本文選題：青蒿琥酯 + 耐藥逆轉　； 參考：《廣西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過建立具有化療耐受性的腫瘤細胞裸鼠腮腺移植瘤模型,利用青蒿琥酯(Artesunate,ART)給藥干預,觀察和研究,在體內(nèi)實驗中青蒿琥酯是否對移植瘤的增殖存在影響及探討其體內(nèi)逆轉順鉑(Cisplatin,DDP)耐藥作用的相關機制。方法:選用人宮頸癌HELA細胞作為親本細胞,在體外培養(yǎng)環(huán)境下,經(jīng)低濃度、周期性順鉑作用的方法誘導獲得具有多藥耐藥性的HELA-DDP細胞后,選用5周齡的BALB/C-nu雄性裸小鼠,采用經(jīng)皮穿刺腮腺內(nèi)接種耐藥細胞的方式,于裸鼠腮腺內(nèi)接種癌細胞,接種量為2×106細胞/30μl,建立化療耐受性惡性腫瘤細胞裸鼠腮腺移植瘤模型。接種7天后觀測成瘤情況,觸診觀察動物接種側腮腺,如觸及圓形或類圓形硬結,視為裸鼠腮腺移植瘤建模注射成功。遂應用隨機表法將裸鼠分為生理鹽水對照組、DDP 1.0 mg/kg組、DDP 2.0 mg/kg組、ART 50.0 mg/kg組、ART 100.0 mg/kg組、ART 200.0 mg/kg組、聯(lián)合用藥組(ART 100 mg/kg+DDP 1.0 mg/kg),每組5只,共7組,隔日腹腔注射給藥,觀察裸鼠進食及精神狀況,測量裸鼠體重及移植瘤長短徑,繪制裸鼠體重變化曲線圖、移植瘤生長曲線圖,給藥30天后處死動物,取瘤稱重,并計算抑瘤率。取瘤體組織及裸鼠肝臟組織,HE染色光鏡下觀察各實驗組的腫瘤組織及肝臟的病理性改變;透射電鏡觀察各實驗組移植瘤中的耐藥細胞內(nèi)部超微結構的改變;免疫組化法、實時熒光定量PCR法及Western blot法檢測移植瘤組織中耐藥相關基因Survivin、MRP2、ERCC1的表達情況。結果:1.接種7日后,所有動物接種側腮腺均出現(xiàn)硬結,經(jīng)皮注射建模成瘤率達100%,瘤體均位于腮腺組織內(nèi),建模成功。給藥干預4周后,各實驗組的移植瘤體積均較生理鹽水對照組的體積小,其中DDP2.0 mg/kg組的移植瘤平均體積最小,抑瘤率最高為59.86%(P0.01),但該組裸鼠體重減輕明顯;青蒿琥酯各個濃度組的抑瘤率呈劑量依賴性,其中ART 200.0 mg/kg組的抑瘤率最高為43.54%(P0.05),ART100.0 mg/kg組和ART 50.0 mg/kg組抑瘤率分別為31.29%(P0.05)和10.2%(P0.05),且青蒿琥酯組裸鼠精神狀態(tài)均良好,體重穩(wěn)定增加;聯(lián)合用藥組的抑瘤率為41.16%(P0.05)雖然與ART 200.0mg/kg組相近,但該組裸鼠體重減輕,精神狀態(tài)較差。2.HE染色結果顯示:生理鹽水組移植瘤的大部分腫瘤細胞生長較為旺盛,細胞的異形性比較其他實驗組明顯,核仁大且分裂象易見。給藥干預后,DDP 200.0 mg/kg組和ART 200.0 mg/kg組的腫瘤細胞體積較生理鹽水組小,細胞核出現(xiàn)了深染、固縮的現(xiàn)象,核染色質明顯濃縮、碎裂成片狀,核分裂象少見,細胞間可見大片紅染的、無結構的玻璃樣變區(qū)。裸鼠肝臟切片可見生理鹽水組和青蒿琥酯組的肝細胞形態(tài)結構正常,而順鉑用藥組隨著濃度的增加肝細胞出現(xiàn)水腫及空泡性改變的現(xiàn)象更為明顯,且胞漿出現(xiàn)紅色顆粒樣結構,肝小葉結構混亂,組織間隙明顯增寬。3.透射電鏡結果顯示:給藥干預后可見,DDP 200.0 mg/kg組和ART 200.0 mg/kg組移植瘤組織細胞的細胞膜的連續(xù)性明顯遭到破壞呈現(xiàn)為不完整的狀態(tài),細胞質內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)呈不同程度的空泡性改變,甚至發(fā)生崩解;可見線粒體內(nèi)出現(xiàn)了不同程度的腫脹,細胞質內(nèi)也發(fā)生了空泡化的改變,可見細胞核被細胞質內(nèi)的空泡擠壓偏至一側。4.免疫組化結果顯示:青蒿琥酯組的移植瘤組織中Survivin、MRP2根據(jù)蛋白表達量所測算出的平均光密度值(MOD)隨ART濃度的升高而降低。5.RT-qPCR結果顯示:隨青蒿琥酯濃度增加,移植瘤組織中的耐藥基因Survivin、MRP2和ERCC1的m RNA表達量均呈下調趨勢(P0.01)。6.Western blot結果顯示:隨青蒿琥酯濃度增加,移植瘤組織中的耐藥相關蛋白Survivin、MRP2的表達水平均出現(xiàn)顯著的下調趨勢(P0.001)。結論:1.本課題組前期誘導的具有穩(wěn)定的多藥耐藥性的耐藥細胞系具有較強的細胞活性及致瘤性,可在裸鼠腮腺建立裸鼠腮腺移植瘤模型。2.青蒿琥酯在體內(nèi)實驗中能有效抑制移植瘤的增殖,且在裸鼠體內(nèi)使用時產(chǎn)生的毒副作用較順鉑小。3.青蒿琥酯在體內(nèi)實驗中能下調耐藥細胞中耐藥相關基因Survivin、MRP2、ERCC1的m RNA表達及下調Survivin、MRP2的蛋白表達,這可能與青蒿琥酯能逆轉耐藥性有關。
[Abstract]:Objective : To study the effect of arteannuin ( ART ) on the proliferation of transplanted tumor and to explore the mechanism of reversing cisplatin ( DDP ) resistance in nude mice . The results were as follows : 1 . The tumor cells in the experimental group were significantly less than those in the normal saline control group . The results showed that the expression of Survivin , MRP2 and ERCC1 in the transplanted tumor tissues decreased with the increase of the concentration of ART . Conclusion : In vivo experiments , the expression of Survivin , MRP2 and ERCC1 in the transplanted tumor tissues decreased with the increase of ART concentration .
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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本文編號：1956237