本文選題：淋巴瘤 + 大B細胞�。� 參考：《東南大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分microRNA-224在DLBCL細胞株中的表達及對細胞株增殖、侵襲、凋亡的影響目的：microRNA-224 (miR-224)在細胞中參與調(diào)控多種生物學(xué)信號傳導(dǎo)通路,通過調(diào)節(jié)靶基因的表達來影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)中,其作用機制仍不清楚。本實驗旨在研究活化細胞型、生發(fā)中心型DLBCL細胞株以及正常B淋巴細胞中miR-224的表達水平；以及干擾miR-224在DLBCL細胞株中的表達后對細胞株的增殖、侵襲能力和凋亡的影響。方法：采用膠原酶和胰蛋白酶原消化碎化的扁桃體,并使用流式細胞儀分選、提取表達CD19+B淋巴細胞；采用qRT-PCR檢測比較彌漫大B細胞淋巴瘤細胞株OCI-LY3、OCI-LY10(ABC-type)和OCI-LY18、OCI-LY19(GCB-type)以及正常CD19+B淋巴細胞的miR-224的表達水平;使用mimic-miR-224轉(zhuǎn)染OCI-LY3、OCI-LY10和OCI-LY18、OCI-LY19后,采用qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后OCI-LY3、OCI-LY10和OCI-LY18、OCI-LY19的miR-224的表達水平的變化；并采用MTT法檢測轉(zhuǎn)染后OCI-LY3、OCI-L1Y10和OCI-LY18、OCI-LY19細胞增殖水平的變化；使用Transwell法檢測轉(zhuǎn)染后對OCI-LY3、OCI-LY10和OCI-LY18、OCI-LY19細胞的體外侵襲能力的影響；采用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后對OCI-LY3、 OCI-LY10和OCI-LY18、OCI-LY19細胞的凋亡的影響。結(jié)果：使用Ficoll離心獲取單個核細胞層后,采用流式細胞術(shù)分選可獲得純度90%以上表達CD19+B淋巴細胞；qRT-PCR檢測結(jié)果表明DLBCL細胞株中miR-224的表達明顯低于正常B淋巴細胞(P0.05),且ABC-型與GCB-型DLBCL細胞株的miR-224表達水平無顯著差異；qRT-PCR檢測結(jié)果顯示mimic-miR-224轉(zhuǎn)染后ABC-型與GCB-型DLBCL細胞株的miR-224表達水平顯著增加(P0.01)；MTT結(jié)果顯示,在轉(zhuǎn)染24h、48 h、72 h和96 h后,OCI-LY3/mimic-miR-224細胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY3/mimic-control分別下降至86%(P0.05),82%(P0.05),74%(P0.01); OCI-LY10/ mimic-miR-224細胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY10/mimic-control分別下降至79%(P0.01),75%(P0.01),68%(P0.01); OCI-LY 18/mimic-miR-224細胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY18/mimic-control分別下降至83%(P0.01),78%(P0.01),71%(P0.01);OCI-LY19/mimic-miR-224細胞在48h、72h和96h的增殖能力較OCI-LY19/mimic-control分別下降至85%(P0.01),78%(P0.01),69%(P0.01);細胞體外侵襲力測定結(jié)果顯示：OCI-LY3/mimic-miR-224、OCI-LY10/mimic-miR-224、OCI-LY18/mimic-miR-224及OCI-LY19/mimic-miR-224組中穿膜細胞的數(shù)量分別是OCI-LY3/mimic-control、 OCI-LY10 mimic-control、OCI-LY18/mimic-control及OCI-LY19/mimic-control組的71%(P0.05)、60%(P0.01)、82%(P0.05)及81%(P0.05)；流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：OCI-LY3/mimic-miR-224、OCI-LY10/mimic-miR-224、OCI-LY18/mimic-miR-224及OCI-LY19/mimic-miR-224組細胞的凋亡率顯著高于OC1-LY3/mimic-control、OCI-LY10/mimic-control、OCI-LY18/mimic-control及OCI-LY19/mimic-control組(P0.05)。結(jié)論：彌漫大B細胞淋巴瘤細胞miR-224表達水平明顯低于CD19+B淋巴細胞的miR-224表達水平,且ABC-型與GCB-型DLBCL細胞株的miR-224表達水平無顯著差異；使用RNA干擾技術(shù)特異性增加OCI-LY3、OCI-LY10、OCI-LY18和OCI-LY19細胞miR-224表達后,細胞增殖、侵襲能力受到明顯抑制,凋亡增加,說明miR-224表達水平的變化能影響OCI-LY3、OCI-LY10、OCI-LY18和OCI-LY19細胞生物學(xué)行為的改變；推測miR-224表達失調(diào)在彌漫大B細胞淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展中起始動、觸發(fā)作用。第二部分miR-224在DLBCL細胞株中靶基因預(yù)測、篩選及驗證目的：準確預(yù)測miR-224在彌漫大B細胞淋巴瘤中的靶基因?qū)τ谘芯縨iR-224在彌漫大B細胞淋巴瘤中的功能以及分析miR-224所參與的生物學(xué)過程有重要的意義。