本文選題：周期蛋白依賴性激酶8 + 結直腸癌��； 參考：《廣州醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：結直腸癌是常見的惡性腫瘤之一,肝臟轉移是其最常見的遠處轉移形式,約25%的患者在臨床確診時已有肝轉移,結直腸癌的預后與有無遠處轉移尤其是肝轉移密切相關。近年隨著技術的進步,以手術為中心的綜合治療提高了結直腸癌肝轉移的治療效果。但對其預后的改善仍不夠理想。探求抑制結直腸癌肝轉移的新療法對于改善患者預后及延長生存期非常重要。基因治療有望成為結直腸癌肝轉移的新療法。周期蛋白依賴性激酶8(CDK8)是結直腸癌的原癌基因,其對結直腸癌肝轉移發(fā)生發(fā)展中的重要信號通路-Wnt/β-catenin通路有調控作用。因而CDK8有望成為結直腸癌肝轉移的治療靶點。第一部分結直腸癌組織中CDK8的表達目的:檢測結直腸癌組織CDK8的表達并分析CDK8表達與結直腸癌臨床病理特征之間的關系。方法:取結直腸癌石蠟切片標本70例,選取正常結直腸組織20例為對照。免疫組織化學法檢測結直腸癌腫瘤組織與正常結直腸組織CDK8表達的差異;分析結直腸癌組織中CDK8表達與臨床病理特征的關系。結果:結直腸癌組織CDK8表達陽性率為71.43%,高于正常結直腸組織30%的陽性率(P0.05)。結直腸癌組織中CDK8表達升高與臨床分期進展、淋巴結轉移、遠處轉移有關(P0.05);而與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、血清CEA水平高低無關(P均0.05)。結論:1、結直腸癌組織中CDK8表達升高;2、CDK8升高與結直腸癌的分期及轉移有關。第二部分以CDK8為靶點干預結直腸癌細胞增殖、遷移與侵襲目的:在細胞水平觀察沉默CDK8基因對結直腸癌細胞增殖、遷移、侵襲能力的影響。方法:1、制備沉默CDK8基因的重組慢病毒LV-CDK8-sh RNA和對照組空病毒LV-NC,分別感染HCT116細胞;2、熒光定量PCR法檢測細胞CDK8基因m RNA,免疫蛋白印跡法檢測細胞CDK8蛋白表達;3、MTT實驗檢測細胞增殖能力;劃痕實驗檢測細胞體外遷移能力;Transwell實驗檢測細胞侵襲能力。結果:1、成功構建沉默CDK8基因的HCT116細胞(對照組:HCT116-luc-GFP-NC;實驗組:HCT116-luc-GFP-sh CDK8);2、HCT116-luc-GFP-sh CDK8細胞CDK8m RNA及蛋白表達均較HCT116-luc-GFP-NC細胞降低(P0.05);3、HCT116-luc-GFP-sh CDK8細胞增殖、遷移、侵襲能力均較HCT116-luc-GFP-NC細胞降低(P0.05)結論:1、LV-CDK8-sh RNA能有效沉默結腸癌HCT116細胞CDK8基因表達;2、沉默CDK8基因表達后,結腸癌HCT116細胞增殖、遷移及侵襲能力均受到抑制。第三部分下調CDK8抑制結直腸癌肝轉移機制目的:動物實驗觀察沉默CDK8基因對結直腸癌肝轉移的影響。方法:1、構建結直腸癌肝轉移的BLAB/c nu/nu裸鼠實驗模型;2、活體成像技術實時觀察裸鼠腫瘤生長和轉移;3、取裸鼠肝轉移灶組織采用蛋白免疫印跡法檢測CDK8、β-catenin、E2F1、MMP-7蛋白的表達。結果:1、成功建立裸鼠結直腸癌肝轉移模型;2、沉默CDK8基因表達在裸鼠體內能有效抑制結直腸癌肝轉移的發(fā)生發(fā)展;3、沉默CDK8基因表達后,裸鼠結直腸癌肝轉移灶內CDK-8,β-catenin和MMP-7的表達減少,而E2F1表達增加。結論:1、沉默CDK8基因表達能有效裸鼠抑制結直腸癌肝轉移的發(fā)生發(fā)展;2、沉默CDK8基因表達可通過抑制Wnt/β-catenin信號通路達到抑制裸鼠體內結直腸癌肝轉移的目的。全文結論:沉默CDK8基因表達可以有效的抑制結直腸癌肝轉移,CDK8可以作為抑制結直腸癌肝轉移的靶點。
[Abstract]:Colorectal cancer is one of the most common malignant tumors. Liver metastasis is the most common form of distant metastasis. About 25% of the patients have liver metastases at the time of clinical diagnosis. The prognosis of colorectal cancer is closely related to distant metastasis, especially liver metastasis. In recent years, with the progress of technology, surgery based comprehensive treatment improves colorectal cancer liver. It is still not ideal for the improvement of the prognosis. A new therapy for inhibiting the liver metastasis of colorectal cancer is very important to improve the prognosis and prolong the survival period of the patients. Gene therapy is expected to be a new therapy for the liver metastasis of colorectal cancer. Cyclin dependent kinase 8 (CDK8) is a proto oncogene of colorectal cancer. -Wnt/ beta -catenin pathway, an important signaling pathway in the development of colorectal cancer, has a regulatory role. Therefore, CDK8 is expected to be a therapeutic target for liver metastasis in colorectal cancer. The expression of CDK8 in colorectal cancer tissue is in the first part: to detect the expression of CDK8 in colorectal cancer tissue and to analyze the relationship between CDK8 and clinicopathological features of colorectal cancer Methods: 70 cases of paraffin section of colorectal cancer were taken and 20 cases of normal colorectal tissue were selected as control. The difference between the expression of CDK8 in colorectal cancer tissues and normal colorectal tissues was detected by immunohistochemistry. The relationship between the expression of CDK8 and the clinicopathological features in colorectal cancer tissue was analyzed. Results: the expression of CDK8 in colorectal cancer tissues was positive. The rate