本文選題：胃癌 + 腫瘤相關(guān)巨噬細胞��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：胃癌是最常見的惡性消化道腫瘤之一,其發(fā)病率在腫瘤中位居第五名,其死亡率更是高居第二名,導(dǎo)致患者死亡的主要原因是胃癌細胞的侵襲以及轉(zhuǎn)移。胃癌的主要轉(zhuǎn)移方式是淋巴轉(zhuǎn)移,新生淋巴管生成則是胃癌出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移的前提。因此研究胃癌淋巴管新生機制對于探尋新的治療靶點、抑制淋巴轉(zhuǎn)移具有重要意義。腫瘤微環(huán)境是腫瘤在其發(fā)生發(fā)展過程中所處的內(nèi)環(huán)境,由腫瘤細胞本身、間質(zhì)細胞、以及浸潤的免疫細胞等共同組成。炎性細胞的浸潤在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用,巨噬細胞則是胃癌微環(huán)境中最主要的炎癥細胞之一。在胃癌間質(zhì)中的巨噬細胞是由外周血循環(huán)中的單核細胞分化而成,其激活方式包括經(jīng)典激活和替代激活。經(jīng)典激活是指單核細胞分化為起促炎作用的M1型巨噬細胞,替代激活是指單核細胞分化為可以分泌抗炎因子并參與組織修復(fù)的M2型巨噬細胞。浸潤在腫瘤微環(huán)境的巨噬細胞稱為TAMs(Tumor-associated Macrophages,腫瘤相關(guān)巨噬細胞),其表現(xiàn)出M2樣巨噬細胞表型并與多種腫瘤的進展密切相關(guān)。作為腫瘤免疫效應(yīng)階段的執(zhí)行場所,腫瘤微環(huán)境內(nèi)存在許多因素參與腫瘤組織與免疫系統(tǒng)的相互作用。在腫瘤微環(huán)境中,IL-6是一個強有力的、多效性的炎性細胞因子,其所構(gòu)成的抑制性腫瘤免疫微環(huán)境為腫瘤發(fā)生、進展和轉(zhuǎn)移提供了基礎(chǔ)。本研究以胃癌為研究對象,探討胃癌微環(huán)境中IL-6、TAMs與淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系。研究目的:1.了解TAMs與IL-6、VEGF-C在胃癌組織中的分布情況并分析其與胃癌進展及淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系2.建立IL-6誘導(dǎo)TAMs細胞模型并初步分析TAMs對胃癌進展及淋巴轉(zhuǎn)移的影響研究方法:1.胃癌患者胃癌組織及正常胃組織中IL-6、TAMs、VEGF-C及淋巴管密度的檢測及分析收集2008年7月至2009年7月期間在西南醫(yī)院普通外科行胃癌手術(shù)的40名胃癌患者的胃癌組織,進行常規(guī)石蠟包埋。石蠟切片分別用兔抗人IL-6單克隆抗體、鼠抗人CD68單克隆抗體、兔抗人VEGF-C多克隆抗體和鼠抗人D2-40單克隆抗體,行免疫組化雙標(biāo)染色。結(jié)果采用nikon光學(xué)顯微鏡分析,100倍光鏡下確定5個著色密集區(qū)域,200倍光鏡下計數(shù),取其平均數(shù)。結(jié)合患者臨床資料,分析年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、腫瘤侵襲胃壁深度、tnm分期、淋巴轉(zhuǎn)移和有無遠處轉(zhuǎn)移對il-6、腫瘤相關(guān)巨噬細胞、vegf-c和新生淋巴管表達的影響。采用線性回歸分析胃癌組織中il-6、腫瘤相關(guān)巨噬細胞、vegf-c和新生淋巴管的相關(guān)性。取il-6、cd68、vegf-c和d2-40表達的中位數(shù)進行分組,并行術(shù)后隨訪,做生存分析。2.建立il-6誘導(dǎo)單核細胞向m2樣表型的tams極化模型從正常人外周血單個核細胞(pbmc)中磁珠分離cd14+的單核細胞,加入含100ng/mlm-csf的培養(yǎng)液培養(yǎng)6天,流式細胞儀檢測巨噬細胞表型cd68和cd11b,然后分別加入不同濃度的il-6刺激24h后,提取細胞rna,采用rt-pcr檢測巨噬細胞表型因子及與淋巴管新生密切相關(guān)因子vegf-c基因水平的變化。3.il-6誘導(dǎo)的tams對胃癌細胞株mgc803侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響分別用il-6+m-csf誘導(dǎo)的腫瘤相關(guān)巨噬細胞和m-csf誘導(dǎo)的未分化巨噬細胞及只加培養(yǎng)基的空白對照組與胃癌細胞株mgc803同培養(yǎng)48h后,結(jié)晶紫染色,光學(xué)顯微鏡觀察胃癌細胞的侵襲數(shù)量并計數(shù)。研究結(jié)果:1.il-6、tams、vegf-c及d2-40在胃癌組織及正常胃組織中的表達情況。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示胃癌組織中il-6、tams、vegf-c及d2-40的表達明顯高于正常胃組織(48.0±10.3vs11.1±2.3、26.0±5.5vs5.9±1.6、26.7±6.5vs9.7±2.8、7.6±3.8vs2.5±1.2,p0.05)。2.胃癌組織中il-6、tams、vegf-c表達、淋巴管密度與臨床病理特征的關(guān)系胃癌組織中il-6、tams、vegf-c表達、淋巴管密度與腫瘤侵襲胃壁深度有關(guān),腫瘤侵襲胃壁漿膜層組(t3+t4組)表達高于腫瘤未侵襲漿膜層組(t1+t2組)(50.1±8.8vs41.5±12.2、27.3±5.1vs22.2±5.1、28.0±6.3vs22.8±5.8、8.3±3.9vs5.5±2.6,p0.05);胃癌組織中il-6、tams、vegf-c表達、淋巴管密度與臨床tnm分期有關(guān),晚期組(iii+iv期)表達高于tnm早期組(i+ii組)(57.3±2.6vs38.6±5.3、31.1±1.9vs21.0±2.2、32.6±2.9vs20.8±2.3、10.6±2.9vs4.7±1.6,p0.05);胃癌組織中il-6、tams、vegf-c表達、淋巴管密度與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(55.2±6.4vs39.2±6.7、29.9±3.8vs21.3±3.0、31.3±4.5vs21.2±3.4、9.6±2.9vs5.2±3.3,p0.05)。