本文選題：YB1 + CD74　； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景癌癥又稱惡性腫瘤,是人類主要的致死疾病之一。作為女性中發(fā)病率最高的一類癌癥,乳腺癌使女性的健康受到了嚴(yán)重的威脅。而該疾病最主要的致死因素就是癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散引起的多器官病變。因此,乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究對(duì)其治療有著非常重要的意義。CD74在人類中共有四種亞型:p33,p41,p35,p43,我們?cè)谌橄侔┲兄饕獧z測(cè)到的是p35這一亞型。CD74可以發(fā)生多種翻譯后修飾,如N/O糖基化,磷酸化,棕櫚�；�;而CD74乙酰化這一修飾還未見報(bào)道。CD74最初被發(fā)現(xiàn)是作為MHCII的分子伴侶,在抗原遞呈中起重要作用。隨后發(fā)現(xiàn)CD74也具有不依賴MHCII的功能,如作為細(xì)胞表面受體,即巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(MIF)的受體,引起信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng);調(diào)控樹突狀細(xì)胞遷移等。我們的前期數(shù)據(jù)表明,CD74調(diào)控乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移,而乳腺癌細(xì)胞中CD74表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制并不清楚。YB1(Y-Box binding protein 1)在結(jié)構(gòu)上分為多變非保守的N端結(jié)構(gòu)域,高度保守的冷休克結(jié)構(gòu)域和C端結(jié)構(gòu)域三部分。N端結(jié)構(gòu)域含有豐富的丙氨酸和脯氨酸,與轉(zhuǎn)錄激活有關(guān);C端結(jié)構(gòu)域由酸性殘基和堿性殘基交替組成,與調(diào)節(jié)蛋白與蛋白之間的相互作用有關(guān)。YB1最初被發(fā)現(xiàn)是作為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到MHC II的啟動(dòng)子區(qū)。YB1在DNA、mRNA和蛋白質(zhì)多種水平上發(fā)揮作用,如參與DNA的修復(fù)、前體mRNA的剪切、維持mRNA的穩(wěn)定性以及蛋白與蛋白之間的相互作用等。前期工作中,我們利用軟件分析,發(fā)現(xiàn)在CD74的啟動(dòng)子區(qū)以及CD74的mRNA上都可能存在YB1的調(diào)控位點(diǎn)。因此,我們將重點(diǎn)研究YB1是如何調(diào)控CD74從而影響細(xì)胞轉(zhuǎn)移的,以期尋找到新的化療靶標(biāo)。研究方法1.免疫印跡檢測(cè)YB1 siRNA干擾實(shí)驗(yàn)對(duì)CD74及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響2.RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)YB7 siRNA干擾實(shí)驗(yàn)在CD74轉(zhuǎn)錄水平的影響3.免疫印跡檢測(cè)YB1siRNA干擾實(shí)驗(yàn)對(duì)CD74蛋白穩(wěn)定性的影響以及免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究YB1siRNA干擾實(shí)驗(yàn)對(duì)CD74泛素化的影響4.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究CD74的乙�；揎椧约百|(zhì)譜檢測(cè)CD74可能發(fā)生乙酰化的氨基酸位點(diǎn)5.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究YB1對(duì)CD74乙�；挠绊�6.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究YB1和CD74以及其他相關(guān)蛋白之間的相互作用7.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究SIRT1對(duì)CD74乙酰化的影響8.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究三位點(diǎn)突變的CD74與YB1、SIRT1、CD44之間結(jié)合能力的改變9.Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CD74乙�；瘜�(duì)細(xì)胞侵襲的影響10.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究CD74乙酰化與CD74泛素化之間的關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.敲低YB1下調(diào)CD74和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白的表達(dá)2.YB1調(diào)控CD74的穩(wěn)定性是在蛋白水平上而非轉(zhuǎn)錄水平3.CD74存在乙�；揎�,并且YB1影響CD74的乙酰化4.CD74與YB1、SIRT1和HDAC1蛋白之間存在相互作用5.SIRT1影響CD74的乙酰化水平6.質(zhì)譜分析CD74潛在的乙�；稽c(diǎn)分別是Lys80、Lys99和Lys106,將賴氨酸突變?yōu)榫彼岷驝D74的乙�；綔p弱,泛素化水平降低7.CD74乙酰化位點(diǎn)突變影響CD74與YB1、SIRT1、CD44之間的結(jié)合8.CD74乙�；稽c(diǎn)突變影響細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)論在人乳腺癌細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)YB1通過影響CD74與去乙�；窼IRT1之間的結(jié)合調(diào)控CD74的乙�；揎椧约癈D74的穩(wěn)定性,CD74可能的乙酰化賴氨酸位點(diǎn)突變后,其乙�；浇档�,泛素化水平減弱,與YB1和SIRT1的結(jié)合能力增強(qiáng),與CD44的相互作用減弱。最終,CD74乙�；稽c(diǎn)突變使得細(xì)胞侵襲能力降低。
[Abstract]:Background cancer, also known as malignant tumor, is one of the major fatal diseases of human beings. As a type of cancer with the highest incidence in women, breast cancer is a serious threat to women's health. The most fatal factor in the disease is the multiple organ lesion caused by metastasis and diffusion of cancer cells. Therefore, the mechanism of breast cancer metastasis is studied. There are four types of.CD74 subtypes in human being: P33, p41, p35, p43. Our main detection in breast cancer is that p35 this subtype.CD74 can undergo a variety of post-translational modifications, such as N/O glycosylation, phosphorylation, palmiylation, and CD74 acetylation has not been reported that.CD74 was initially found to be done. The molecular chaperone for MHCII plays an important role in antigen