發(fā)布時間：2018-04-12 13:05

  本文選題：GRASP + siRNA�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2017年12期

【摘要】：目的:探討高爾基體堆疊蛋白65(Golgi reassembly stacking protein 65,GRASP65)在體外對人胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響。方法:首先,通過Western blot和RT-qRCR鑒別低分化胃癌細(xì)胞MKN-45、中分化胃癌細(xì)胞SGC-7901、高分化胃癌細(xì)胞MKN-28和正常胃黏膜細(xì)胞GES-1中GRASP65蛋白和mRNA的表達(dá)量。然后,用si RNA干擾技術(shù)通過Lipofectamine 2000瞬時轉(zhuǎn)染下調(diào)和MKN-45細(xì)胞中GRASP65的表達(dá)量。用qRT-PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中GRASP65的蛋白和mRNA表達(dá)量以證實(shí)轉(zhuǎn)染成功。最后,用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗檢測轉(zhuǎn)染后的各組胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的改變。結(jié)果:Western blot和qRT-RCR結(jié)果顯示MKN-45細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞中GRASP65的蛋白和mRNA表達(dá)量明顯高于MKN-28細(xì)胞和GES-1細(xì)胞中GRASP65蛋白和mRNA表達(dá)量(P0.05),故選擇低分化胃癌細(xì)胞MKN-45作為實(shí)驗細(xì)胞株來下調(diào)GRASP65的表達(dá)量。qRT-PCR和Western blot結(jié)果證明轉(zhuǎn)染成功,轉(zhuǎn)染組GRASP65的mRNA和蛋白表達(dá)量與陰性對照組和空白對照組對比有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗均證明,下調(diào)MKN-45細(xì)胞的GRASP65的表達(dá)量可抑制胃癌細(xì)胞MKN-45體外增殖、遷移和侵襲能力,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:下調(diào)GRASP65的表達(dá)可明顯減弱胃癌細(xì)胞的體外增殖能力,同時促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡、體外侵襲和遷移。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of Golgi body stack protein 65(Golgi reassembly stacking protein 65 on proliferation, apoptosis, migration and invasion of human gastric cancer cells in vitro.Methods: firstly, Western blot and RT-qRCR were used to identify the expression of GRASP65 protein and mRNA in poorly differentiated gastric cancer cell line MKN-45, moderately differentiated gastric cancer cell line SGC-7901, highly differentiated gastric cancer cell line MKN-28 and normal gastric mucosal cell GES-1.Then, si RNA interference technique was used to down-regulate the transient transfection of Lipofectamine 2000 and the expression of GRASP65 in MKN-45 cells.QRT-PCR and Western blot were used to detect the expression of GRASP65 protein and mRNA in the transfected cells.Finally, the changes of proliferation, apoptosis, migration and invasion of gastric cancer cells after transfection were detected by CCK-8, flow cytometry and Transwell migration and invasion assay.Results the results of Western blot and qRT-RCR showed that the expression of GRASP65 protein and mRNA in MKN-45 cells and SGC-7901 cells was significantly higher than that in MKN-28 cells and GES-1 cells. Therefore, the poorly differentiated gastric cancer cell line MKN-45 was selected as the experimental cell line to down-regulate GRASP65.The results of QRT-PCR and Western blot showed that the transfection was successful.The expression of mRNA and protein in GRASP65 in transfection group was significantly higher than that in negative control group and blank control group. The results of flow cytometry showed that the down-regulation of GRASP65 expression in MKN-45 cells could inhibit the proliferation of gastric cancer cell line MKN-45 in vitro.Migration and invasion ability, and promote apoptosis.Conclusion: down-regulation of GRASP65 expression can significantly reduce the proliferation of gastric cancer cells in vitro, and promote the apoptosis, invasion and migration of gastric cancer cells in vitro.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【分類號】：R735.2

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本文編號：1739865