本文選題：p53 + QCR2　； 參考：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：目前為止,p53仍然是作用最為廣泛和最為重要的抑癌基因.有超過(guò)一半的惡性腫瘤(宮頸癌等)中發(fā)生有p53的功能失活或者蛋白量降低.作為轉(zhuǎn)錄因子,p53能夠調(diào)控很多基因的表達(dá)水平,如p21,Bax等,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞在多方面的生物學(xué)行為,如增殖,轉(zhuǎn)移,代謝等。深入挖掘調(diào)控p53的機(jī)制和重建p53蛋白的功能活性,仍然是目前全世界最為關(guān)注的課題之一。p53可以通過(guò)調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)來(lái)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體數(shù)量與代謝活性,但是目前仍然沒(méi)有足夠的證據(jù)能夠證實(shí)線(xiàn)粒體蛋白能夠影響p53的狀態(tài)。而在我們前期研究中,發(fā)現(xiàn)線(xiàn)粒體蛋白UQCRC2(QCR2)參與調(diào)控了腫瘤細(xì)胞的TSA化療敏感性。QCR2是線(xiàn)粒體氧化磷酸化復(fù)合體三的重要組成部分�，F(xiàn)在尚未有足夠的證據(jù)證實(shí)QCR2的表達(dá)水平與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。本文主要從我們發(fā)現(xiàn)的QCR2對(duì)p53蛋白穩(wěn)定性的調(diào)控作用這一方向入手,探索線(xiàn)粒體蛋白QCR2在腫瘤中所扮演的角色。方法：免疫組織化學(xué)證實(shí)QCR2在多種腫瘤組織中高表達(dá),CCK8細(xì)胞活力檢測(cè),EDU細(xì)胞增殖檢測(cè),細(xì)胞克隆形成探索QCR2對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)周期檢測(cè)QCR2對(duì)周期的影響。Western Blot證實(shí)QCR2調(diào)控p53蛋白水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法證實(shí)QCR2水平對(duì)p53的mRNA水平不具有調(diào)控作用,蛋白免疫共沉淀方法研究p53的泛素化水平和尋找QCR2的相互作用蛋白以探索QCR2調(diào)控p53蛋白水平的機(jī)制,質(zhì)譜鑒定QCR2相互作用蛋白。Nod-Scid小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)研究QCR2及PHB對(duì)腫瘤細(xì)胞成瘤能力的影響。結(jié)果：QCR2在肺癌組織、肝癌組織、乳腺癌組織、甲狀腺癌組織、宮頸癌組織、食管癌組織、前列腺癌組織中的表達(dá)量都較相對(duì)應(yīng)的正常組織高。下調(diào)QCR2表達(dá)后腫瘤細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯,腫瘤細(xì)胞增殖變慢。而干擾QCR2后p53及其下游p21的蛋白量呈現(xiàn)明顯累積。后期實(shí)驗(yàn)證實(shí)QCR2能夠促進(jìn)p53泛素化,進(jìn)而負(fù)向調(diào)控p53蛋白水平。p21作為p53的下游,也隨之變化。經(jīng)證實(shí),QCR2是通過(guò)調(diào)控PHB入核及PHB與p53的相互作用來(lái)調(diào)控p53的蛋白水平的。皮下成瘤實(shí)驗(yàn)證明QCR2能夠促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)而PHB能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)。而大量宮頸癌標(biāo)本的免疫組化染色證實(shí)QCR2的表達(dá)量與p21的表達(dá)量成負(fù)相關(guān),而PHB的表達(dá)量與p21的表達(dá)量成正相關(guān)。結(jié)論：1.作為線(xiàn)粒體復(fù)合體三的重要組成蛋白,QCR2在多種腫瘤組織中表達(dá)量增高。2.QCR2能夠促進(jìn)p53泛素化,從而負(fù)向調(diào)控p53的蛋白水平。3.QCR2通過(guò)調(diào)控其相互作用蛋白PHB與p53的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)p53的調(diào)控的。4.QCR2能夠促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng),而PHB能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)。
[Abstract]:Objective: up to now, p53 is still the most widely used and most important tumor suppressor gene.More than half of malignant tumors (cervical cancer, etc.) have inactivation of p53 or reduced protein levels.As a transcription factor, p53 can regulate the expression level of many genes, such as p21, Bax and so on, and then regulate the biological behavior of cells in many aspects, such as proliferation, transfer, metabolism and so on.Digging into the mechanism of p53 regulation and reconstructing the functional activity of p53 protein is still one of the most concerned topics in the world. P53 can regulate the number and metabolic activity of mitochondria by regulating the expression of related genes.However, there is still insufficient evidence that mitochondrial proteins can affect the status of p53.In our previous study, we found that mitochondrial protein UQCRC2QCR2 is involved in regulating the chemosensitivity of tumor cells to TSA. QCR2 is an important component of mitochondrial oxidative phosphorylation complex III.There is not enough evidence to confirm the relationship between QCR2 expression and tumorigenesis and progression.In this paper, we explored the role of mitochondrial protein QCR2 in tumor from the perspective of the regulation of QCR2 on the stability of p53 protein.Methods: the high expression of QCR2 in various tumor tissues was confirmed by immunohistochemistry. The activity of CCK8 cells was detected and the proliferation of EDU cells was detected. The effect of QCR2 on the proliferation of tumor cells was explored.The effect of QCR2 on the cell cycle was detected by flow cytometry. Western Blot confirmed that QCR2 regulated p53 protein level, and real-time fluorescence quantitative PCR assay confirmed that QCR2 level had no effect on the mRNA level of p53.Protein immunoprecipitation method was used to study the level of p53 ubiquification and to search for the interacting protein of QCR2 to explore the mechanism of QCR2 regulating p53 protein level.QCR2 interaction protein. Nod-Scid mice were identified by mass spectrometry to study the effect of QCR2 and PHB on tumorigenesis of tumor cells.Results the expression of QCR2 in lung cancer, liver cancer, breast cancer, thyroid cancer, cervical cancer, esophageal carcinoma and prostate cancer was higher than that in normal tissues.After down-regulation of QCR2 expression, tumor cells were arrested in G0/G1 phase, and the proliferation of tumor cells slowed down.The protein content of p53 and its downstream p21 increased significantly after interfering with QCR2.Later experiments confirmed that QCR2 could promote p53 ubiquification and then negatively regulate p53 protein level. P21 was the downstream of p53.It has been proved that QCR2 regulates the protein level of p53 by regulating the nucleation of PHB and the interaction between PHB and p53.Subcutaneous tumorigenesis has shown that QCR2 can promote tumor growth and PHB can inhibit tumor growth.Immunohistochemical staining showed that the expression of QCR2 was negatively correlated with the expression of p21, while the expression of PHB was positively correlated with the expression of p21.Conclusion 1.QCR2, an important component of mitochondrial complex III, increased the expression of QCR2 in various tumor tissues. 2. QCR2 could promote p53 ubiquitin.Therefore, the negative regulation of p53 protein level. 3. QCR2 regulates the interaction between p53 and PHB to achieve the regulation of p53. QCR2 can promote tumor growth, while PHB can inhibit tumor growth.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R730.2

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本文編號(hào)：1739758