本文選題：大黃素 + 上皮性卵巢癌�。� 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:上皮性卵巢癌(EOC)是死亡率最高的婦科惡性腫瘤。由于卵巢癌早期癥狀不典型并且缺乏有效的早期檢測(cè)指標(biāo)導(dǎo)致多數(shù)患者確診時(shí)已為疾病的晚期并伴隨遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。雖然廣泛轉(zhuǎn)移卵巢癌的主要致死原因,但是發(fā)生轉(zhuǎn)移的潛在的分子機(jī)制還沒(méi)有完全闡明。最近的研究發(fā)現(xiàn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與卵巢癌發(fā)生轉(zhuǎn)移有密切的聯(lián)系。整合素連接激酶(ILK)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。它最初是因?yàn)榕cβ1和β3整合素亞單位結(jié)合被發(fā)現(xiàn)的。整合素連接酶在通過(guò)整合素通路來(lái)調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的增殖,遷移上發(fā)揮著重要的作用。ILK一旦被激活,直接使得包括糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和蛋白激酶B(PKB/Akt)在內(nèi)的多個(gè)重要的信號(hào)分子磷酸化進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖,周期,粘附及細(xì)胞外基質(zhì)。ILK的表達(dá)水平在多種人類惡性腫瘤中都是上調(diào)的并且與腫瘤的分期和分級(jí)具有相關(guān)性。此外,有研究證明ILK可以通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的EMT過(guò)程來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。大黃素(1,3,8-三羥基-6甲基蒽醌)是一種是從大黃,蘆薈等植物的根莖中提取出來(lái)的蒽醌類的衍生物。已知大黃素對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖,腫瘤的發(fā)生,血管再生及腫瘤轉(zhuǎn)移具有抑制作用。最近的研究表明,大黃素可以通過(guò)WNT/β-catenin通路抑制多種腫瘤細(xì)胞的EMT。同時(shí),之前的研究也證實(shí)大黃素通過(guò)調(diào)節(jié)ILK通路促進(jìn)人類子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化(MET),從而抑制子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的遷移和侵襲的能力。目的:本研究旨在探討大黃素是否能通過(guò)抑制EMT來(lái)抑制EOC細(xì)胞遷移和侵襲并探索在細(xì)胞及裸鼠移植瘤內(nèi)的作用機(jī)制。方法:1.用CCK-8法檢測(cè)不同濃度大黃素分別作用24小時(shí),48小時(shí)和72小時(shí)對(duì)卵巢癌細(xì)胞系(A2780和SK-OV-3)增殖的影響。2.Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)用來(lái)檢測(cè)A2780和SK-OV-3細(xì)胞的侵襲和遷移能力。3.Western-blot和免疫組化(IHC)檢測(cè)EOC細(xì)胞和移植瘤中上皮表型分子(E-cadherin 和 Claudin),間質(zhì)表型分子(N-cadherin 和 Vimentin)以及 ILK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。4.小干擾RNA(SiRNA)-ILK和SiRNA-Slug分別用來(lái)敲除A2780細(xì)胞和SK-OV-3細(xì)胞中ILK和Slug的表達(dá)。ILK慢病毒(pLVX-C1-ILK)用來(lái)建立ILK穩(wěn)定過(guò)表達(dá)EOC細(xì)胞系。結(jié)果:1.大黃素對(duì)EOC細(xì)胞增殖,遷移和侵襲能力的影響大黃素對(duì)SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞具有抑制其增殖作用且呈濃度和時(shí)間依賴性。大黃素作用48小時(shí)后,SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞的遷移和侵襲能力都明顯減弱。2.大黃素對(duì)EOC細(xì)胞中EMT相關(guān)分子及Slug表達(dá)水平的影響Western-blot結(jié)果表明在大黃素的作用下SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞上皮表型分子(E-cadherin和Claudin)的表達(dá)上調(diào)而間質(zhì)表型分子(N-cadherin和Vimentin)和轉(zhuǎn)錄因子(Slug)的表達(dá)下調(diào),且呈濃度依賴性。