本文選題：端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 + 叉頭盒蛋白�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年23期

【摘要】：目的探討人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse enzyme,hTERT)促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲的分子機(jī)制。方法構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)hTERT的細(xì)胞株SGC-7901-hTERT,采用Western blot檢測(cè)叉頭盒蛋白(forkhead box M1,FOXM1)的表達(dá),q RT-PCR和Western blot檢測(cè)FOXM1下游侵襲相關(guān)基因基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的m RNA和蛋白表達(dá);構(gòu)建FOXM1的sh RNA干擾質(zhì)粒,在SGC-7901-hTERT細(xì)胞中轉(zhuǎn)染該質(zhì)粒,Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力,q RT-PCR和Western blot檢測(cè)MMP-2、MMP-9的m RNA和蛋白表達(dá);構(gòu)建FOXM1啟動(dòng)子活性報(bào)告質(zhì)粒,在SGC-7901-hTERT細(xì)胞中用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FOXM1啟動(dòng)子活性,q RT-PCR檢測(cè)FOXM1 m RNA表達(dá);構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)FOXM1的細(xì)胞株SGC-7901-HA-FOXM1,并在此細(xì)胞中轉(zhuǎn)染hTERT過表達(dá)質(zhì)粒,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)檢測(cè)FOXM1乙�；阶兓�,免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)hTERT與FOXM1的細(xì)胞定位。結(jié)果與對(duì)照組比較,過表達(dá)hTERT促進(jìn)FOXM1及其下游分子MMP-2、MMP-9的蛋白表達(dá),同時(shí)也促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲(P0.01),但不影響FOXM1的啟動(dòng)子活性及m RNA表達(dá);與過表達(dá)hTERT組比較,干擾FOXM1可抑制MMP-2、MMP-9的m RNA和蛋白表達(dá),同時(shí)也抑制腫瘤細(xì)胞侵襲(P0.01);hTERT與FOXM1存在細(xì)胞共定位,且過表達(dá)hTERT可上調(diào)FOXM1乙�；�。結(jié)論 hTERT通過上調(diào)FOXM1乙�；龠M(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲。
[Abstract]:Objective to investigate the molecular mechanism of human telomerase reverse transcriptase telomerase reverse enzyme hTERT in promoting the invasion of gastric cancer cells.Methods A cell line SGC-7901-hTERT with stable expression of hTERT was constructed. The expression of forkhead box M1-FOXM1 was detected by Western blot. The expression of m RNA and protein of matrix metalloproteinase-2 metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) were detected by Western blot and Western blot.The sh RNA interference plasmid of FOXM1 was constructed and transfected into SGC-7901-hTERT cells to detect the invasion ability of SGC-7901-hTERT cells. The m RNA and protein expression of MMP-2mMMP-9 were detected by Western blot and RT-PCR, and the FOXM1 promoter activity reporter plasmid was constructed.The expression of FOXM1 m RNA was detected by double luciferase report assay in SGC-7901-hTERT cell line SGC-7901-HA-FOXM1, and the hTERT overexpression plasmid was transfected into SGC-7901-HA-FOXM1 cell line.Co-immunoprecipitation Co-IPP was used to detect the acetylation level of FOXM1 and the cellular localization of hTERT and FOXM1 was detected by immunofluorescence assay.Results compared with the control group, overexpression of hTERT promoted the expression of FOXM1 and its downstream MMP-2mMMP-9 protein, and also promoted the invasion of tumor cells by P0.01T, but did not affect the promoter activity and m RNA expression of FOXM1, compared with the overexpression of hTERT group.Interfering with FOXM1 could inhibit the expression of m RNA and protein of MMP-9 and inhibit the invasion of tumor cells by P0.01hTERT and FOXM1, and overexpression of hTERT could up-regulate the acetylation level of FOXM1.Conclusion hTERT promotes the invasion of gastric cancer cells by up-regulating FOXM1 acetylation.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：重慶市基礎(chǔ)科學(xué)與前沿技術(shù)研究項(xiàng)目(CSTC2016jcyjA0570)~~
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1753510