發(fā)布時間：2018-04-23 04:28

  本文選題：非小細(xì)胞肺癌 + 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:1.研究 Semaphorin3A(SEMA3A)和基質(zhì)金屬蛋白酶-14(matrix metalloproteinase,MMP-14)在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中表達(dá)的臨床意義及其預(yù)后價值。2.研究上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)標(biāo)記物 E-鈣粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)在NSCLC中表達(dá)的臨床意義及預(yù)后價值,分析其與SEMA3A表達(dá)的相關(guān)性。3.觀察外源性SEMA3A對轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介導(dǎo)的肺癌A549細(xì)胞發(fā)生EMT的調(diào)節(jié)作用。方法:1.選擇94例NSCLC術(shù)后留取的蠟塊及臨床資料作為觀察組,選擇80例正常肺組織作為對照組,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測二組中SEMA3A和MMP-14蛋白的表達(dá),分析NSCLC中SEMA3A及MMP-14的關(guān)系,探討聯(lián)合檢測SEMA3A及MMP-14蛋白對預(yù)后的判斷價值。2.采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測E-cadherin和vimentin在NSCLC中表達(dá)的臨床病理意義,分析二者在NSCLC中表達(dá)的相關(guān)性和預(yù)后價值,分析其與SEMA3A在NSCLC中表達(dá)的聯(lián)系和相關(guān)性。3.采用TGF-β1體外誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生EMT,并予以外源性的SEMA3A預(yù)處理,觀察細(xì)胞形態(tài),采用劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移能力,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測vimentin的表達(dá),免疫印跡法檢測E-cadherin和vimentin的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.SEMA3A主要表達(dá)于細(xì)胞胞漿,在80例正常組中有60例SEMA3A陽性表達(dá),陽性表達(dá)率為75.00%,顯著高于NSCLC組的36.17%(34/94),經(jīng)χ2檢驗,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。SEMA3A在NSCLC組中的表達(dá)與無胸膜侵襲、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)少于4個、PCNA陽性率低于25.00%、高中分化程度、無脈管侵襲和腫瘤直徑小于5cm關(guān)系密切(P0.05)。2.MMP-14主要表達(dá)于細(xì)胞胞膜,胞漿內(nèi)亦有部分陽性表達(dá)。在80例正常組中,僅有20例陽性表達(dá),陽性表達(dá)率為25.00%;顯著低于NSCLC組的75.53%(71/94),兩組經(jīng)χ2檢驗,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MMP-14在NSCLC組中的表達(dá)與有胸膜侵襲、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)多于4個、PCNA陽性率高于25.00%、低分化程度和有脈管侵襲關(guān)系密切(P0.05)。3.經(jīng)線性相關(guān)分析顯示,NSCLC組中SEMA3A及MMP-14的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.852,P=0.000)。生存期相關(guān)性分析結(jié)果顯示,SEMA3A低表達(dá)及MMP-14的高表達(dá)與生存時間呈負(fù)相關(guān)(P0.05),即SEMA3A低表達(dá)、MMP-14高表達(dá)的患者預(yù)后差。4.E-cadherin主要表達(dá)于細(xì)胞膜,也可以表達(dá)在細(xì)胞漿。在80例正常組中有62例E-cadherin陽性表達(dá),陽性表達(dá)率為77.50%,顯著高于NSCLC組的41.49%(39/94。)經(jīng)χ2檢驗,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。E-cadherin在NSCLC中的陽性表達(dá)與無胸膜侵襲、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)少于4個、PCNA陽性率低于25%、高中分化程度、無脈管侵襲關(guān)系密切(P0.05)。5.vimentin表達(dá)于細(xì)胞漿。在80例正常組中,僅有6例陽性表達(dá),陽性表達(dá)率為7.50%;顯著低于NSCLC組的44.68%(42/94),兩組經(jīng)χ2檢驗,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。vimentin在NSCLC組中的表達(dá)與有胸膜侵襲、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)多于4個、PCNA陽性率高于25%、低分化程度和有脈管侵襲關(guān)系密切(P0.05)。6.經(jīng)線性相關(guān)分析顯示,NSCLC組中vimentin及E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.793,P= 0.000);而SEMA3A與E-cadherin的表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.857,P=0.000);SEMA3A 與 vimentin 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.785,P=0.000)。生存期相關(guān)性分析結(jié)果顯示,E-cadherin低表達(dá)、vimentin高表達(dá)的患者預(yù)后差。7.予以5ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)48h后,可見A549細(xì)胞由原有的鋪路石樣,轉(zhuǎn)化成紡錘體形或長梭形,細(xì)胞間連接消失,細(xì)胞間隔變大,呈離散狀態(tài)。劃痕實驗結(jié)果顯示,TGF-β1能夠顯著促進(jìn)A549細(xì)胞遷移,遷移率為75.67%±4.51%,是對照組(33.00%±7.00%)的 2.29 倍(P=0.000);免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,對照組無vimentin陽性表達(dá),而予以TGF-β1誘導(dǎo)后,可見vimentin陽性表達(dá),胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色絲狀排列結(jié)構(gòu);Western blot結(jié)果顯示TGF-β1誘導(dǎo)48 h后,vimentin蛋白表達(dá)明顯上調(diào),是對照組的6.86倍,E-cadherin蛋白表達(dá)明顯下調(diào),是對照組的5.70%。而予以SEMA3A預(yù)處理,能夠下調(diào)TGF-β1介導(dǎo)的A549細(xì)胞EMT的發(fā)生,抑制上述變化。結(jié)論:1.SEMA3A在NSCLC臨床樣本中低表達(dá),伴隨著MMP-14高表達(dá)、E-cadherin低表達(dá)和vimentin高表達(dá),并與腫瘤的胸膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)、分化程度、脈管浸潤及PCNA的表達(dá)密切相關(guān),同時多提示預(yù)后不良。可能與腫瘤細(xì)胞粘附缺失獲得運動能力,侵襲能力增強(qiáng)有關(guān)。并為評估NSCLC的惡性程度、診斷以及預(yù)后提供了新的生物學(xué)指標(biāo)。2.TGF-β1能夠顯著促進(jìn)A549細(xì)胞發(fā)生EMT,細(xì)胞形態(tài)由鋪路石樣變?yōu)轭惓衫w維細(xì)胞樣,同時伴隨著遷移能力的提高;予以外源性SEMA3A預(yù)處理,能夠顯著抑制該變化。
[Abstract]:Objective : To investigate the clinical significance and prognostic value of SEMA3A and MMP - 14 in NSCLC . The positive rates of MMP - 14 and MMP - 14 in NSCLC were significantly higher than that in NSCLC group ( P0.05 ) . The positive expression of E - cadherin in NSCLC was significantly lower than that in NSCLC group ( P0.05 ) . The results showed that the expression of vimentin in A549 cells was significantly higher than that of control group ( 33.00 % 鹵 7.00 % ) .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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4 王，

本文編號：1790462