發(fā)布時(shí)間：2018-05-17 18:41

  本文選題：B7-H1 + 食管癌��； 參考：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：近年來(lái),對(duì)腫瘤微環(huán)境和腫瘤免疫逃逸機(jī)制的深入研究發(fā)現(xiàn),一組介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)的重要分子—免疫卡控點(diǎn),如B7家族負(fù)性協(xié)同刺激分子:B7同系物l(B7 homolog1,B7-H1)可異常表達(dá)于人類(lèi)腫瘤組織及腫瘤浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞,參與了腫瘤免疫逃逸,并且與患者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后密切相關(guān),是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分。三角形四肽重復(fù)干擾素誘導(dǎo)蛋白2(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 2,IFIT2)是對(duì)腫瘤、病毒和各種藥物最敏感的干擾素刺激基因。IFIT2可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。然而,對(duì)IFIT2的生物學(xué)功能和其在腫瘤發(fā)展中的機(jī)制尚不明確。我們使用慢病毒轉(zhuǎn)染及基因干擾技術(shù)構(gòu)建了食管癌細(xì)胞株Eca-109中B7-H1表達(dá)下調(diào)的模型LV-B7-H1-sh RNA,采用基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn),在LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞中IFIT2 m RNA水平顯著上升,但目前B7-H1與IFIT2在腫瘤中作用機(jī)制尚不明確。在本課題中,我們采取食管癌作為研究載體,(1)檢測(cè)IFIT2和B7-H1在食管癌組織中的表達(dá),探討IFIT2、B7-H1的關(guān)系及IFIT2與食管癌患者臨床指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系;(2)分別檢測(cè)B7-H1基因干擾及過(guò)表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞系Eca-109細(xì)胞中IFIT2啟動(dòng)子活性的影響,探討食管癌細(xì)胞中B7-H1對(duì)IFIT2啟動(dòng)子的調(diào)控機(jī)制;(3)分別檢測(cè)B7-H1基因干擾及過(guò)表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞系Eca-109細(xì)胞中STAT1、STAT1磷酸化及IFIT2表達(dá)水平的影響,抑制JAK及STAT1后檢測(cè)Eca-109細(xì)胞中IFIT2m RNA水平,探討B(tài)7-H1通過(guò)JAK-STAT通路調(diào)控IFIT2的機(jī)制。通過(guò)以上工作來(lái)探討B(tài)7-H1在食管癌中調(diào)控IFIT2的作用機(jī)制。本研究結(jié)果顯示(1)IFIT2主要表達(dá)于食管癌細(xì)胞及食管上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞核,在食管癌腫瘤細(xì)胞上以低表達(dá)為主,在正常的食管上皮細(xì)胞上以高表達(dá)為主。B7-H1主要表達(dá)在食管癌細(xì)胞的胞漿及胞膜,在食管癌腫瘤細(xì)胞中以高表達(dá)為主,而在正常的食管上皮細(xì)胞以低表達(dá)或不表達(dá)為主。男性患者IFIT2染色H-score≥50的比率顯著高于女性患者(χ2=9.349,P=0.002);IFIT2染色強(qiáng)度與年齡、T、N、M、TNM分期、腫瘤大小等預(yù)后相關(guān)因素的關(guān)系差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Log-rank生存分析顯示IFIT2高表達(dá)組[57.16(50.83~63.50)]比低表達(dá)組[41.58(31.36~51.80)]平均術(shù)后生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)15.58個(gè)月,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.531,P=0.011)。食管癌組織多因素COX模型分析顯示,IFIT2是食管癌獨(dú)立的正性預(yù)后因素(HR=0.41,95%CI=0.19~0.88,P=0.023)。以B7-H1的H-score=140為Cut-off值,H-score140定為高表達(dá),H-score≤140定為低表達(dá);以IFIT2的H-score=25為Cut-off值,IFIT2的H-score25定為高表達(dá),H-score≤25定為低表達(dá)。食管癌組織B7-H1與IFIT2表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.203,P=0.044)。(2)我們通過(guò)基因干擾技術(shù)構(gòu)建食管癌細(xì)胞Eca-109中B7-H1表達(dá)下調(diào)的模型,流式細(xì)胞術(shù)及q RT-PCR驗(yàn)證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞株中B7-H1表達(dá)水平顯著低于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LV-Scramble的Eca-109細(xì)胞株。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析顯示LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞(2.66±0.34)中IFIT2啟動(dòng)子活性顯著高于LV-Scramble的Eca-109細(xì)胞(1.00±0.19)(P0.001)。