of 71.43% was higher than the positive rate of normal colorectal tissue 30% (P0.05). The increase of CDK8 expression in the colorectal cancer tissues was related to the progression of clinical stages, lymph node metastasis and distant metastasis (P0.05); and the sex, age, the degree of differentiation of the tumor and the level of serum CEA were not related to the patients (P 0.05). Conclusion: 1, the expression of CDK8 in colorectal cancer tissues was elevated; 2, CDK 8 the increase is related to the staging and metastasis of colorectal cancer. The second part interfered with the proliferation, migration and invasion of colorectal cancer cells with CDK8 as the target: the effect of silent CDK8 gene on the proliferation, migration and invasion of colorectal cancer cells at the cell level. Methods: 1, the preparation of recombinant lentivirus LV-CDK8-sh RNA and control group silenced CDK8 gene The empty virus LV-NC, respectively, infected HCT116 cells, 2, the CDK8 gene m RNA was detected by the fluorescence quantitative PCR method, the expression of cell CDK8 protein was detected by immunoblotting; 3, the proliferation ability of the cells was detected by the MTT experiment; the scratch test was used to detect the cell migration ability; the Transwell test was used to detect the cell invasiveness. Results: 1, the HC CDK8 gene of silenced CDK8 was successfully constructed. T116 cells (control group: HCT116-luc-GFP-NC; experimental group: HCT116-luc-GFP-sh CDK8); 2, CDK8m RNA and protein expression in HCT116-luc-GFP-sh CDK8 cells were all lower than HCT116-luc-GFP-NC cells (P0.05); 3, HCT116-luc-GFP-sh CDK8 cells proliferation, migration, and invasion ability were lower than that of 1. Effective silence colon cancer HCT116 cell CDK8 gene expression; 2, after the silence of CDK8 gene expression, colon cancer HCT116 cell proliferation, migration and invasion ability are inhibited. The third part down regulation of CDK8 inhibition of colorectal cancer liver metastasis mechanism: animal experiments to observe the effect of silent CDK8 gene on colorectal cancer liver metastasis. Method: 1, construction of colorectal cancer BLAB/c nu/nu nude mice experimental model of liver metastasis; 2, living body imaging technique was used to observe the tumor growth and metastasis of nude mice in real time. 3, the expression of CDK8, beta -catenin, E2F1, MMP-7 protein was detected by protein immunoblotting in nude mice. Results: 1, the liver metastasis model of nude mice was successfully established, and 2, silent CDK8 gene expression in nude mice. Internal energy effectively inhibited the development and development of liver metastasis of colorectal cancer. 3, after the expression of silent CDK8 gene, the expression of CDK-8, beta -catenin and MMP-7 decreased in nude mice with colorectal cancer, and the expression of E2F1 increased. Conclusion: 1, silent CDK8 gene expression can effectively inhibit the development of liver metastasis in colorectal cancer, and 2, silent CDK8 gene expression can be passed through. The purpose of inhibiting Wnt/ beta -catenin signaling pathway to inhibit the liver metastasis of colorectal cancer in nude mice. Conclusion: the silence of CDK8 gene expression can effectively inhibit the liver metastasis of colorectal cancer, and CDK8 can be used as a target for inhibiting the metastasis of colorectal cancer.
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張春輝,倪啟超,王華;結直腸癌肝轉移的綜合治療[J];交通醫(yī)學;2003年06期

