本文選題：白血病抑制因子 + 胃癌　； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：背景近年來隨著胃癌相關(guān)診療技術(shù)的不斷進(jìn)步,胃癌患者的總體生存率得到了顯著提高,但其整體治療效果仍不十分理想。腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是其重要的惡性生物學(xué)行為,從根本上尋找腫瘤發(fā)生、發(fā)展及惡性生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)機(jī)制,可以有效提高胃癌的治療效果。目的研究LIF在胃癌中的表達(dá)情況與病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性,評價(jià)其在胃癌診斷方面的價(jià)值,探索LIF對胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響,并進(jìn)一步探討具體作用機(jī)制。方法1.利用ELISA技術(shù)檢測208例胃癌患者、67例慢性萎縮性胃炎患者和70例正常人LIF因子外周血表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)染色檢測128例胃癌石蠟切塊LIF和LIFR在組織中的表達(dá)。通過Western blot和qRT-PCR方法檢測40例胃癌新鮮組織樣本及配對的癌旁正常組織中LIF和LIFR蛋白和mRNA的表達(dá)情況,并與臨床病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。2.篩選LIF低表達(dá)、LIFR高表達(dá)的胃癌細(xì)胞株(Western blot和qRT-PCR方法)。利用RNA干擾技術(shù),借助質(zhì)粒為載體,敲低胃癌細(xì)胞株中LIFR的表達(dá)。通過CCK-8、EdU和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測加入外源性LIF因子及沉默LIFR基因后,對胃癌細(xì)胞增殖能力的影響。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測LIF及沉默LIFR對胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布和凋亡的影響。采用Transwell實(shí)驗(yàn)觀察LIF及沉默LIFR對胃癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。通過裸鼠體內(nèi)成瘤模型探討LIF及沉默LIFR后對腫瘤生長的影響。3.Western blot法和細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)檢測LIF對Hippo-YAP信號通路中核心元件的影響及相互關(guān)系。利用siRNA沉默信號通路下游YAP蛋白表達(dá)后,通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測LIF是否主要通過Hippo-YAP信號對胃癌細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響。結(jié)果1.胃癌患者、慢性萎縮性胃炎患者、正常人外周血LIF水平分別為8.650±6.282 pg/ml、4.325±1.824 pg/ml、3.344±1.918 pg/ml。胃癌患者LIF水平明顯高于慢性萎縮性胃炎患者(P=0.003)和正常人(P0.001)。LIF診斷胃癌的界值為5.585 pg/ml,診斷敏感度：88.14%,特異度：81.82%,準(zhǔn)確度：85.64%。免疫組化結(jié)果顯示：LIF和LIFR在胃癌中的陽性表達(dá)率明顯高于正常粘膜(P0.001),與腫瘤分化程度(P=0.021)、脈管浸潤(P=0.001)、T分期(P=0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)及pTNM分期(P=0.012)存在相關(guān)性。相同腫瘤組織中LIF與LIFR的蛋白表達(dá)量及mRNA含量呈正性相關(guān)(P0.001,P0.001)。利用Cox回歸多因素生存模型分析患者的預(yù)后相關(guān)因素發(fā)現(xiàn)LIF及LIFR與預(yù)后緊密相關(guān),是獨(dú)立的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素(P=0.009, P=0.034)。 2.MGC803細(xì)胞在幾種常見胃癌細(xì)胞系中LIF的表達(dá)量最低,LIFR的表達(dá)量最高。加入外源性LIF可以顯著增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移、抗凋亡能力和裸鼠體內(nèi)成瘤速度(P0.001)。沉默LIFR后,與陰性對照組相比,細(xì)胞的上述惡性生物學(xué)行為能力被明顯減弱,且在LIFR被沉默的細(xì)胞中再次加入LIF無法發(fā)揮上述LIF的腫瘤促進(jìn)作用。3.LIF可以顯著降低Hippo-YAP信號通路中核心元件的磷酸化水平(P0.001),并促進(jìn)YAP蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。另外,LIF無法促進(jìn)YAP-siRNA細(xì)胞的增殖。結(jié)論1.LIF參與了胃癌內(nèi)在的發(fā)生過程,能夠用于胃癌的診斷,并且與胃癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后緊密相關(guān)。2.LIF可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為,而沉默LIFR可以抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在LIFR表達(dá)被沉默后,再次加入LIF無法發(fā)揮其作用,提示LIF是與其受體LIFR結(jié)合,增強(qiáng)腫瘤的惡性生物學(xué)行為能力。3.LIF可以有效降低細(xì)胞內(nèi)MST1/2、LATS1和YAP磷酸化蛋白的含量,從而抑制了Hippo-YAP通路中的核心元件,最終促進(jìn)YAP的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。4.LIF在胃癌的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起到了重要作用,能夠成為未來胃癌靶向治療的重要研究方向。運(yùn)用LIF抗體或沉默LIFR的表達(dá)可以成為一種新型的胃癌個體化治療手段。
[Abstract]:Background in recent years, with the continuous progress of gastric cancer related diagnosis and treatment technology, the overall survival rate of gastric cancer patients has been significantly improved, but its overall treatment effect is still not very ideal. Tumor proliferation, invasion and metastasis are its important malignant biological behavior, fundamentally looking for the occurrence of swelling, development and malignant biological behavior of the regulator The purpose of this study is to effectively improve the therapeutic effect of gastric cancer. Objective to study the correlation between the expression of LIF in gastric cancer and the pathological parameters and prognosis, evaluate its value in the diagnosis of gastric cancer, explore the effect of LIF on the biological behavior of gastric cancer cell proliferation, invasion and metastasis, and further explore the specific mechanism of action. Method 1. using ELISA technique The expression of LIF factor LIF factor expression in 208 cases of gastric cancer, 67 cases of chronic atrophic gastritis and 70 normal people was detected. