本文選題：雷公藤甲素 + 卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒��； 參考：《武漢大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus, KSHV)又被稱為人皰疹病毒8型,屬于皰疹病毒γ亞科的一種雙鏈DNA病毒。人類是KSHV的天然宿主,KSHV感染后可在人體內(nèi)長期潛伏。KSHV是一種腫瘤病毒,與多種人類惡性腫瘤密切相關(guān),主要包括卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma, KS),原發(fā)性滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma, PEL)和多中心卡斯特萊曼疾病(multicentric Castleman's disease, MCD)。其中PEL屬于一種罕見的非霍奇金淋巴瘤,好發(fā)生在KSHV感染的免疫缺陷或器官移植的患者,常規(guī)抗腫瘤治療效果欠佳,預(yù)后極差。目前臨床上使用的抗病毒藥物主要是阿昔洛韋,其不但作用于病毒DNA復(fù)制,同時(shí)也影響人細(xì)胞的DNA復(fù)制。因此,探索發(fā)現(xiàn)新型的毒副作用小的靶向性小分子抑制劑并探究其分子機(jī)制對于研發(fā)有效的治療方法至關(guān)重要。雷公藤甲素(Triprolide,TP)是從中草藥雷公藤中分離得到的一種具有生物學(xué)活性的小分子化合物,其生物學(xué)活性主要包括抗炎、抗腫瘤、免疫抑制及抗生育等。本研究旨在觀察TP對于KSHV陽性的PEL細(xì)胞的影響并初步探索其分子機(jī)制。方法：通過CCK-8 (Cell Counting Kit-8)試劑盒檢測PEL細(xì)胞(BCBL-1、BC-3和JSC-1)經(jīng)不同濃度TP處理不同時(shí)間后細(xì)胞活力的變化。通過流式細(xì)胞儀檢測TP誘導(dǎo)PEL細(xì)胞周期阻滯及細(xì)胞凋亡的情況。通過Western blotting檢測PEL細(xì)胞經(jīng)不同方法處理后,目的蛋白表達(dá)水平的變化。通過熒光實(shí)時(shí)定量技術(shù)(quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR)檢測PEL細(xì)胞經(jīng)TP處理后目的蛋白mRNA水平的變化以及TP對PEL細(xì)胞中KSHV病毒粒子產(chǎn)量的影響。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測TP對PEL細(xì)胞分泌IL-6水平的影響。通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測技術(shù)(Dual luciferase reporter assay)檢測TP對人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(Human telomerase reverse transcriptase, hTERT)不同區(qū)段啟動子活性的影響。NOD/SCID (Non-obese diabetic/severe combined immunodeficient)小鼠經(jīng)BCBL-1細(xì)胞致瘤后,觀察TP對小鼠體重、腹水量、腹水細(xì)胞中KSHV潛伏相關(guān)核抗原1(Latency-associatednuclear antigen 1, LANA1)表達(dá)及對脾臟的影響。結(jié)果：TP能明顯降低KSHV陽性PEL細(xì)胞的活力,而對KSHV陰性正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)及KSHV陰性EBV陽性P3HR-1細(xì)胞增殖抑制影響不明顯；TP能誘導(dǎo)PEL細(xì)胞的凋亡,導(dǎo)致BC-3和JSC-1細(xì)胞阻滯在G0/G1期,BCBL-1細(xì)胞阻滯在G2/M期；TP能明顯降低PEL細(xì)胞中LANA1的表達(dá)水平,而對其mRNA水平影響不大；TP通過蛋白酶降解途徑誘導(dǎo)LANA1水平的下調(diào),并可影響其半衰期；TP能降低誘導(dǎo)KSHV進(jìn)入裂解期后的BCBL-1細(xì)胞內(nèi)、外病毒粒子的產(chǎn)量；TP通過降低PEL細(xì)胞中hTERT不同區(qū)段啟動子的活性,下調(diào)其mRNA水平,進(jìn)而導(dǎo)致hTERT蛋白水平的下降；TP能降低PEL細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子Spl (specificity protein 1)的表達(dá)；在PEL細(xì)胞中knockdown轉(zhuǎn)錄因子Spl (specificity protein 1)能降低PEL細(xì)胞的活力及hTERT的表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在PEL細(xì)胞中knockdown轉(zhuǎn)錄因子Sp1能增加PEL細(xì)胞對TP誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制及細(xì)胞凋亡的敏感性;TP能明顯抑制NOD/SCID小鼠腹水的增長及BCBL-1細(xì)胞對脾臟的浸潤。結(jié)論：在體內(nèi)和體外,TP均能降低PEL細(xì)胞中LANA1的表達(dá)水平,抑制KSHV陽性PEL細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；TP可通過降低PEL細(xì)胞Sp1的表達(dá),抑制hTERT的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而抑制PEL細(xì)胞的增殖及永生化。通過對TP在KSHV陽性PEL細(xì)胞中抗病毒及抗腫瘤作用的研究,為后續(xù)TP及其衍生物用于治療KSHV相關(guān)惡性腫瘤的基礎(chǔ)理論研究奠定了一定的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: Kaposi's sarcoma associated herpesvirus (Kaposi's sarcoma-associated, herpesvirus, KSHV) is also called human herpesvirus 8, a double stranded DNA virus belonging to the subfamily of herpes simplex virus gamma. Humans are the natural host of KSHV, after KSHV infection in the human body can long-term latent.KSHV is a tumor virus, and a variety of human malignant tumor. Cut, including Kaposi's sarcoma (Kaposi's sarcoma, KS), primary effusion lymphoma (primary effusion, lymphoma, PEL) and multi center (multicentric Castleman's disease, Castleman's disease MCD). The PEL is a rare type of non Hodgkin's lymphoma, occurs in immunodeficiency or organ transplantation KSHV infection. Patients with poor general anti-tumor treatment effect the prognosis. The current clinical use of antiviral drugs is mainly A Silowe, which not only effects on viral DNA replication, but also affect the replication of human cell DNA. Therefore, the discovery of new low toxicity targeting small molecule inhibitors and