本文選題：膠質(zhì)瘤 + miRNA��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：膠質(zhì)瘤是當(dāng)前最常見的成人腦部腫瘤之一,在臨床上主要表現(xiàn)為高侵襲性、高遷移性等特點(diǎn),同時(shí)對(duì)于放療有很強(qiáng)的抵抗作用,從而使得其預(yù)后比較差。同其他腫瘤一樣,膠質(zhì)瘤的病因多樣,包括遺傳因素、環(huán)境致癌因素、生活行為因素等。隨著基礎(chǔ)研究的發(fā)展,當(dāng)前對(duì)于膠質(zhì)瘤的形成與發(fā)展研究更加深入,也開發(fā)了一些有效的治療方法。miRNA是一類長度20-24核苷酸的5’端帶磷酸基團(tuán),3’端帶羥基的非編碼單鏈小分子RNA。miRNAs參與了生命過程中一系列的重要進(jìn)程,在細(xì)胞的增殖、分化、生長、發(fā)育和凋亡中都發(fā)揮了重要的作用,也可調(diào)控機(jī)體的早期胚胎發(fā)育、脂肪代謝等。miRNAs也參與了眾多惡性腫瘤的病理過程,miRNA表達(dá)譜異常也與膠質(zhì)瘤有關(guān)。miR-204是腫瘤中最常見的異常改變的miRNA之一,miR-204前體在成熟過程中會(huì)加工形成2個(gè)互補(bǔ)單鏈小分子RNA,分別為miR-204-3p和miR-204-5p。現(xiàn)代研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miR-204-5p能夠抑制惡性腫瘤的增殖,且與部分惡性腫瘤的腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較差的預(yù)后密切相關(guān)。RAB22A通常與轉(zhuǎn)運(yùn)小泡中的GTP結(jié)合而激活,而在膜融合后水解GTP轉(zhuǎn)變?yōu)榕cGDP結(jié)合的非活性狀態(tài),但是RAB22A在腫瘤形成過程中發(fā)揮的作用卻所知有限。在部分惡性腫瘤中,RAB22A是miR-204-5p的靶基因之一。我們從臨床、細(xì)胞學(xué)與動(dòng)物模型等三個(gè)部分進(jìn)行分析,明確了miR-204-5p可作為腫瘤抑制因子通過靶向RAB22A對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)揮抑制作用。本畢業(yè)論文主要包括以下三個(gè)部分：在第一部分研究中,我們分別運(yùn)用原位雜交和qRT-PCR的方法檢測(cè)了膠質(zhì)瘤及其正常腦組織標(biāo)本中miR-204-5p的表達(dá),結(jié)果顯示miR-204-5p在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)低于正常腦組織,并隨著膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)級(jí)別增高,miR-204-5p的表達(dá)呈降低趨勢(shì)。第二部分研究中,我們采用慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建了miR-204-5p表達(dá)體系以及轉(zhuǎn)染合成的miR-204-5p類似物(mimic)與抑制齊(inhibitor),在LN229和U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中分別驗(yàn)證了miR-204-5p對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響及可能的機(jī)制。MTT、EdU、集落生成實(shí)驗(yàn)顯示,Lev-miR-204-5p組能夠顯著地降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞LN229和U87的增殖,以及抑制其集落生成；Transwell(Boyden)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),相比于LEV組,Lev-miR-204-5p組能夠極大的抑制LN229和U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移與侵襲；我們同時(shí)運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析、預(yù)測(cè)了：niR-204-5p的靶基因的功能和信號(hào)通路聚集點(diǎn),發(fā)現(xiàn)RAB22A 基因的3'-UTR存在 miR-204-5p結(jié)合位點(diǎn)。通過熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)證明了,miR-204-5p能夠顯著的抑制RAB22A基因的表達(dá)。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)與Western blot實(shí)驗(yàn)也證明了在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN229和U87細(xì)胞系中,miR-204-5p能夠顯著抑制AB22A的表達(dá),以上的結(jié)果說明,RAB22A作為miR-204-5p的直接靶基因,被其負(fù)調(diào)控。第三部分研究我們驗(yàn)證了LN229細(xì)胞中的niR-204-5p過表達(dá)體系對(duì)裸鼠原位移植模型的影響。結(jié)果顯示miR-204-5p過表達(dá)可以明顯抑制膠質(zhì)瘤的生長,減少Ki-67的陽性表達(dá),從而延長小鼠的生存時(shí)間。本研究從臨床水平、體外細(xì)胞水平和體內(nèi)動(dòng)物水平上探討了miR-204-5p在膠質(zhì)瘤中的生物學(xué),驗(yàn)證了RAB22A為miR-204-5p的直接調(diào)控靶基因,其在miR-204-5p的膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長調(diào)控中發(fā)揮了重要作用,也為以后更深入地研究miR-204-5p的功能提供了重要的線索。
[Abstract]:The expression of miR - 204 - 5p in glioma and its normal brain tissue has been studied . The results show that miR - 204 - 5p plays an important role in the growth , development and apoptosis of glioma .
Transwell ( Boyden ) showed that Lev - miR - 204 - 5p significantly inhibited migration and invasion of LN229 and U87 glioma cells compared to the LEV group .
The expression of miR - 204 - 5p and miR - 204 - 5p in glioma cell line LN229 and U87 cell line have been demonstrated . The results show that miR - 204 - 5p can significantly inhibit the expression of miR - 204 - 5p in glioma cell line LN229 and U87 cell line . The results show that miR - 204 - 5p can significantly inhibit the expression of miR - 204 - 5p in glioma cell line LN229 and U87 cell line .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41

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