本文選題：micro + RNA��； 參考：《杭州師范大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:通過體內(nèi)外實驗證明mi R-127參與肺癌的發(fā)生與發(fā)展;探明mi R-127在肺癌中的重要調(diào)控功能;深入研究mi R-127對于肺癌進(jìn)展的分子調(diào)控機(jī)制。方法:1.分別用原位雜交和Real time PCR方法檢測人肺癌組織標(biāo)本和不同人肺癌細(xì)胞系中mi R-127的表達(dá);分別建立mi R-127過表達(dá)的PC9細(xì)胞和mi R-127敲減的A549穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,并用Real time PCR方法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中mi R-127的變化水平。2.Real time PCR和Western blot方法檢測PC9細(xì)胞過表達(dá)mi R-127和A549細(xì)胞敲減mi R-127后EMT相關(guān)的分子標(biāo)志物的表達(dá)差異。3.體外轉(zhuǎn)移和侵襲實驗檢測PC9細(xì)胞過表達(dá)miR-127和A549細(xì)胞敲減miR-127后,腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力的變化。4.腫瘤干性實驗和軟瓊脂實驗檢測PC9細(xì)胞過表達(dá)mi R-127和A549細(xì)胞敲減mi R-127后,腫瘤細(xì)胞的腫瘤干性與克隆形成率。MTS和Western blot方法檢測PC9細(xì)胞過表達(dá)mi R-127和A549細(xì)胞敲減mi R-127后,對于Gefitinib誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感性的變化,及對于Gefitinib所引起AKT和ERK的磷酸化水平的改變。裸鼠成瘤實驗檢測mi R-127過表達(dá)的PC9細(xì)胞和mi R-127敲減的A549細(xì)胞系與對照組相比的成瘤能力,用免疫組織化方法檢測Vimentin、Ki67、MMP9和TNFAIP3在裸鼠腫瘤組織中的表達(dá)。5.Real time PCR和Western blot方法檢測PC9細(xì)胞過表達(dá)miR-127和A549細(xì)胞敲減mi R-127前后,TNFAIP3的表達(dá)的變化;雙熒光素酶報告基因檢測mi R-127對TNFAIP3的直接靶向抑制作用。6.Western blot的方法檢測PC9及A549細(xì)胞過表達(dá)及抑制mi R-127前后,經(jīng)TNF-α作用后NF-κB信號通路相關(guān)蛋白IKKα/β、IκBα及p65的磷酸化水平的變化及RIP1的K63泛素化水平的變化。7.體外轉(zhuǎn)移實驗、侵襲實驗、MTS實驗及Western blot的方法檢測TNFAIP3對mi R-127調(diào)控肺癌過程的作用。結(jié)果:1.人肺癌組織與人肺癌細(xì)胞系中,mi R-127異常高表達(dá)。2.PC9細(xì)胞過表達(dá)miR-127后,上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-Cadherin顯著下調(diào),間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子N-Cadherin、ZEB1和Vimentin顯著上調(diào)。A549細(xì)胞敲減mi R-127后,上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-Cadherin顯著上調(diào),間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子N-Cadherin、ZEB1和Vimentin顯著下調(diào)。3.PC9細(xì)胞過表達(dá)miR-127后,細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力顯著增加;而A549細(xì)胞敲減mi R-127后,細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力顯著減弱。4.mi R-127促進(jìn)PC9細(xì)胞的腫瘤干性,同時促進(jìn)了體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生長;而敲減mi R-127的A549細(xì)胞腫瘤干性減弱,體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞生長減緩。Gefitinib降低PC9和A549細(xì)胞的磷酸化水平,從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長。mi R-127過表達(dá)的PC9細(xì)胞與對照組相比,對于Gefitinib誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感性降低,同時上調(diào)了AKT與ERK的磷酸化水平;而敲減mi R-127后,A549細(xì)胞凋亡增加,AKT與ERK的磷酸化水平顯著下調(diào)。mi R-127上調(diào)Vimentin、Ki67、MMP9等蛋白的表達(dá),抑制TNFAIP3蛋白的表達(dá)。5.在穩(wěn)定過表達(dá)mi R-127的PC9細(xì)胞系中,與對照組相比,TNFAIP3的表達(dá)明顯下調(diào),在穩(wěn)定敲減mi R-127的A549細(xì)胞系中,與對照組相比,TNFAIP3的表達(dá)明顯上調(diào),雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烇@示mi R-127可直接靶向抑制TNFAIP3的3’-UTR序列。6.PC9細(xì)胞過表達(dá)mi R-127后,與對照組相比經(jīng)TNF-α作用后NF-κB信號通路中IKKα/β、IκBα及p65的磷酸化水平明顯上調(diào),RIP1的K63泛素化水平增強(qiáng);而A549細(xì)胞抑制mi R-127表達(dá)后,與對照組相比經(jīng)TNF-α作用后IKKα/β、IκBα及p65的磷酸化水平明顯下降,RIP1的K63泛素化水平減弱。在mi R-127過表達(dá)的PC9細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TNFAIP3真核表達(dá)載體后,mi R-127所引起的NF-κB信號通路的變化有所回復(fù)。7.在mi R-127過表達(dá)的PC9細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TNFAIP3真核表達(dá)載體,可抑制細(xì)胞的EMT、轉(zhuǎn)移和侵襲能力;mi R-127過表達(dá)的PC9細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TNFAIP3真核表達(dá)載體,在Gefitinib誘導(dǎo)下,mi R-127對腫瘤細(xì)胞的抑制凋亡作用得到抑制,AKT與ERK的磷酸化水平有所回復(fù)。結(jié)論:1.肺癌組織中miR-127呈現(xiàn)顯著高表達(dá)。2.mi R-127促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、生長及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。3.mi R-127可降低肺癌細(xì)胞對于Gefitinib誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性。4.mi R-127通過直接靶向作用于TNFAIP3 3’-UTR而抑制TNFAIP3的表達(dá),并通過抑制TNFAIP3而活化NF-κB信號通路。5.miR-127對于肺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、生長及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用依賴于miR-127對于TNFAIP3的直接靶向抑制機(jī)制而實現(xiàn)。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of mi R - 127 in lung cancer , and to investigate the expression of mi R - 127 in human lung cancer . Compared with the control group , the expression of IKK偽 / 尾 , I魏B 偽 and P 1 . The expression of miR - 127 is significantly higher in lung cancer tissues . 2.mi R - 127 promotes the invasion , metastasis , growth and epithelial - mesenchymal transition ( EMT ) of lung cancer cells .