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of LIF and LIFR in 128 cases of paraffin section of gastric cancer. The Western blot and qRT-PCR methods were used to detect the fresh tissue samples in 40 cases of gastric cancer and the LIF in the normal tissues adjacent to the cancer. The expression of LIFR protein and mRNA, and the correlation with the clinicopathological parameters and prognosis analysis.2. screening LIF low expression, LIFR high expression of gastric cancer cell line (Western blot and qRT-PCR method). Using RNA interference technique and plasmid as carrier, the expression of LIFR in low gastric cancer cell lines was knocked down by CCK-8, EdU and flat clones. The effects of exogenous LIF factor and silencing of LIFR gene on the proliferation of gastric cancer cells were measured. Flow cytometry was used to detect the effects of LIF and silent LIFR on the cell cycle distribution and apoptosis of gastric cancer cells. The effects of LIF and silent LIFR on the invasion and migration of gastric cancer cells were observed by Transwell test. The effect of LIF and silencing of LIFR on tumor growth was investigated by the tumor model..3.Western blot method and cell immunofluorescence staining technique were used to detect the influence and relationship of LIF on the core components in the Hippo-YAP signaling pathway. The CCK-8 test was used to detect LIF through the Hippo-YAP signal after the expression of the YAP protein downstream of the siRNA silent signal pathway. Results in 1. gastric cancer patients, chronic atrophic gastritis, normal human peripheral blood LIF levels were 8.650 + 6.282 pg/ml, 4.325 + 1.824 pg/ml, 3.344 + 1.918 pg/ml. gastric cancer patients were significantly higher than those of chronic atrophic gastritis (P=0.003) and normal human (P0.001).LIF for the diagnosis of gastric cancer at the boundary value of 5.585 pg/ Ml, diagnostic sensitivity: 88.14%, specificity: 81.82%, accuracy: the results of 85.64%. immunohistochemical staining showed that the positive expression rate of LIF and LIFR in gastric cancer was significantly higher than that of normal mucosa (P0.001), and the correlation with tumor differentiation (P=0.021), vascular infiltration (P=0.001), T staging (P= 0.001), lymph node metastasis (P=0.001) and pTNM stage (P=0.012). The protein expression of LIF and LIFR in the same tumor tissues was positively correlated with the content of mRNA (P0.001, P0.001). Using Cox regression multivariate survival model to analyze the prognosis related factors of patients, it was found that LIF and LIFR were closely related to prognosis, which was an independent prognostic risk factor (P=0.009, P= 0.034). 2.MGC803 cells in several common gastric cancer cell lines were associated with LI. The expression of F was the lowest and the expression of LIFR was the highest. Adding exogenous LIF could significantly enhance cell proliferation, invasion, migration, anti apoptotic ability and tumorigenic speed (P0.001) in nude mice. After silent LIFR, the above malignant biological behavior of cells was significantly weakened compared with the negative control group, and the cells were added again in the silent cells of LIFR. LIF can not play the tumor promoting effect of the above LIF,.3.LIF can significantly reduce the phosphorylation level of the core components in the Hippo-YAP signaling pathway (P0.001), and promote the intra nuclear transfer of YAP protein. Moreover, LIF can not promote the proliferation of YAP-siRNA cells. Conclusion 1.LIF is involved in the pathogenesis of gastric cancer, and can be used in the diagnosis of gastric cancer, and It is closely related to the proliferation, invasion, metastasis and prognosis of gastric cancer..2.LIF can promote the proliferation, invasion and metastasis of gastric cancer cells, while silence LIFR can inhibit the occurrence and development of tumor. After the expression of LIFR is silenced, LIF can not play its role again, suggesting that LIF is combined with its receptor LIFR to enhance the tumor. The malignant biological behavior.3.LIF can effectively reduce the content of MST1/2, LATS1 and YAP phosphorylated proteins in the cells, thus inhibiting the core elements in the Hippo-YAP pathway, and ultimately promoting the metastasis of YAP in the nuclear transfer of.4.LIF in the occurrence, progression, invasion and metastasis of gastric cancer, which can become a heavy target for the target treatment of gastric cancer in the future. The use of LIF antibody or silencing LIFR expression can become a new personalized treatment for gastric cancer.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

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本文編號：1984265