本文選題：腫瘤相關巨噬細胞 + 腫瘤微環(huán)境��； 參考：《蘇州大學》2016年碩士論文

【摘要】：已有大量的研究證據(jù)證明在惡性腫瘤微環(huán)境(TME)中M2型巨噬細胞的含量表現(xiàn)為明顯升高,在癌癥組織中,腫瘤相關巨噬細胞被招募到腫瘤細胞分泌的細胞因子的腫瘤間質(zhì)中來,從而促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,而腫瘤間質(zhì)正是構(gòu)成腫瘤微環(huán)境的主要組成成分。在這項研究中,我們側(cè)重于研究TME中免疫細胞中的M2巨噬細胞在結(jié)腸腫瘤間質(zhì)中作用于microRNA-195-5p的這一過程。首先研究microRNA-195-5p以及其靶基因MAGE的作用機理,先建立一個共培養(yǎng)體系使THP-1轉(zhuǎn)化為M 2的巨噬細胞。方法是從培養(yǎng)的結(jié)腸癌細胞(LoVo細胞株)提取培養(yǎng)基上清液,用佛波酯(PMA,美國sigma公司產(chǎn))和LoVo上清液一起刺激THP-1細胞轉(zhuǎn)化為M2型巨噬細胞;第二步驗證轉(zhuǎn)化好的巨噬細胞表型,方法為:ELISA和流式細胞術測定特定的細胞因子表達;第三步:提取M2巨噬細胞中miR-195-5p用RT-PCR和免疫印跡證實了miR-195下調(diào),同時它的靶蛋白MAGE升高,接下來,transwell侵襲試驗表明,LoVo細胞及巨噬細胞共培養(yǎng)后上調(diào)和下調(diào)巨噬細胞內(nèi)miR-195-5p,分別可以使LoVo細胞侵襲能力下降和上升。結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,近年來隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前結(jié)腸癌的早期診斷仍然比較困難,多數(shù)患者診斷時己有遠處轉(zhuǎn)移�，F(xiàn)今腫瘤微環(huán)境對腫瘤的影響成為新的研究熱點,而腫瘤相關巨噬細胞(tumor associated macrophage,TAM)作為其中重要組成成分,在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用尤為突出。腫瘤相關巨噬細胞位于腫瘤間質(zhì),它可以通過產(chǎn)生細胞因子或直接調(diào)控基因及靶蛋白作用于腫瘤細胞,從而改變惡性腫瘤的生長、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學特性。既往研究中發(fā)現(xiàn)腫瘤相關巨噬細胞與大多數(shù)癌癥都密切相關,同時,它的浸潤程度與這些腫瘤患者的預后呈負相關。本研究通過建立上述共培養(yǎng)體系并檢測微小RNA-195-5p的變化,探討腫瘤相關巨噬細胞對結(jié)腸癌生物學行為的影響。研究目的1.建立共培養(yǎng)模型,驗證共培養(yǎng)體系中細胞成分為M2型巨噬細胞。2.M2型巨噬細胞的下行調(diào)控microRNA-195-5p,從而使MAGE表達量增加,進而影響結(jié)腸癌的生物學特性。
[Abstract]:There has been a lot of evidence that M2 macrophages are significantly increased in malignant tumor microenvironment (TME). In cancer tissues, tumor-associated macrophages are recruited into the tumor stroma of cytokines secreted by tumor cells. Thus, the invasion and metastasis of tumor cells are promoted, and tumor stroma is the main component of tumor microenvironment. In this study, we focused on the process by which M2 macrophages from immune cells in TME act on microRNA-195-5p in the stroma of colon tumors. Firstly, the mechanism of microRNA-195-5p and its target gene MAGE was studied. Firstly, a co-culture system was established to transform THP-1 into M 2 macrophages. The method was to extract the supernatant from the culture medium of colon cancer cell line LoVo, and to stimulate the transformation of THP-1 cells into M2 macrophages by using PMA and LoVo supernatants. The second step was to verify the phenotype of transformed macrophages. Methods miR-195-5p was extracted from M2 macrophages to determine the expression of specific cytokines by using a specific Elisa and flow cytometry. MiR-195 was down-regulated by RT-PCR and Western blotting, while its target protein MAGE was increased. Furthermore, transwell invasion assay showed that LoVo cells could up-regulate and down-regulate miR-195-5pafter co-culture of LoVo cells and macrophages, which decreased and increased the invasiveness of LoVo cells, respectively. Colon cancer is one of the most common malignant tumors in digestive system. In recent years, with the improvement of people's living standard and the change of dietary structure, the incidence of colon cancer is increasing year by year. At present, the early diagnosis of colon cancer is still difficult, most patients have distant metastasis. Nowadays, the influence of tumor microenvironment on tumor has become a new research hotspot. As an important component of tumor associated macrophage, tumor associated macrophage plays an important role in the occurrence, development and metastasis of malignant tumor. Tumor-associated macrophages are located in the stroma of tumor. They can act on tumor cells by producing cytokines or directly regulating genes and target proteins, thus changing the biological characteristics of malignant tumor such as growth, proliferation, invasion and metastasis. Previous studies have found that tumor-associated macrophages are closely associated with most cancers, and their degree of infiltration is negatively correlated with the prognosis of these patients. In this study, the effects of tumor associated macrophages on the biological behavior of colon cancer were investigated by establishing the above co-culture system and detecting the changes of small RNA-195-5p. Objective 1. A co-culture model was established to verify the down-regulation of microRNA-195-5p. the cell component of the co-culture system was M2 macrophage. 2. The microRNA-195-5p was regulated by microRNA-195-5p. thus the expression of MAGE was increased and the biological characteristics of colon cancer were affected.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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