本實驗使用生物信息學(xué)方法預(yù)測并篩選miR-224靶基因,采用分子生物學(xué)方法驗證miR-224靶基因從而為發(fā)病機制、治療以及預(yù)后評判提供新的策略和思路。方法：使用nicroRNA靶基因預(yù)測軟件TargetScan 5.1、miRDB、miRWalk、 RNA22及miRanda預(yù)測miR-224的靶基因：依據(jù)預(yù)測軟件積分及結(jié)合彌漫大B細胞淋巴瘤的免疫化學(xué)治療特征篩選miR-224的靶基因；采用熒光素酶報告基因?qū)嶒炛苯域炞CmiR-224的靶基因：使用qRT-PCR、流式細胞儀、Western Blot方法檢測mimic-miR-224轉(zhuǎn)染OCI-LY3、OCI-LY10和OCI-LY18、OCI-LY19后靶基因mRNA及靶基因蛋白表達的變化。結(jié)果：TargetScan 5.1、miRDB、miRWalk、RNA22及miRanda均準確預(yù)測CD59為miR-224的靶基因；熒光素酶報告基因方法實驗證明了CD59是miR-224的靶基因；流式細胞術(shù)、Western blot及qRT-PCR法檢測發(fā)現(xiàn)mimic-miR-224轉(zhuǎn)染后細胞中miR-224的表達量顯著增加,CD59的蛋白表達明顯降低(P0.05),CD59的mRNA的量變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：CD59為miR-224的靶基因；miR-224在轉(zhuǎn)錄后水平對CD59表達進行調(diào)節(jié)。第三部分microRNA-224在彌漫大B細胞淋巴瘤患者中的表達及臨床意義目的：miR-224在DLBCL細胞株中低表達已得到證實,其表達水平的變化對DLBCL細胞生物學(xué)行為產(chǎn)生影響,miR-224表達失調(diào)或為DLBCL的發(fā)生、發(fā)展中起始動、觸發(fā)作用：本實驗擬分析miR-224在DLBCL患者中的表達及其與臨床病理特征以及預(yù)后之間的關(guān)系。方法：選取168例DLBCL患者為研究對象,采用qRT-PCR技術(shù)檢測其miR-224的相對表達量,并探討miR-224表達水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：168例DLBCL患者淋巴組織中miR-224表達水平均值為0.97±0.33,正常淋巴結(jié)組織表達水平均值為1.87±0.43,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；miR-224在DLBCL患者中的表達與患者年齡(P=0.4342)、性別(P=0.6129)、疾病分期(P=0.2498)、國際預(yù)后指數(shù)(P=0.3547)、LDH(P=0.3985)均無明顯相關(guān)性；miR-224在GCB患者組與ABC患者組表達水平無顯著差異(P0.05)；miR-224表達水平在CR組最高,PR組次之,SD+PD組最低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；以DLBCL患者miR-224表達水平的平均值為閾值,將患者分為高表達組和低表達組,兩組患者的5年無進展生存率及總生存率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05),前者均較后者高。結(jié)論：miR-224可能作為抑癌基因參與了DLBCL的發(fā)生、發(fā)展,其表達水平可作為DLBCL患者預(yù)后判斷的標志物,有助于指導(dǎo)臨床個體化及分層治療,從而改善患者預(yù)后。第四部分CD59在彌漫大B細胞淋巴瘤患者中的表達及臨床意義目的：miR-224在DLBCL患者病理組織中表達水平較正常對照組為低,且證實miR-224表達水平與臨床病理特征及預(yù)后的有關(guān)；本實驗擬分析miR-224的靶基因CD59在DLBCL患者病理組織中的表達及其與臨床病理特征以及預(yù)后之間的關(guān)系。方法：選取186例DLBCL患者為研究對象,采用組織微陣列及免疫組化方法檢測其CD59的相對表達量,并探討CD59表達水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：186例DLBCL患者中,有151例患者病理組織免疫組化提示CD59陽性,其中68例為GCB型DLBCL (36.6%),83例患者為ABC型DLBCL(44.6%)：在35例CD59陰性表達的DLBCL患者中,18例為GCB型DLBCL(9.7%),17例患者為ABC型DLBCL (9.1%); ABC型DLBCL患者與GCB型DLBCL患者淋巴組織中CD59表達水平兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。CD59在DLBCL患者中的表達與患者年齡、性別、疾病分期、國際預(yù)后指數(shù)、LDH均無相關(guān)性。獲得完全緩解的患者中的CD59表達水平顯著低于未達完全緩解的患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。其中疾病進展及疾病穩(wěn)定組CD59表達量最高,部分緩解組次之,完全緩解組CD59表達水平最低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。多因素統(tǒng)計學(xué)分析提示在DLBCL患者中表達CD59的腫瘤細胞超過50%以及存有B癥狀和高IPI分值是獨立的預(yù)后不良因素。以CD59表達水平的平均值為閾值,將患者分為高表達組和低表達組,兩組患者的2年無進展生存率及總生存率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,后者均較前者高。結(jié)論：CD59其表達水平可作為DLBCL患者預(yù)后判斷的標志物,可在早期篩選預(yù)后不良的病例,有助于臨床治療方案的選擇及改善預(yù)后。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 雷鳴,張英豪,藺濤;原發(fā)性脾型淋巴瘤的診斷和治療(附3例報告)[J];肝膽外科雜志;2001年02期