presentation. Subsequently, it is found that CD74 also has functions that do not depend on MHCII, such as cell surface receptor, macrophage migration inhibitory factor (MIF) receptor, signal cascade reaction, and regulation of dendritic cell migration. Our preliminary data show that CD74 regulates breast cancer cell metastasis, The molecular mechanism of the regulation of CD74 expression in breast cancer cells is not clear that.YB1 (Y-Box binding protein 1) is structurally divided into a variable non conservative N terminal domain. The highly conserved cold shock domain and the three.N terminal domain of the C end domain are rich in alanine and prolysine, which are related to the activation of the transcriptional activity; the C terminal domain is an acid residue. Alternately composed of base and alkaline residues, related to the interaction between protein and protein,.YB1 was initially found to play a role in DNA, mRNA, and protein levels in the promoter region of MHC II as a transcription factor, such as the repair of DNA, the shear of the precursor mRNA, the stability of the mRNA and the protein and protein. In previous work, we use software analysis to find that there may be YB1 regulatory sites in the promoter region of CD74 and on the mRNA of CD74. Therefore, we will focus on how YB1 regulates CD74 and thus affects cell metastasis in order to find new chemotherapeutic targets. Method 1. Western blot to detect YB1 siRNA dry. Effects of disturbing experiments on the expression of CD74 and cell related proteins in 2.RT-PCR test the effect of YB7 siRNA interference test on the transcription level of CD74 3. the effect of YB1siRNA interference test on the stability of CD74 protein and the effect of immunoprecipitation experiment on the effect of YB1siRNA interference experiment on CD74 ubiquitination, 4. immunoprecipitation experiment Exploring the acetylation modification of CD74 and mass spectrometric detection of CD74 possible acetylation of amino acid site 5. immunoprecipitation experiments to explore the effect of YB1 on CD74 acetylation 6. immunoprecipitation experiments explore the interaction between YB1 and CD74 and other related proteins 7. immunoprecipitation experiments explore the effect of SIRT1 on CD74 acetylation 8. immunity A co precipitation experiment to explore the effect of the binding ability of CD74, YB1, SIRT1, CD44 between three loci mutations in the 9.Transwell test the effect of CD74 acetylation on the invasion of cells 10. the experimental results of the relationship between CD74 acetylation and CD74 ubiquitination: 1. knock down the low YB1 downregulation CD74 and the expression of the expression of cell motion related proteins The stability of control CD74 is at the protein level and non transcriptional level 3.CD74 acetylation modification, and YB1 affects the acetylation of CD74, 4.CD74 and YB1, SIRT1 and HDAC1 protein interaction between 5.SIRT1 and CD74, the acetylation level 6. mass spectrometry analysis CD74 potential acetylation sites are Lys80, mutation and lysine mutation The level of acetylation of CD74 after arginine decreased, and the level of ubiquitination reduced 7.CD74 acetylation site mutations affecting CD74 and YB1, SIRT1, CD44 binding 8.CD74 acetylation site mutation affecting cell invasion experiment conclusion in human breast cancer cells, we found that YB1 regulates CD74 by the binding between CD74 and deacetylase SIRT1. Acetylated modification and the stability of CD74, after the mutation of CD74, the level of acetylated lysine was reduced, the level of acetylation was reduced, the level of ubiquitination was weakened, the binding ability with YB1 and SIRT1 increased, and the interaction with CD44 weakened. Finally, the mutation of CD74 acetylation site reduced the cell invasiveness.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1932404