explore the molecular mechanism for the development of there Is effective. Triptolide (Triprolide, TP) is a small molecule bioactive compounds have been isolated from a Chinese herb Tripterygium wilfordii, its biological activities including anti-inflammatory, antitumor, immune suppression and anti fertility. The purpose of this study is to observe the effect of TP in KSHV positive cells and PEL preliminary exploration Its molecular mechanism. Methods: the CCK-8 (Cell Counting Kit-8) PEL cell detection kit (BCBL-1, BC-3 and JSC-1) the changes of cell viability in different time after treatment with different concentrations of TP. Cell cycle arrest and induced apoptosis of PEL cells by flow cytometry in TP conditions. PEL cell line was detected by Western blotting with different methods After the treatment, the expression of the target protein. By real-time quantitative technique (quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR) detection of PEL cell effect on KSHV virus particles in PEL cells yield via changes in protein mRNA levels after treatment with TP and TP by enzyme linked immunosorbent assay (Enzyme-linked immunosor Bent assay, ELISA) to study the effect of TP on the level of IL-6 secretion of PEL cells. Using the dual luciferase reporter assay technique (Dual luciferase reporter assay TP) detection of human telomerase reverse transcriptase (Human telomerase reverse transcriptase, hTERT) of different segments of promoter activity of.NOD/SCID (Non-obese diabetic/severe com Bined immunodeficient) mice by BCBL-1 cells induced by the tumor, the effect of TP on mice body weight, volume of ascites, ascites cells KSHV latency associated nuclear antigen 1 (Latency-associatednuclear antigen 1, LANA1) expression and effect on spleen. Results: TP can significantly reduce the KSHV positive PEL cell viability of KSHV negative normal peripheral blood mononuclear Cells (Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs) and KSHV negative EBV positive P3HR-1 cell proliferation inhibition effect is not obvious; TP can induce apoptosis of PEL cells, resulting in BC-3 and JSC-1 cells were blocked in G0/G1 phase, BCBL-1 cells were arrested in G2/M phase; TP can significantly reduce the expression level of LANA1 in PEL cells, but have little effect on the the level of mRNA LANA1; TP induced down-regulation level through the proteasomal degradation pathway, and may influence its half-life; TP can reduce KSHV induced during lytic after BCBL-1 cells, outer virus particle production; by reducing TP hTERT PEL cells in different sections of promoter activity, reduce the mRNA level, which leads to a decrease in hTERT protein levels TP; Reduce the transcription factor Spl in PEL cells (specificity protein 1) expression in PEL cells; knockdown transcription factor Spl (specificity protein 1) expression can reduce the activity and hTERT of PEL cells, induce apoptosis in PEL cells. Knockdown transcription factor Sp1 can inhibit cell proliferation and increase of apoptosis induced by TP PEL cell The sensitivity; infiltration growth of TP can significantly inhibit NOD/SCID of mouse ascites and BCBL-1 cells of the spleen. Conclusion: in vivo and in vitro, TP could reduce the expression level of LANA1 in PEL cells, inhibit KSHV positive PEL cell proliferation, induce cell apoptosis; TP can inhibit the expression of PEL Sp1 cells, transcription inhibition hTERT, inhibit PEL cell proliferation and immortalization. Through the study of TP in KSHV positive PEL cells in antiviral and antitumor effects, lays a foundation for theoretical research for the treatment of malignant KSHV tumors and its derivatives used for subsequent TP.
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉明星,董靜,楊亞江,楊祥良,徐輝碧;雷公藤甲素的研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2005年03期