2 ;血管內(nèi)大B細胞淋巴瘤[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2002年01期

3 陸志成,周道銀;小兒胸水查見惡性淋巴瘤細胞二例[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗;2004年02期

4 林競韌;肖揚;;以三系減少表現(xiàn)為主的淋巴瘤1例[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年08期

5 李亞琴;張俊;司曉楓;龐潔;;血管內(nèi)皮生長因子與淋巴瘤的相關(guān)性研究[J];甘肅醫(yī)藥;2008年04期

6 郭智;譚曉華;陳豐;石宇杰;張明;張育葵;胡碧川;紀妍;瞿嶸;;細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞治療難治性淋巴瘤的臨床研究[J];中華實用診斷與治療雜志;2009年10期

7 Kawamoto K;Nakamura S;Iwashita A;劉勇;;原發(fā)性胃T細胞淋巴瘤的臨床病理特征[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2011年01期

8 孫靜;姚燁;陳琳軍;鄧曉輝;郝思國;;淋巴瘤細胞胞外體生物學(xué)特性及其抗淋巴瘤效應(yīng)的研究[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2012年14期

9 夏樂敏;陳秋生;張莉;;小腸黏膜相關(guān)淋巴組織結(jié)外邊緣區(qū)B細胞淋巴瘤1例報告[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年12期

10 唐華陽;;雙克隆B-細胞淋巴瘤[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;1986年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 鄒萍;;疑難危重淋巴瘤診治的思考[A];2009年浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

2 沈志祥;周勵;;復(fù)發(fā)難治性淋巴瘤的治療進展[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

3 朱平;;淋巴瘤的分子診斷學(xué)方法評價[A];第七屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會暨2008年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

4 周曉曦;;跨膜型TNF-α在淋巴瘤中的表達及其抗體的靶向治療[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

5 王華慶;錢正子;張會來;;外周T細胞淋巴瘤的診治新策略[A];第十一屆中國抗癌協(xié)會全國淋巴瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2009年

6 陳兵;歐陽建;邵曉雁;周敏;;肝脾T細胞淋巴瘤中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤1例[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 顏次慧;楊銘;李雙靜;熊冬生;;抗CD20 ScFv-TRAIL融合蛋白的構(gòu)建表達及其對BJAB淋巴瘤細胞生長的抑制作用[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