但胃癌組織中il-6、tams、vegf-c表達、淋巴管密度與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位及遠處轉(zhuǎn)移無關(guān)。3.胃癌組織中il-6、tams、vegf-c及淋巴管密度的相關(guān)性。胃癌中il-6的表達與tams表達呈正相關(guān)(r=0.941,p0.05);tams表達與vegf-c呈正相關(guān)(r=0.911,p0.05),vegf-c表達與淋巴管密度呈正相關(guān)(r=0.741,p0.05)。4.il-6、tams、vegf-c及淋巴管密度及與胃癌預(yù)后的關(guān)系il-6高表達組、cd68高表達組、vegf-c高表達組及d2-40高表達組1年累積生存率為70.0%、70.0%、70%、65.0%;il-6低表達組、cd68低表達組、vegf-c低表達組及d2-40低表達組1年累積生存率為90.0%、90.0%、90.0%、95.0%,兩者比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.410、χ2=4.075、χ2=4.353、χ2=4.705,p0.05)。5.il-6對tams的誘導(dǎo)作用用m-csf和完全1640培養(yǎng)基培養(yǎng)磁珠陽選的健康成人外周血單核細胞6天后,再加入不同濃度的il-6培養(yǎng)24小時。提取誘導(dǎo)細胞的rna,采用rt-pcr檢測il-10、il-12、vegf-c及tgf-β變化情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):m-csf+il-6組巨噬細胞il-10、vegf-c和tgf-β表達高于m-csf組(1.1±0.21vs0.1±0.01、1.1±0.04vs0.1±0.01、0.9±0.32vs0.1±0.02,p0.05),而il-12的表達低于m-csf組(0.1±0.02vs1.0±0.39,p0.05)。結(jié)果顯示il-6可成功誘導(dǎo)巨噬細胞分化為tams,且tams可高表達與淋巴管生成密切相關(guān)的因子vegf-c和與腫瘤進展密切相關(guān)的轉(zhuǎn)化生長因子tgf-β。6.由il-6誘導(dǎo)的tams對胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響胃癌細胞株mgc803分別與只加dmem培養(yǎng)基的空白對照組、含有m-csf誘導(dǎo)的未分化巨噬細胞培養(yǎng)基的陰性對照組及含有il-6+m-csf誘導(dǎo)的腫瘤相關(guān)巨噬細胞培養(yǎng)基的實驗組共培養(yǎng)48小時,結(jié)晶紫染色后采用光學(xué)顯微鏡計數(shù),結(jié)果發(fā)現(xiàn)實驗組中胃癌細胞穿透基質(zhì)膠的數(shù)量明顯多于陰性對照組和空白對照組(124.0±8.9vs68.7±12.1vs67.0±7.5,p0.05)。研究結(jié)論:1.胃癌組織及正常胃組織中il-6、tams、vegf-c及d2-40均有表達,且胃癌組織中的表達顯著高于正常胃組織。胃癌組織中il-6、tams、vegf-c表達、淋巴管密度與胃癌侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及tnm分期有關(guān)。2.胃癌微環(huán)境中il-6、tams、vegf-c及淋巴管密度相互之間存在顯著正相關(guān)關(guān)系,并且與胃癌患者預(yù)后相關(guān)。高表達il-6、tams、vegf-c及淋巴管密度增多患者預(yù)后較差。提示il-6在tams極化、新生淋巴管生成及胃癌進展中具有重要作用。3.il-6可成功誘導(dǎo)巨噬細胞分化為具有m2樣表型的tams,tams高表達與淋巴管生成密切相關(guān)的VEGF-C,后者作用于間質(zhì)中的淋巴管內(nèi)皮細胞,導(dǎo)致新生淋巴管生成;間質(zhì)中TAMs數(shù)量增多,胃癌細胞侵襲能力增強。提示IL-6通過誘導(dǎo)巨噬細胞M2樣極化促進了胃癌的淋巴轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:Gastric cancer is one of the most common malignant digestive tract tumors . The incidence of gastric cancer is the fifth in the tumor , the mortality rate is higher than that of the second one . The main cause of the death of gastric cancer is the invasion and metastasis of gastric cancer cells . The expression of il - 6 , tams , vegf - c and d2 - 40 in gastric cancer tissues was studied . The results showed that the expression of il - 6 , tams , vegf - c and d2 - 40 in gastric cancer tissues was significantly higher than that in normal gastric tissues ( 48.0 鹵 10.3 vs 11.1 鹵 2.3 , 26.0 鹵 5.5v5.9 鹵 1.6 , 26.7 鹵 6.5vs22 . 2 鹵 5.1 , 27.0 鹵 6.3 vs 22 . 8 鹵 5.8 , 8.3 鹵 3.9 ) .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1852389