2 鄭家潤;;雷公藤應(yīng)用研究存在的問題[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2009年02期

3 莫玉潔;朱建華;;雷公藤甲素抗雄性生育作用研究進(jìn)展[J];科技信息;2013年02期

4 賈力;;雷公藤甲素注射液的穩(wěn)定性試驗(yàn)[J];中國藥學(xué)雜志;1985年10期

5 郭曉莊;雷公藤研究新進(jìn)展——全國第二次雷公藤學(xué)術(shù)研討會概況報(bào)道[J];綜合臨床醫(yī)學(xué);1991年05期

6 張亮,張正行,盛龍生,安登魁;毛細(xì)管氣相色譜法測定不同產(chǎn)地雷公藤中雷公藤甲素的含量[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);1992年03期

7 李愛群,周蓓,何羿婷;雷公藤甲素透皮吸收特性的初步研究[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2002年01期

8 畢秀芹,陶君彥,畢曉黎;雷公藤根皮及地上部分的研究進(jìn)展[J];湖北中醫(yī)雜志;2004年01期

9 翁小滿,Atkinson S,Gorak-Stolinska P,Dockrell H.M;雷公藤免疫調(diào)節(jié)的體外研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2004年12期

10 劉勸,王友群;雷公藤甲素的藥理作用研究[J];藥學(xué)進(jìn)展;2005年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 周祖山;;雷公藤的研究與臨床應(yīng)用[A];全國有毒中藥在風(fēng)濕病治療中的應(yīng)用與研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班講義[C];2010年

2 田磊磊;譚鵬;李飛;;雷公藤炮制前后雷公藤甲素的含量比較研究[A];2010中藥炮制技術(shù)、學(xué)術(shù)交流暨產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇論文集[C];2010年

3 沈思鈺;;雷公藤甲素的研究進(jìn)展[A];2010年全國中藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

4 崔勇;;雷公藤甲素對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)的作用[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

5 黃光照;劉良;韋登明;;雷公藤的毒理病理、臨床應(yīng)用的毒副反應(yīng)及其拮抗藥的研究[A];第四次全國雷公藤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

6 葉海英;;雷公藤及其制劑的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[A];第四次全國雷公藤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 林娜;劉春芳;賈紅偉;肖誠;吳皓;;雷公藤甲素對小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的抑制作用[A];第四次全國雷公藤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

