本文選題：周期蛋白依賴(lài)性激酶8 + 結(jié)直腸癌��； 參考：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,肝臟轉(zhuǎn)移是其最常見(jiàn)的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移形式,約25%的患者在臨床確診時(shí)已有肝轉(zhuǎn)移,結(jié)直腸癌的預(yù)后與有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移尤其是肝轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年隨著技術(shù)的進(jìn)步,以手術(shù)為中心的綜合治療提高了結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的治療效果。但對(duì)其預(yù)后的改善仍不夠理想。探求抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的新療法對(duì)于改善患者預(yù)后及延長(zhǎng)生存期非常重要�；蛑委熡型蔀榻Y(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的新療法。周期蛋白依賴(lài)性激酶8(CDK8)是結(jié)直腸癌的原癌基因,其對(duì)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展中的重要信號(hào)通路-Wnt/β-catenin通路有調(diào)控作用。因而CDK8有望成為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的治療靶點(diǎn)。第一部分結(jié)直腸癌組織中CDK8的表達(dá)目的:檢測(cè)結(jié)直腸癌組織CDK8的表達(dá)并分析CDK8表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系。方法:取結(jié)直腸癌石蠟切片標(biāo)本70例,選取正常結(jié)直腸組織20例為對(duì)照。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌腫瘤組織與正常結(jié)直腸組織CDK8表達(dá)的差異;分析結(jié)直腸癌組織中CDK8表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果:結(jié)直腸癌組織CDK8表達(dá)陽(yáng)性率為71.43%,高于正常結(jié)直腸組織30%的陽(yáng)性率(P0.05)。結(jié)直腸癌組織中CDK8表達(dá)升高與臨床分期進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05);而與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、血清CEA水平高低無(wú)關(guān)(P均0.05)。結(jié)論:1、結(jié)直腸癌組織中CDK8表達(dá)升高;2、CDK8升高與結(jié)直腸癌的分期及轉(zhuǎn)移有關(guān)。第二部分以CDK8為靶點(diǎn)干預(yù)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲目的:在細(xì)胞水平觀察沉默CDK8基因?qū)Y(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響。方法:1、制備沉默CDK8基因的重組慢病毒LV-CDK8-sh RNA和對(duì)照組空病毒LV-NC,分別感染HCT116細(xì)胞;2、熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞CDK8基因m RNA,免疫蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞CDK8蛋白表達(dá);3、MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體外遷移能力;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果:1、成功構(gòu)建沉默CDK8基因的HCT116細(xì)胞(對(duì)照組:HCT116-luc-GFP-NC;實(shí)驗(yàn)組:HCT116-luc-GFP-sh CDK8);2、HCT116-luc-GFP-sh CDK8細(xì)胞CDK8m RNA及蛋白表達(dá)均較HCT116-luc-GFP-NC細(xì)胞降低(P0.05);3、HCT116-luc-GFP-sh CDK8細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力均較HCT116-luc-GFP-NC細(xì)胞降低(P0.05)結(jié)論:1、LV-CDK8-sh RNA能有效沉默結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞CDK8基因表達(dá);2、沉默CDK8基因表達(dá)后,結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力均受到抑制。第三部分下調(diào)CDK8抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移機(jī)制目的:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察沉默CDK8基因?qū)Y(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響。方法:1、構(gòu)建結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的BLAB/c nu/nu裸鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?2、活體成像技術(shù)實(shí)時(shí)觀察裸鼠腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移;3、取裸鼠肝轉(zhuǎn)移灶組織采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)CDK8、β-catenin、E2F1、MMP-7蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、成功建立裸鼠結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型;2、沉默CDK8基因表達(dá)在裸鼠體內(nèi)能有效抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展;3、沉默CDK8基因表達(dá)后,裸鼠結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移灶內(nèi)CDK-8,β-catenin和MMP-7的表達(dá)減少,而E2F1表達(dá)增加。結(jié)論:1、沉默CDK8基因表達(dá)能有效裸鼠抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展;2、沉默CDK8基因表達(dá)可通過(guò)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路達(dá)到抑制裸鼠體內(nèi)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的目的。全文結(jié)論:沉默CDK8基因表達(dá)可以有效的抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移,CDK8可以作為抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)。
[Abstract]:Colorectal cancer is one of the most common malignant tumors. Liver metastasis is the most common form of distant metastasis. About 25% of the patients have liver metastases at the time of clinical diagnosis. The prognosis of colorectal cancer is closely related to distant metastasis, especially liver metastasis. In recent years, with the progress of technology, surgery based comprehensive treatment improves colorectal cancer liver. It is still not ideal for the improvement of the prognosis. A new therapy for inhibiting the liver metastasis of colorectal cancer is very important to improve the prognosis and prolong the survival period of the patients. Gene therapy is expected to be a new therapy for the liver metastasis of colorectal cancer. Cyclin