【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Yan Sun;Fei Guo;Marina Bagnoli;Feng-Xia Xue;Bao-Cun Sun;Ilya Shmulevich;Delia Mezzanzanica;Ke-Xin Chen;Anil K. Sood;Da Yang;Wei Zhang;;Key nodes of a micro RNA network associated with the integrated mesenchymal subtype of high-grade serous ovarian cancer[J];Chinese Journal of Cancer;2015年01期

2 馮嘯;姜楠;;活體肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)機(jī)制研究進(jìn)展[J];器官移植;2013年04期

3 于錦萍;石國剛;張秀艷;王林;陳紅;房芳;;厄洛替尼對胰腺癌細(xì)胞侵襲力的影響及機(jī)制[J];山東醫(yī)藥;2014年33期

4 蔡雋;;FOXQ1穩(wěn)定表達(dá)乳腺癌細(xì)胞系的建立及鑒定[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年04期

5 陳曉敏;郭俊明;樂東海;夏天;李克強(qiáng);;上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化:腫瘤轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控機(jī)制[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報;2013年09期

6 Minal Garg;;Epithelial-mesenchymal transition-activating transcription factors-multifunctional regulators in cancer[J];World Journal of Stem Cells;2013年04期

7 季蓉;吳煥淦;施茵;;鋅指蛋白A20對炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用及其在炎癥性腸病中的影響[J];世界華人消化雜志;2014年04期

8 郭永紅;陳琳;何瑜;周云;范超;張穎;紀(jì)光晰;秦源;張凌云;賈戰(zhàn)生;;A20與EGFP共表達(dá)腺病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞[J];世界華人消化雜志;2014年10期

9 吉鴻;盧桂芳;單濤;黎一鳴;陸宏偉;尚金金;黃濤;;姜黃素通過NF-κB-Snail信號通路抑制LPS誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

10 張瑤;姜藻;張汀榮;;MDM2與非小細(xì)胞肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子標(biāo)記物的相關(guān)性[J];江蘇醫(yī)藥;2014年16期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 閆實;低劑量放療誘導(dǎo)宮頸癌上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2013年

2 張東梅;TNIP1/TNFAIP3基因與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 廖善暉;結(jié)核分枝桿菌Pup蛋白的結(jié)構(gòu)特性研究以及布氏錐蟲SUMO、Nedd8系統(tǒng)的細(xì)胞功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

4 宰紅艷;RNAi抑制XIAP和Survivin表達(dá)對Panc-1細(xì)胞化療敏感性及侵襲性影響的研究[D];中南大學(xué);2012年

5 屈洪波;FOXC2在乳腺癌侵襲遷移及BCSCs“干性”維持中的作用及機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

6 張海;PGE_2通過EP1-Snail信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增強(qiáng)肝癌細(xì)胞侵襲性的分子機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

7 姚振宇;TRAIL誘導(dǎo)U937細(xì)胞凋亡和自噬的分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

8 張朝明;喹烯酮致HepG2細(xì)胞毒性與凋亡的分子調(diào)控機(jī)理研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 劉瑩;解旋酶DHX33在mDC中識別dsRNA和RNA病毒的機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2014年

10 劉芳;TSP50及TMEM16A在胃癌中的表達(dá)及TMEM16A與胃癌轉(zhuǎn)移關(guān)系的初探[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李少星;PI3K/Akt信號通路對上皮性卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 申發(fā)娟;MiR-200a和miR-141對人胃癌細(xì)胞株SGC7901生物學(xué)行為的影響及機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

3 賈睿;MIF過表達(dá)對宮頸癌細(xì)胞株SiHa生物學(xué)特性影響的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

4 吳婷婷;NF-κB及相關(guān)因子在宮頸癌細(xì)胞株中的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 劉耀飛;LPS協(xié)同TGF-β1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞侵襲遷移[D];華中科技大學(xué);2012年

6 馬文文;Notch信號通路在鉑耐藥性卵巢癌細(xì)胞株中作用及機(jī)制的初步研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

7 張晶;二甲雙胍抑制人前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及作用機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2014年

8 周榮斌;2型脯氨酸羥化酶在結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

9 張啟輝;探討缺氧誘導(dǎo)因子-1α與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];南昌大學(xué);2014年

10 趙莉莉;Bmi-1、OPN在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2014年

，

本文編號：1790920