本文選題：miR-17-92 + miR-18a　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：MiRNA是內(nèi)源的非編碼小RNA,長約22-23bp,可以結(jié)合到基因的3‘UTR區(qū)域,形成沉默復(fù)合物,抑制mRNA的翻譯或者降解mRNA。近些年,眾多研究都揭示了miRNA在細(xì)胞增殖、凋亡、器官發(fā)育、腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移等眾多生命活動中起著重要作用。MiRNA-17-92是高度保守的多順反子miRNA基因簇,編碼6種miRNA,調(diào)控多種靶基因的表達(dá),而這些靶基因在生物的發(fā)育過程起著關(guān)鍵作用,對它的深入研究有著重要意義。SEMA5A可以與它的受體PLXNB3結(jié)合,參與調(diào)控軸突的導(dǎo)向,并與多種細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞遷移等生理功能相關(guān)。本研究根據(jù)生物信息學(xué)預(yù)測SEMA5A是miRNA-17-92的潛在靶基因,并通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灧治鲎C明與miRNA-17-92家族成員miR-18a的相互作用。運用實時定量熒光PCR和Western Blot證明在胃癌細(xì)胞MKN45中過表達(dá)miR18a會導(dǎo)致SEMA5A的mRNA和蛋白水平表達(dá)的下調(diào)。細(xì)胞增殖實驗和細(xì)胞遷移實驗發(fā)現(xiàn),過表達(dá)的miR18a可以抑制MKN45細(xì)胞的增殖和遷移,而同時過表達(dá)SEMA5A,可以在一定程度上恢復(fù)MKN45細(xì)胞的增殖和遷移能力；說明miR18a可能是通過調(diào)控SEMA5A,抑制MKN45細(xì)胞的增殖和遷移。但流式細(xì)胞檢測凋亡法檢測發(fā)現(xiàn),過表達(dá)miR18a對MKN45細(xì)胞的凋亡沒有影響。
[Abstract]:MiRNA is an endogenous non-coding small RNAs, about 22-23bp. it can bind to the 3'UTR region of the gene, form silencing complex, inhibit the translation of mRNA or degrade mRNA.In recent years, many studies have revealed that miRNA plays an important role in many life activities, such as cell proliferation, apoptosis, organ development, tumorigenesis and metastasis. MiRNA-17-92 is a highly conserved miRNA gene cluster.It encodes six kinds of miRNAs to regulate the expression of many target genes, and these target genes play a key role in the development of organisms. The further study of them is of great significance. SEMA5A can bind to its receptor PLXNB3 and play an important role in regulating the orientation of axons.And related to many kinds of cell proliferation, apoptosis, cell migration and other physiological functions.In this study, we predicted that SEMA5A is a potential target gene of miRNA-17-92 based on bioinformatics, and demonstrated the interaction with miR-18a, a member of miRNA-17-92 family, by the experimental analysis of double luciferase reporter gene.Using real-time quantitative PCR and Western Blot, it was proved that overexpression of miR18a in MKN45 of gastric cancer cells resulted in down-regulation of mRNA and protein levels of SEMA5A.Cell proliferation assay and cell migration assay showed that overexpression of miR18a could inhibit the proliferation and migration of MKN45 cells, while overexpression of SEMA5A could restore the proliferation and migration ability of MKN45 cells to a certain extent.The results suggest that miR18a may inhibit the proliferation and migration of MKN45 cells by regulating SEMA 5 A.However, flow cytometry showed that overexpression of miR18a had no effect on apoptosis of MKN45 cells.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1739767