進(jìn)行根治性手術(shù),導(dǎo)致肝癌患者五年生存率很低。常用的肝癌診斷標(biāo)記物的敏感度和特異度并不十分理想。因此,目前臨床急需尋找到特異性和敏感性更高的診斷標(biāo)志物,特別是早期肝癌的分子標(biāo)記物。另外,在肝癌的分子靶向治療方面,目前包括較為有效的索拉菲尼在內(nèi)的所有靶向藥物都只對(duì)部分患者有效,且療效有限。因此,目前肝癌的臨床早期診斷及治療仍面臨諸多問(wèn)題。深入探討肝癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)控機(jī)制,尋找到早期肝癌的分子標(biāo)記物及生物靶向治療的新靶點(diǎn),對(duì)于我國(guó)肝癌的防治具有重大意義。晝夜節(jié)律調(diào)控人體的各種代謝和生理功能。目前發(fā)現(xiàn),晝夜節(jié)律是由核心生物節(jié)律基因通過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯后形成負(fù)反饋環(huán)路而產(chǎn)生的。到目前為止已經(jīng)在人類染色體定位并克隆出10種核心生物節(jié)律基因(NPAS2、CLOCK、BMAL1、PER1、PER2、PER3、CRY1、CRY2、TIM和CKI)。這些核心生物節(jié)律基因直接參與調(diào)控包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝和細(xì)胞免疫在內(nèi)眾多細(xì)胞的生命活動(dòng)。越來(lái)越多的證據(jù)表明節(jié)律基因的紊亂與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展直接相關(guān)。NPAS2是核心生物節(jié)律基因中的一個(gè)重要成員。它參與調(diào)控包括DNA損傷修復(fù)、炎癥反應(yīng)、激素分泌、細(xì)胞代謝等諸多生理活動(dòng)。NPAS2的異常與包括高血壓、胎兒肝臟代謝、非酒精性脂肪性肝病、冬季抑郁癥、慢性疲勞綜合征及腫瘤在內(nèi)的多種疾病密切相關(guān)。我們前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示NPAS2分子在肝癌組織中表達(dá)顯著升高。目前對(duì)NPAS2分子的認(rèn)識(shí)尚不全面,NPAS2在肝癌中的作用還未有報(bào)道。因此,深入探討NPAS2可能的促肝癌生長(zhǎng)的作用和分子機(jī)制對(duì)于全面了解肝癌進(jìn)展的病理過(guò)程具有重要意義�！灸康摹�1.明確節(jié)律分子NPAS2在肝癌中的表達(dá)情況,分析NPAS2表達(dá)強(qiáng)度對(duì)于患者預(yù)后的影響。2.分析NPAS2分子在肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用。3.闡明NPAS2分子在肝癌細(xì)胞中發(fā)揮其生物學(xué)功能的具體分子機(jī)制�！痉椒ā�1.以收集的肝癌組織樣本及肝癌公共數(shù)據(jù)庫(kù)為研究對(duì)象,利用q RT-PCR、Western Blot和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)NPAS2在肝癌中的表達(dá)情況,同時(shí)與患者預(yù)后及臨床參數(shù)進(jìn)行分析。2.利用MTS、克隆形成、Ed U、流式細(xì)胞術(shù)和Western Blot實(shí)驗(yàn),分析NPAS2對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。3.利用裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn),在體內(nèi)分析NPAS2對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。4.利用q RT-PCR、Western Blot、IHC、雙熒光素酶報(bào)告基因、Chip-PCR和Co-IP實(shí)驗(yàn),分析NPAS2對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用的分子機(jī)制。5.利用BMAL1干涉片段及細(xì)胞生長(zhǎng)表型實(shí)驗(yàn)分析BMAL1是否參與了NPAS2對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用的調(diào)控�！窘Y(jié)果】1.NPAS2在肝癌組織中的表達(dá)是顯著高于癌旁組織,NPAS2表達(dá)高的肝癌患者總生存期及無(wú)復(fù)發(fā)生存期均較低表達(dá)NPAS2的患者短。NPAS2表達(dá)水平與肝癌患者AFP水平和腫瘤大小呈正相關(guān)。2.通過(guò)體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了NPAS2分子促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖,抑制肝癌細(xì)胞凋亡,最終效應(yīng)是促進(jìn)肝癌細(xì)胞存活,促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。3.肝癌細(xì)胞中NPAS2直接轉(zhuǎn)錄上調(diào)CDC25A的表達(dá),進(jìn)而通過(guò)CDC25A激活CDK2/4/6,促進(jìn)細(xì)胞G1期到S期的轉(zhuǎn)換;通過(guò)CDC25A介導(dǎo)去磷酸化p-Bcl-2(Thr69),抑制肝癌細(xì)胞凋亡。4.節(jié)律分子BMAL1協(xié)同NPAS2參與NPAS2促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,NPAS2/BMAL1異源二聚體在肝癌的進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用�！窘Y(jié)論】我們通過(guò)臨床組織樣本的檢測(cè)、生物信息學(xué)的分析、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),首次發(fā)現(xiàn)肝癌組織中NPAS2表達(dá)升高,同時(shí)其表達(dá)水平與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)性。BMAL1協(xié)同NPAS2通過(guò)CDC25A介導(dǎo)促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡,最終加速肝癌細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。因此,NPAS2有可能成為未來(lái)肝癌預(yù)后的分子標(biāo)記物及生物靶向治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:In recent years , the incidence of hepatocellular carcinoma in hepatocellular carcinoma ( HCC ) has been continuously increased in recent years . It has become the second largest cause of global tumor - related death . There are about 800,000 people dying from hepatocellular carcinoma every year . The effects of NPAS2 on the growth of liver cancer cells were analyzed by means of q - RT - PCR , Western Blot , IHC , dual luciferase reporter gene , Chip - PCR and Co - IP . The expression level of NPAS2 in liver cancer cells was significantly higher than that of NPAS2 .
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7
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本文編號(hào)：2096665