我們通過(guò)基因過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建技術(shù)構(gòu)建食管癌細(xì)胞Eca-109中B7-H1表達(dá)上調(diào)的模型,流式細(xì)胞術(shù)及q RT-PCR驗(yàn)證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LV-B7-H1的Eca-109細(xì)胞株中B7-H1表達(dá)水平顯著高于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LV-NC的Eca-109細(xì)胞株。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析顯示LV-B7-H1的Eca-109細(xì)胞(0.43±0.10)中IFIT2啟動(dòng)子活性顯著低于LV-NC的Eca-109細(xì)胞(1.00±0.18)(P0.01)。(3)食管癌細(xì)胞LV-B7-H1-sh RNA細(xì)胞中STAT1水平顯著高于LV-Scramble細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),LV-B7-H1細(xì)胞中STAT1水平與LV-NC細(xì)胞差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LV-B7-H1-sh RNA細(xì)胞中phos-STAT1-y701磷酸化水平顯著高于LV-Scramble細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),LV-B7-H1細(xì)胞中phos-STAT1-y701磷酸化水平顯著低于LV-NC細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。LV-B7-H1-sh RNA細(xì)胞中IFIT2水平顯著高于LV-Scramble細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),LV-B7-H1細(xì)胞中IFIT2水平顯著低于LV-NC細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。LV-B7-H1-sh RNA細(xì)胞中IFIT2 m RNA水平顯著高于LV-Scramble細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),選取JAK抑制劑AG490處理LV-Scramble及LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞后,LV-B7-H1-sh RNA細(xì)胞中IFIT2 m RNA升高趨勢(shì)被抑制,其他JAK抑制劑AZD1480,CP-690550、CYT387處理細(xì)胞后,LV-B7-H1-sh RNA細(xì)胞中IFIT2m RNA較未處理組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LV-Scramble轉(zhuǎn)染LV-Scramble及LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞后LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞中的IFIT2m RNA表達(dá)水平顯著高于LV-Scramble(P0.001);LV-STAT1-sh RNA轉(zhuǎn)染LV-Scramble及LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞后LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞中的IFIT2m RNA表達(dá)水平顯著高于LV-Scramble(P0.01);LV-STAT1-sh RNA轉(zhuǎn)染的LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞中的IFIT2 m RNA表達(dá)水平顯著低于LV-Scramble轉(zhuǎn)染的LV-B7-H1-sh RNA的Eca-109細(xì)胞(P0.01)。通過(guò)以上研究我們得出結(jié)論:IFIT2在食管癌中低表達(dá),對(duì)食管癌的預(yù)后判斷具有潛在價(jià)值。在食管癌組織中IFIT2與B7-H1表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。B7-H1對(duì)IFIT2的啟動(dòng)子活性具有負(fù)向調(diào)控作用。B7-H1負(fù)性調(diào)控IFIT2的表達(dá),B7-H1負(fù)性調(diào)控STAT1磷酸化水平。B7-H1可通過(guò)STAT1的途徑調(diào)控IFIT2的表達(dá)。
[Abstract]:The effect of B7 - H1 on the expression of IFIT2 promoter in esophageal cancer cell line Eca - 109 was studied . The survival time was significantly prolonged by 15.58 months ( 蠂2 = 6.531 , P = 0 . 011 ) . The expression level of B7 - H1 was significantly higher in Eca - 109 cell line ( 2.66 鹵 0.34 ) than LV - Scramble ( P = 0.044 ) . The expression level of B7 - H1 in Eca - 109 cell line was significantly higher than that of LV - Scramble ( P = 0.044 ) .
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1

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1 徐婷;協(xié)同刺激分子B7-H1調(diào)控IFIT2的機(jī)制及其在食管癌中的應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1902434