2 張義同,倫國英,李海軍;肝動脈化療栓塞治療結直腸癌肝轉移50例[J];山東醫(yī)藥;2005年20期

3 趙平,王成鋒,李玉升,李槐;結直腸癌肝轉移仍應積極治療[J];中華醫(yī)學雜志;2005年30期

4 龔蘇;手術切除和射頻治療孤立性結直腸癌肝轉移的比較研究[J];中國實用外科雜志;2005年08期

5 傅仲學;;結直腸癌肝轉移的診療[J];結直腸肛門外科;2006年03期

6 白嵐;;結直腸癌肝轉移的治療策略[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2006年04期

7 郭鵬;;結直腸癌肝轉移的手術治療[J];首都醫(yī)藥;2008年16期

8 韓慶海;;結直腸癌肝轉移的治療[J];中國當代醫(yī)藥;2011年02期

9 王瑾;;結直腸癌肝轉移的手術治療分析[J];醫(yī)學信息(中旬刊);2011年07期

10 黃海球;熊進文;黃勇平;;結直腸癌肝轉移的臨床特點及預后分析[J];中國醫(yī)藥指南;2011年35期

相關會議論文 前10條

1 萬德森;;結直腸癌肝轉移的外科治療[A];第六次全國大腸癌會議暨中日韓大腸癌會議論文匯編[C];1998年

2 任鏡清;周志偉;萬德森;陳功;盧震海;潘志忠;李力人;伍小軍;丁培榮;;結直腸癌肝轉移預后的多因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術會議全國大腸癌轉移與復發(fā)的診治研討會學術論文集[C];2005年

3 賈忠;封光華;賀冠海;張健;;結直腸癌肝轉移外科治療后肝內復發(fā)的再治療探討[A];2007年浙江省外科學學術會議論文匯編[C];2007年

4 顏登國;張汝一;鞠冬陽;甄運寰;姬清華;;結直腸癌肝轉移的危險因素分析[A];貴州省中西醫(yī)結合學會肛腸學會第三屆學術交流會論文匯編[C];2008年

5 鄧高里;;結直腸癌肝轉移外科治療新概念(幻燈片大綱)[A];2008年浙江省肛腸外科學術年會暨繼續(xù)教育培訓班資料匯編[C];2008年

6 鐘蕓詩;許劍民;朱德祥;任黎;韋燁;劉天舒;葉青海;樊嘉;秦新裕;;結直腸癌肝轉移1613例生存分析[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

7 周雷;介建政;宋新;唐_";王文躍;;結直腸癌肝轉移的手術治療[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

8 徐玉清;;結直腸癌肝轉移治療原則和進展[A];第九屆全國腫瘤轉移學術大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

