本文選題：胰腺導(dǎo)管腺癌 + 阿帕替尼��； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)是一種高致死率的腫瘤,5年生存率小于5%且預(yù)后不良,主要和診斷的時(shí)候已屬晚期、早期以及進(jìn)展性的侵襲和轉(zhuǎn)移、缺乏有效的治療手段相關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道,大約50%的胰腺癌患者被確診時(shí)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。近年來(lái),雖然胰腺癌的治療手段發(fā)展迅速,但是死亡率仍然居高不下。雖然吉西他濱是胰腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法,但是并不能明顯延長(zhǎng)患者的生存期,因此我們需要探索新的治療方法和分子靶向藥物以改善胰腺癌患者的預(yù)后。血管形成在很多腫瘤中已經(jīng)通過(guò)VEGF信號(hào)通路抑制劑被證實(shí)是一個(gè)很有前景的治療靶點(diǎn)。眾所周知,胰腺癌是一個(gè)乏血供的腫瘤。前期的VEGF信號(hào)通路抑制劑如貝伐單抗、Axitinib、Sorafenib等在胰腺癌的II/III期的臨床實(shí)驗(yàn)中雖有一定的療效,但是結(jié)果不甚理想,目前零星的臨床研究個(gè)案報(bào)道提示阿帕替尼對(duì)晚期胰腺癌患者具有良好的療效。我們知道阿帕替尼是靶向血管生成的小分子TKI抑制劑,高度選擇性抑制VEGFR2,和Sorafenib等TKI抑制劑相比主要競(jìng)爭(zhēng)VEGFR2胞內(nèi)的ATP結(jié)合位點(diǎn),具有良好的抑制腫瘤血管形成和抗腫瘤活性。研究顯示在很多人類腫瘤移植模型中單獨(dú)給予阿帕替尼或者聯(lián)合化療藥物,阿帕替尼具有良好的抗腫瘤活性,且耐受性良好、無(wú)明顯毒性作用。此外,阿帕替尼也在多種腫瘤細(xì)胞如胃癌細(xì)胞、膽管癌細(xì)胞等中展開體外研究,結(jié)果顯示阿帕替尼能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移并能促進(jìn)凋亡等。但是目前尚未見(jiàn)對(duì)胰腺癌的研究報(bào)道,基于上述所述,本課題主要以胰腺癌BXPC-3、ASPC-1、PANC-1胰腺癌細(xì)胞為研究對(duì)象,通過(guò)體內(nèi)體外研究,探討阿帕替尼對(duì)胰腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響,并尋找可能的相關(guān)機(jī)制,為研究阿帕替尼的臨床應(yīng)用價(jià)值奠定基礎(chǔ)。研究目的通過(guò)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)探討阿帕替尼對(duì)胰腺癌惡性生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)機(jī)制。研究方法1、體外培養(yǎng)人BXPC-3、ASPC-1、PANC-1胰腺癌細(xì)胞,用不同藥物濃度的阿帕替尼(20、40μmol/L)抑制VEGF-VEGFR2通路后,采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,繪制生長(zhǎng)曲線;通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)阿帕替尼對(duì)胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)周期分布的影響;采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化;通過(guò)劃痕和transwell腫瘤侵襲實(shí)驗(yàn)觀察阿帕替尼對(duì)胰腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響;通過(guò)ELISA檢測(cè)自分泌的VEGF蛋白經(jīng)VEGF通路抑制劑阿帕替尼處理后,表達(dá)量是否發(fā)生改變。2、體外培養(yǎng)人BXPC-3、ASPC-1、PANC-1胰腺癌細(xì)胞,用不同藥物濃度的阿帕替尼(20、40μmol/L)干預(yù)24小時(shí)后,通過(guò)Western-blot技術(shù)檢測(cè)BXPC-3、ASPC-1、PANC-1胰腺癌細(xì)胞中VEGFR2/PI3K/AKT通路的磷酸化改變及抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量變化。3、體外培養(yǎng)人BXPC-3胰腺癌細(xì)胞,將100ul細(xì)胞和PBS的混合液(含1×107細(xì)胞)接種于雄性、6周齡的BALB/C裸鼠的右腋下。當(dāng)可觸及腫塊時(shí)(約0.5cm左右),隨機(jī)分為對(duì)照組和阿帕替尼組,每組8只,通過(guò)灌胃給予阿帕替尼(200mg/kg/d)以及安慰劑。然后每三天測(cè)一次腫瘤的長(zhǎng)和寬以及裸鼠的體重。給藥3周后,處死裸鼠,取出腫瘤組織,進(jìn)行稱重。將取下的腫瘤組織免疫組化,檢測(cè)兩組組織中CD31、Ki67表達(dá)情況,另外通過(guò)Tunel法檢測(cè)兩組的凋亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、體外培養(yǎng)的人BXPC-3、ASPC-1、PANC-1胰腺癌細(xì)胞經(jīng)不同濃度的阿帕替尼處理后,和對(duì)照組相比,三株細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯被抑制。細(xì)胞周期結(jié)果顯示在ASPC-1和PANC-1細(xì)胞中,低濃度的阿帕替尼引起S期和G2/M期的減少,使細(xì)胞增殖減慢,而高濃度的阿帕替尼主要引起G2/M期阻滯,從而抑制細(xì)胞增殖,在BXPC-3細(xì)胞中,低、高濃度的阿帕替尼主要引起G2/M期阻滯,細(xì)胞增殖被抑制。采用阿帕替尼體外干預(yù)24小時(shí),阿帕替尼對(duì)BXPC-3和ASPC-1胰腺癌細(xì)胞具有促凋亡作用,但對(duì)PANC-1細(xì)胞沒(méi)有明顯影響。另外,阿帕替尼也可以抑制BXPC-3和ASPC-1細(xì)胞的侵襲和遷移能力,而在PANC-1中,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比沒(méi)有明顯改變。由于阿帕替尼阻斷VEGF/VEGFR2,使自分泌的VEGF的含量也明顯減少,且阿帕替尼濃度越高,分泌量越少。2、Western-blot發(fā)現(xiàn)經(jīng)阿帕替尼處理后,各組細(xì)胞的VEGFR2的磷酸化水平減少,同時(shí)下游通路PI3K/AKT的磷酸化也明顯減少。VEGF/VEGFR2/PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與阿帕替尼對(duì)胰腺癌生物學(xué)行為的影響。另外在BXPC-3細(xì)胞中抗凋亡蛋白BCL-2的表達(dá)量明顯下調(diào),且呈濃度依賴性,但在ASPC-1和PANC-1細(xì)胞未見(jiàn)明顯改變。3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示阿帕替尼能明顯延緩胰腺癌移植瘤的生長(zhǎng)。和對(duì)照組相比,阿帕替尼組的CD31的表達(dá)和Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的比例明顯降低,說(shuō)明阿帕替尼可以減少血管密度以及癌細(xì)胞的增殖。結(jié)論體內(nèi)體外研究結(jié)果顯示:阿帕替尼對(duì)胰腺癌具有抑制作用,能明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,并誘導(dǎo)其凋亡,且具有濃度依賴性,可能和減少VEGF/VEGFR2/PI3K/AKT通路的磷酸化以及減少VEGF的分泌有關(guān)。阿帕替尼在胰腺癌中可能具有一定的治療前景,具體的臨床效益值得進(jìn)一步深入探索。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳瑤;艾明;;苦參堿對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信號(hào)通路的影響[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2015年07期

2 夏曙;于世英;;PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J];腫瘤;2006年06期

3 ;Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors KDR and Fit-1 in gastric cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2002年06期

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本文編號(hào)：1758421