轉(zhuǎn)染siRNA-Slug到SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞中,N-cadherin和Slug的表達(dá)降低而E-cadherin的表達(dá)增高。siRNA-Slug轉(zhuǎn)染后再加入emodin組的SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞的遷移和侵襲能力最弱。3.大黃素對(duì)EOC細(xì)胞中ILK信號(hào)通路相關(guān)分子表達(dá)的影響SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞在大黃素作用48小時(shí)后ILK,p-GSK-3β,β-catenin和Slug的表達(dá)減少并呈濃度依賴性。4.大黃素通過(guò)調(diào)控ILK抑制EOC細(xì)胞發(fā)生EMT的驗(yàn)證siRNA-ILK轉(zhuǎn)染后,SK-OV-3 細(xì)胞和 A2780 細(xì)胞 ILK,p-GSK-3β,β-catenin 和 Slug 的表達(dá)與對(duì)照組相比也降低。同時(shí),E-cadherin的表達(dá)上調(diào)而N-cadherin的表達(dá)下調(diào)。并且siRNA-ILK轉(zhuǎn)染后加用大黃素組與單獨(dú)大黃素組或單獨(dú)siRNA-ILK轉(zhuǎn)染組相比 ILK,p-GSK-3β,β-catenin,Slug 和 N-cadherin 的表達(dá)更低,E-cadherin 的表達(dá)更高。5.大黃素通過(guò)調(diào)節(jié)ILK/GSK-3β通路抑制EOC細(xì)胞的EMT的驗(yàn)證SB216763(GSK-3β抑制劑)處理后除ILK的表達(dá)沒(méi)有顯著變化外,p-GSK-3β,β-catenin和Slug的表達(dá)均明顯增強(qiáng)。同時(shí),E-cadherin的表達(dá)量減少而N-cadherin的表達(dá)量增加。所以,大黃素可以逆轉(zhuǎn)SB216763對(duì)SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞的作用。6.大黃素對(duì)ILK過(guò)表達(dá)后SK-OV-3和A2780細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響過(guò)表達(dá)ILK可以增強(qiáng)A2780和SK-OV-3細(xì)胞的遷移和侵襲能力。大黃素(2μM)可以抑制ILK過(guò)表達(dá)引起的EOC細(xì)胞遷移和侵襲能力的增強(qiáng)且大黃素可以抑制ILK過(guò)表達(dá)所導(dǎo)致的E-cadherin,Vimentin,MMP-9和Slug表達(dá)水平的變化。7.大黃素對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)速度的影響pLVX-ILK組裸鼠的移植瘤體積增長(zhǎng)與pLVX-Con組裸鼠相比明顯迅速,但pLVX-ILK+emodin裸鼠組與PLVX-ILK+溶劑組裸鼠相比體積增長(zhǎng)顯著減慢。8.大黃素對(duì)裸鼠移植瘤中EMT相關(guān)分子表達(dá)的影響pLVX-ILK+溶劑組與對(duì)照組相比移植瘤中E-cadherin表達(dá)下降;ILK,Slug,MMP-9和Vimentin的表達(dá)水平升高。而pLVX-Con+emodin組與對(duì)照組相比E-cadherin表達(dá)水平升高;ILK,Slug,MMP-9和Vimentin的表達(dá)水平降低。9.大黃素對(duì)裸鼠肝腎及心功能的影響腹腔注射大黃素(50mg/kg)對(duì)裸鼠肝腎及心臟沒(méi)有明顯的毒性作用。結(jié)論:1.大黃素可以抑制SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞的增殖,遷移和侵襲能力。2.大黃素通過(guò)調(diào)節(jié)ILK/GSK-3β/Slug信號(hào)通路抑制發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)進(jìn)而抑制SK-OV-3細(xì)胞和A2780細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3.大黃素可以抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。4.大黃素對(duì)裸鼠的肝腎及心功能沒(méi)有明顯的影響。
[Abstract]:Objective : To study the effect of emodin on proliferation and migration of ovarian cancer cell lines ( A2780 and SK - OV - 3 ) . Conclusion : 1 . emodin can inhibit the proliferation , migration and invasion of SK - OV - 3 cells and A2780 cells .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：1852336