本文選題：姜黃素 + 順鉑��； 參考：《川北醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:觀察姜黃素(curcumin,以下簡稱CUR)及順鉑(cisplatin,以下簡稱DDP)對人神經(jīng)母細胞瘤細胞(Neuroblastoma)SK-N-SH細胞系增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響,并初步探討CUR和DDP誘導SK-N-SH細胞凋亡的可能機制。方法:(1)體外培養(yǎng)神經(jīng)母細胞瘤細胞系SK-N-SH細胞,實驗分5組:空白對照組(只有細胞無其他處理因素);溶劑對照組(僅給予0.1%DMSO);DDP(5、7.5、10μmol/L);CUR(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、25μmol/L、30μmol/L、35μmol);聯(lián)用組(DDP5μmol/L+CUR30μmol/L、DDP7.5μmol/L+CUR30μmol/L、DDP10μmol/L+CUR30μmol/L);根據(jù)不同的處理因素培養(yǎng)24h后,CCK-8法檢測DDP和(或)CUR對SK-N-SH細胞的增殖活性的影響,并篩選DDP和CUR的最佳聯(lián)合濃度用于后續(xù)實驗。(2)實驗分4組:溶劑對照組(0.1%DMSO);CUR組(30μmol/L);DDP組(7.5μmol/L);聯(lián)用組(CUR30μmol/L+DDP7.5μmol/L)。應用流式細胞術檢測細胞凋亡情況;采用Real-time PCR、Western blot分別檢測Caspase-3、Bcl-2m RNA及蛋白表達;采用細胞劃痕及Transwell侵襲實驗分別檢測細胞遷移及侵襲情況。結(jié)果:(1)CCK-8結(jié)果顯示:DDP和CUR對SK-N-SH細胞均具有生長抑制作用,并且都對細胞的抑制作用有濃度依賴。而聯(lián)用組與單藥組比較,SK-N-SH細胞增殖明顯降低。用金正均法計算各聯(lián)用組q值,q均介于0.85-1.15之間,提示兩藥聯(lián)用時抑制SK-N-SH細胞的增殖方面有藥效相加效應,兩藥的最佳聯(lián)合劑量是CUR30μmol/L+DDP7.5μmol/L。(2)流式細胞術檢測結(jié)果顯示:CUR及DDP單用組的細胞凋亡率顯著高于溶劑對照組,聯(lián)用組細胞凋亡率明顯高于單藥組。溶劑對照組、CUR組、DDP組和聯(lián)用組凋亡的比例分別為3.11±0.14%、14.25±0.29%、8.89±0.28%、19.13±0.40%。(3)Real-time PCR檢測結(jié)果顯示:CUR、DDP單獨作用可明顯下調(diào)Bcl-2m RNA表達水平,Caspase-3m RNA表達上調(diào),二者聯(lián)合作用時效果更明顯。(4)Western blot實驗結(jié)果提示CUR或DDP作用后SK-N-SH細胞中的Caspase-3蛋白的表達水平明顯升高,而Bcl-2蛋白的表達水平則明顯降低。聯(lián)用組處理細胞后,以上變化趨勢更加明顯。(5)Transwell侵襲實驗及劃痕實驗結(jié)果表明CUR及DDP都可以影響神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞的迂移及侵襲能力。經(jīng)過藥物刺激后,神經(jīng)母細胞瘤的細胞遷徙及侵襲能力減弱,在劃痕實驗中,溶劑對照組的細胞遷移的距離和細胞數(shù)量明顯多于用藥組。在Transwell實驗中單用CUR或者DDP處理過的細胞移至下孔的細胞數(shù)少于溶劑對照組,兩藥聯(lián)用比單用藥物效果更加顯著。結(jié)論:(1)CUR及DDP對SK-N-SH細胞的增殖均有抑制作用,均表現(xiàn)出濃度依賴性。兩藥在抑制細胞的增殖作用表現(xiàn)為作用相加。(2)CUR及DDP均能促進SK-N-SH細胞凋亡,抑制其增殖,兩藥聯(lián)用時效果更明顯。二者對SK-N-SH細胞調(diào)亡的作用機制可能與下調(diào)Bcl-2及上調(diào)Caspase-3相關。(3)CUR和DDP能抑制SK-N-SH細胞的遷移和侵襲,兩藥聯(lián)用組較單藥使用更加顯著。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of curcumin (curcumin) and cisplatin (DDP) on the proliferation, apoptosis, migration and invasion of human neuroblastoma- SK-N-SH cell line, and to explore the possible mechanism of apoptosis of SK-N-SH cells induced by cur and DDP. Methods the neuroblastoma cell line SK-N-SH was cultured in vitro. 瀹為獙鍒，

本文編號：2029463