8 黃文華;郭寶林;斯金平;阮秀春;余競光;孫蘭;;雷公藤屬3種植物不同群體和個(gè)體雷公藤甲素含量研究[A];藥用植物研究與中藥現(xiàn)代化——第四屆全國藥用植物學(xué)與植物藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

9 畢曉黎;周偉雄;黃偉年;楊少強(qiáng);雷華;倪吉志;;雷公藤根皮及地上部分的研究進(jìn)展[A];全國中藥標(biāo)準(zhǔn)研究學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

10 沈思鈺;;雷公藤甲素的研究進(jìn)展[A];第5次全國中西醫(yī)結(jié)合男科學(xué)術(shù)會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 張美容;泰寧發(fā)展雷公藤產(chǎn)業(yè)助農(nóng)增收[N];福建日報(bào);2009年

2 周大彬 通訊員　 藍(lán)云龍 郎衛(wèi)紅;雷公藤產(chǎn)業(yè)化發(fā)展“底氣”足了[N];麗水日報(bào);2006年

3 本報(bào)記者 駱志雄;泰寧雷公藤邁入產(chǎn)業(yè)化門檻[N];三明日報(bào);2009年

4 本報(bào)記者 鄭玉容;農(nóng)業(yè)對接項(xiàng)目多[N];福建科技報(bào);2006年

5 張美容;泰寧生物制藥產(chǎn)業(yè)助農(nóng)增收[N];三明日報(bào);2009年

6 本報(bào)記者 馮磊;中藥研究應(yīng)為臨床提供支撐[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 沈劍;萃取過程強(qiáng)化的基礎(chǔ)研究及在雷公藤甲素分離中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2011年

2 李毅;雷公藤甲素對炎性腸病（克羅恩�。┠c黏膜免疫系統(tǒng)IL-6/STAT3信號通路的干預(yù)機(jī)制[D];南京大學(xué);2011年

3 趙飛;雷公藤甲素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和自噬的分子機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

4 曾嶸;慢性腎臟病—腎間質(zhì)纖維化易感基因的Meta分析及雷公藤甲素的干預(yù)機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2016年

5 龍聰;雷公藤甲素對原發(fā)性滲出性淋巴瘤細(xì)胞的影響及分子機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2016年

6 楊帆;雷公藤甲素急性腎毒性作用機(jī)制及抗氧化劑維生素C對腎臟的保護(hù)作用的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

7 張聰;雷公藤甲素脂質(zhì)納米粒研究[D];華中科技大學(xué);2014年

8 陳晉廣;雷公藤甲素醇質(zhì)體活性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 曲亮;基于鞘脂代謝組學(xué)雷公藤甲素和雷公藤多苷片藥效和毒性作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

10 丁怡;雷公藤甲素抗血管生成的作用及機(jī)理研究[D];四川大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 駱錦彬;SRp20蛋白與雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡的相關(guān)機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 童洋飛;雷公藤甲素對心肌細(xì)胞周期抑制因子CDKN1a表達(dá)及心肌肥大的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 樊梅;脒修飾的載雷公藤甲素陽離子脂質(zhì)體的腎小球靶向給藥系統(tǒng)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 李猛;雷公藤甲素對人乳腺癌干細(xì)胞干性的影響與初步機(jī)制研究[D];中國海洋大學(xué);2015年

5 許可嘉;自噬介導(dǎo)的雷公藤甲素肝臟毒性研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 徐慧慧;雷公藤甲素對Tregs-OC共培養(yǎng)體系中OC分化及骨吸收功能的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 周雪;MSCs上清緩解雷公藤甲素?fù)p害卵巢顆粒細(xì)胞機(jī)制的探究[D];南京大學(xué);2014年

8 饒明錦;天然小分子雷公藤甲素抑制Hedgehog信號通路活性研究[D];華東師范大學(xué);2015年

9 付陽;膀胱灌注雷公藤甲素對大鼠膀胱癌的作用及其機(jī)制研究[D];東南大學(xué);2015年

10 焦曉琳;雷公藤甲素誘導(dǎo)K562/G01細(xì)胞凋亡的MDM2-P53機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號：2047382