本文選題：循環(huán)腫瘤細(xì)胞 + 微流控芯片�。� 參考：《遺傳》2017年01期

【摘要】：循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)是從腫瘤病灶脫落并進(jìn)入外周血液循環(huán)的處于游離狀態(tài)的腫瘤細(xì)胞,代表了腫瘤病灶的分子特征,可用于對腫瘤的"液體活檢"。但外周血中CTCs數(shù)目極為稀少,使得后續(xù)針對CTCs的分子與功能分析面臨巨大挑戰(zhàn)。鑒于此,本文建立了一種基于微流控芯片和免疫磁珠的能夠快速從肺癌患者的外周血中分離CTCs的方法。該方法直接針對全血進(jìn)行一步分離,可避免血液樣本預(yù)處理及富集等過程對細(xì)胞造成的損傷,從而有效地保護(hù)CTCs的活性(90%)。分離得到的CTCs可富集在小體積中(80μL),實現(xiàn)高密度的細(xì)胞培養(yǎng),完成體外擴(kuò)增,擴(kuò)增后的CTCs可以被進(jìn)一步凍存、復(fù)蘇及再次增殖培養(yǎng),表明已經(jīng)對患者血液中的CTCs成功建系。本文進(jìn)一步對CTCs進(jìn)行了基因突變(EGFR、KRAS、PIK3CA、TP53和BRAF)檢測及熒光標(biāo)記葡萄糖類似物(2-NBDG)攝取的功能分析,證明CTCs存在較大異質(zhì)性。本研究成功實現(xiàn)了對外周血中稀少的CTCs進(jìn)行體外培養(yǎng),并對CTCs進(jìn)行了基因、蛋白、功能等各個層面的分析,這對于腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療具有重要的臨床意義。
[Abstract]:Circulating tumor cells (CTCs) are free tumor cells which are exfoliated from the tumor focus and enter the peripheral blood circulation. It represents the molecular characteristics of the tumor lesion and can be used for "fluid biopsy" of the tumor. However, the number of CTCs in peripheral blood is extremely rare, which makes the subsequent molecular and functional analysis of CTCs face great challenges. In view of this, a method based on microfluidic chip and immunomagnetic beads was developed to isolate CTCs from peripheral blood of lung cancer patients. This method can directly separate whole blood and avoid the damage caused by pretreatment and enrichment of blood samples, thus effectively protecting the activity of CTCs. The isolated CTCs could be enriched in a small volume of 80 渭 L / L, and could be cultured in high density cells and expanded in vitro. The amplified CTCs could be further frozen, resuscitated and cultured again, indicating that the CTCs in the blood of the patient had been successfully established. In this paper, CTCs gene mutation KRASA PIK3CAT53 and BRAF were detected and the function of fluorescence labeled glucose analogue 2-NBDG uptake was analyzed. The results showed that there was a large heterogeneity in CTCs. In this study, the isolated CTCs in peripheral blood was successfully cultured in vitro, and the gene, protein and function of CTCs were analyzed, which has important clinical significance for accurate treatment of tumor.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(編號:81371712,81501613) 上海市自然科學(xué)基金項目(編號:13ZR1456100) 高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金項目(編號:20130073120106)資助~~
【分類號】：R734.2

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