8 唐建發(fā);;外周T細胞淋巴瘤合并黑熱病形態(tài)學(xué)特點觀察[A];第五屆全國中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會議論文匯編[C];2009年

9 周郁鴻;;惰性淋巴瘤的治療進展[A];2006年浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

10 張巧花;侯淑玲;;難治性彌漫大B細胞淋巴瘤研究進展[A];第一屆全國難治性淋巴瘤學(xué)術(shù)研討會暨第二屆全國多發(fā)性骨髓瘤學(xué)術(shù)研討會（國家級血液系統(tǒng)惡性腫瘤繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)習(xí)班）繼續(xù)教育集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前9條

1 安陽地區(qū)醫(yī)院副院長、主任醫(yī)師 李新剛;從羅京去世談淋巴瘤的防治[N];安陽日報;2009年

2 王彥艷 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院血液科 上海血液學(xué)研究所醫(yī)生;以科學(xué)態(tài)度面對淋巴瘤[N];文匯報;2013年

3 楊霞 寧習(xí)源;我國利用分子靶向技術(shù)治療難治性淋巴瘤獲突破[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

4 錢巖;35年來首個治療兩種類型淋巴瘤的藥物問世[N];中國醫(yī)藥報;2011年

5 顧蓓紅;淋巴瘤遇到勁敵[N];光明日報;2000年

6 ;淋巴瘤該不該放、化療？[N];健康時報;2006年

7 時仲省;高思敏;運用PCR技術(shù)“搜索”惡性淋巴瘤細胞[N];中國醫(yī)藥報;2002年

8 楊淑娟;美研究出對腫瘤細胞具高親和性肽[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 劉向;德國先靈公司研制出治療B細胞淋巴瘤新藥[N];經(jīng)濟參考報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李華飛;抗CD20納米抗體梳的構(gòu)建及其抗淋巴瘤作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 宋國齊;microRNA-224在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及其功能研究[D];東南大學(xué);2015年

3 王孜;外周T細胞淋巴瘤中轉(zhuǎn)錄因子GATA3的預(yù)后分析和體外研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 王昊天;雷利度胺對腫瘤相關(guān)巨噬細胞的作用及其對淋巴瘤生長的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

5 唐友紅;高效靶向調(diào)控突變型Bik基因促淋巴瘤細胞凋亡研究[D];中南大學(xué);2010年

6 馮曉莉;中國人群外周T和NK細胞淋巴瘤臨床、病理和分子生物學(xué)特點[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 代興斌;天花粉蛋白抗小鼠B細胞淋巴瘤的作用及機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 俞澤陽;重組人p53腺病毒注射液聯(lián)合放射治療對人淋巴瘤療效的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2008年

9 姜志超;腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAM）與淋巴瘤細胞相互作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

10 周新華;CD99+/mCD99L2-調(diào)控H/RS細胞與B淋巴瘤細胞轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)組學(xué)研究及相關(guān)通路分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙志偉;鼻腔NK/T細胞淋巴瘤的臨床分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 殷少寧;MicroRNA-21與NK/T細胞淋巴瘤生長調(diào)控及臨床特征的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王太昊;HBV感染與淋巴瘤p53、Bcl-2表達、病理類型及臨床特征的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李佳;淋巴結(jié)內(nèi)外同時受累的黏膜相關(guān)淋巴組織性淋巴瘤一例報道并文獻綜述[D];浙江大學(xué);2007年

5 吳益群;5例不同部位消化系原發(fā)淋巴瘤的診治分析[D];浙江大學(xué);2008年

6 陳喜林;淋巴瘤寡核苷酸芯片的制備及其在淋巴瘤細胞系基因表達譜研究中的應(yīng)用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

7 陳剛;彌漫性大B細胞淋巴瘤預(yù)后因素分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

8 杜麗;石墨烯-聚乙二醇-阿霉素復(fù)合物的制備及對淋巴瘤細胞的毒性研究[D];青島大學(xué);2015年

9 李蔚冰;彌漫大B細胞淋巴瘤臨床特點和預(yù)后分析[D];汕頭大學(xué);2010年

10 戴娜;~(18)F-FDG PET/CT顯像在淋巴瘤診療中的價值[D];蘇州大學(xué);2014年

，

本文編號：1750896