dependent kinase 8 (CDK8) is a proto oncogene of colorectal cancer. -Wnt/ beta -catenin pathway, an important signaling pathway in the development of colorectal cancer, has a regulatory role. Therefore, CDK8 is expected to be a therapeutic target for liver metastasis in colorectal cancer. The expression of CDK8 in colorectal cancer tissue is in the first part: to detect the expression of CDK8 in colorectal cancer tissue and to analyze the relationship between CDK8 and clinicopathological features of colorectal cancer Methods: 70 cases of paraffin section of colorectal cancer were taken and 20 cases of normal colorectal tissue were selected as control. The difference between the expression of CDK8 in colorectal cancer tissues and normal colorectal tissues was detected by immunohistochemistry. The relationship between the expression of CDK8 and the clinicopathological features in colorectal cancer tissue was analyzed. Results: the expression of CDK8 in colorectal cancer tissues was positive. The rate of 71.43% was higher than the positive rate of normal colorectal tissue 30% (P0.05). The increase of CDK8 expression in the colorectal cancer tissues was related to the progression of clinical stages, lymph node metastasis and distant metastasis (P0.05); and the sex, age, the degree of differentiation of the tumor and the level of serum CEA were not related to the patients (P 0.05). Conclusion: 1, the expression of CDK8 in colorectal cancer tissues was elevated; 2, CDK 8 the increase is related to the staging and metastasis of colorectal cancer. The second part interfered with the proliferation, migration and invasion of colorectal cancer cells with CDK8 as the target: the effect of silent CDK8 gene on the proliferation, migration and invasion of colorectal cancer cells at the cell level. Methods: 1, the preparation of recombinant lentivirus LV-CDK8-sh RNA and control group silenced CDK8 gene The empty virus LV-NC, respectively, infected HCT116 cells, 2, the CDK8 gene m RNA was detected by the fluorescence quantitative PCR method, the expression of cell CDK8 protein was detected by immunoblotting; 3, the proliferation ability of the cells was detected by the MTT experiment; the scratch test was used to detect the cell migration ability; the Transwell test was used to detect the cell invasiveness. Results: 1, the HC CDK8 gene of silenced CDK8 was successfully constructed. T116 cells (control group: HCT116-luc-GFP-NC; experimental group: HCT116-luc-GFP-sh CDK8); 2, CDK8m RNA and protein expression in HCT116-luc-GFP-sh CDK8 cells were all lower than HCT116-luc-GFP-NC cells (P0.05); 3, HCT116-luc-GFP-sh CDK8 cells proliferation, migration, and invasion ability were lower than that of 1. Effective silence colon cancer HCT116 cell CDK8 gene expression; 2, after the silence of CDK8 gene expression, colon cancer HCT116 cell proliferation, migration and invasion ability are inhibited. The third part down regulation of CDK8 inhibition of colorectal cancer liver metastasis mechanism: animal experiments to observe the effect of silent CDK8 gene on colorectal cancer liver metastasis. Method: 1, construction of colorectal cancer BLAB/c nu/nu nude mice experimental model of liver metastasis; 2, living body imaging technique was used to observe the tumor growth and metastasis of nude mice in real time. 3, the expression of CDK8, beta -catenin, E2F1, MMP-7 protein was detected by protein immunoblotting in nude mice. Results: 1, the liver metastasis model of nude mice was successfully established, and 2, silent CDK8 gene expression in nude mice. Internal energy effectively inhibited the development and development of liver metastasis of colorectal cancer. 3, after the expression of silent CDK8 gene, the expression of CDK-8, beta -catenin and MMP-7 decreased in nude mice with colorectal cancer, and the expression of E2F1 increased. Conclusion: 1, silent CDK8 gene expression can effectively inhibit the development of liver metastasis in colorectal cancer, and 2, silent CDK8 gene expression can be passed through. The purpose of inhibiting Wnt/ beta -catenin signaling pathway to inhibit the liver metastasis of colorectal cancer in nude mice. Conclusion: the silence of CDK8 gene expression can effectively inhibit the liver metastasis of colorectal cancer, and CDK8 can be used as a target for inhibiting the metastasis of colorectal cancer.
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2095372