9 丁克峰;;結直腸癌肝轉移的治療進展[A];2011年浙江省肛腸外科學術大會暨結直腸肛門疾病診治新進展學習班論文匯編[C];2011年

10 劉東舉;陳聲發(fā);黃文河;周連鎖;;結直腸癌肝轉移癌外科治療[A];第八屆全國肝癌學術會議論文匯編[C];2001年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 劉平安;結直腸癌肝轉移治療應把握三原則[N];健康報;2012年

2 記者 甘貝貝;結直腸癌肝轉移手術有新突破[N];健康報;2013年

3 張旭;結直腸癌肝轉移治療新途徑[N];中國醫(yī)藥報;2011年

4 中華醫(yī)學會外科分會胃腸學組 秦新裕邋許劍民;結直腸癌肝轉移診治指南解讀[N];健康報;2008年

5 北京朝陽醫(yī)院西區(qū)肝膽外科主任 孫文兵;結直腸癌肝轉移難題有解[N];健康報;2014年

6 記者 陳青;綜合治療 喜獲“兩個30%”佳績[N];文匯報;2010年

7 天津市第三中心醫(yī)院肝膽外科主任醫(yī)師 舒桂明;更新結直腸癌肝轉移的切除理念[N];健康報;2012年

8 記者 孫國根　通訊員 陳惠芬;綜合治療模式將肝轉移發(fā)生率降低了25%[N];健康報;2010年

9 江旗;協(xié)和醫(yī)院開辟肝轉癌治療新天地[N];福建科技報;2007年

10 記者 白毅;射頻消融治療結直腸癌肝轉移預后較好[N];中國醫(yī)藥報;2010年

相關博士學位論文 前10條

1 蔡文松;以CDK8為靶點抑制結直腸癌肝轉移的相關研究[D];廣州醫(yī)科大學;2017年

2 王VV;白介素13受體α2與結直腸癌肝轉移的關系、機制探討及臨床意義[D];復旦大學;2014年

3 呂維富;CT灌注成像評價經動脈化療栓塞治療結直腸癌肝轉移療效和預后研究[D];山東大學;2015年

4 艾爾肯·阿不力孜;MRI影像學生物標記物在肝臟惡性腫瘤中的應用研究[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

5 葉樂馳;長鏈非編碼RNA CLMAT1在結直腸癌肝轉移中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

6 崔云龍;腫瘤相關巨噬細胞與結直腸癌肝轉移的關系[D];天津醫(yī)科大學;2011年

7 郭春光;結直腸癌肝轉移相關分子標志物的篩選與鑒定[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

8 王征;結直腸癌肝轉移分子標志物的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

9 王奇;結直腸癌肝轉移手術治療的病例報告及文獻綜述[D];浙江大學;2014年

10 李浩浩;影響結直腸癌肝轉移的相關基因的動物模型的驗證研究[D];復旦大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 吳述平;結直腸癌肝轉移組織中CD133+VEGFR1+細胞及CD133+CXCR4+細胞的表達[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 郭智星;結直腸癌肝轉移的預后分析[D];福建醫(yī)科大學;2015年

3 惠菲菲;結直腸癌肝轉移與臨床病理因素的關系及Kiss-1、MMP-9基因表達情況的分析[D];蘇州大學;2015年

4 王波;同期手術與分期手術治療同時性結直腸癌肝轉移療效及安全性的薈萃分析[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

5 宇龍;結直腸癌肝轉移的外科治療現(xiàn)況[D];蚌埠醫(yī)學院;2015年

6 肖艷瓊;結直腸癌肝轉移的診斷與治療進展[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

7 汪鑫;結直腸癌肝轉移綜合序貫介入治療的臨床研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

8 楊金煒;結直腸癌肝轉移介入影像分析與病理組織學類型關系的研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

9 李波;多學科管理模式下多種方法序貫治療應用于結直腸癌肝轉移的單組臨床療效觀察[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

10 胡光明;中央型肝轉移對肝切除術后結直腸癌肝轉移患者預后的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

，

本文編號：2095372