本文選題：肝細(xì)胞肝癌　切入點(diǎn)：八聚體轉(zhuǎn)錄因子4　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景：肝癌全球發(fā)病率逐年上升,但相對(duì)預(yù)后不良,盡管基礎(chǔ)和臨床研究取得長(zhǎng)足發(fā)展,但總體仍缺乏有效手段來(lái)提高肝癌患者的預(yù)后。肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的最重要因素,所以研究肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)提高肝癌預(yù)后有極其重要的意義。Oct-4是一種核轉(zhuǎn)錄因子,常表達(dá)與胚胎干細(xì)胞,其異常高表達(dá)見(jiàn)于多種腫瘤。Oct-4異常高表達(dá)可增加干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒阅[瘤細(xì)胞的潛能。上皮細(xì)胞到間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化(EMT)在各種癌癥的進(jìn)展,包括肝細(xì)胞癌進(jìn)展中有促進(jìn)作用。但Oct-4表達(dá)與HCC患者預(yù)后是否相關(guān)以及與HCC中EMT過(guò)程是否相關(guān)仍是未知的。目的：研究肝癌組織及匹配的癌旁組織中Oct-4的表達(dá)；探討Oct-4的表達(dá)和肝癌患者的預(yù)后的相關(guān)性。體外實(shí)驗(yàn)探討Oct-4基因?qū)Ω伟┘?xì)胞惡性生物學(xué)行為的作用。方法：1、定量RT-PCR和免疫印跡檢測(cè)44對(duì)肝癌及其相對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本中Oct-4 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,分析Oct-4表達(dá)與肝癌預(yù)后的相關(guān)性。2、定量RT-PCR和免疫印跡檢測(cè)4個(gè)肝癌細(xì)胞株SMMC-7721、Bel-7404、 Huh-7、HepG2和正常肝細(xì)株HL-7702中Oct-4的表達(dá),挑選高表達(dá)Oct-4的細(xì)胞株。3、采用Oct-4特異的siRNA,轉(zhuǎn)染高表達(dá)Oct-4的肝癌細(xì)胞株,構(gòu)建Oct-4表達(dá)下調(diào)的穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞株,利用免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Oct-4蛋白及EMT過(guò)程中蛋白標(biāo)志物的表達(dá)情況；利用CCK8檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力的變化；利用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化。結(jié)果：1、與相對(duì)應(yīng)的癌旁組織相比,Oct-4在肝癌組織中呈高表達(dá)。在44例肝癌及44例相匹配的癌旁組織中,有35例肝癌組織Oct-4呈陽(yáng)性表達(dá)(35/44,79.55%),相對(duì)應(yīng)的癌旁組織中僅有21例呈低濃度陽(yáng)性表達(dá)(21/44,47.72%)。經(jīng)卡方檢驗(yàn),癌組織中Oct-4的表達(dá)顯著高于癌旁組織(P0.01)。2、Oct-4 mRNA的表達(dá)與肝癌大小、血管侵犯、TNM分期相關(guān)(P0.05)。單因素分析發(fā)現(xiàn)Oct-4 mRNA陽(yáng)性患者具有較低的總生存率及無(wú)瘤生存率。多因素分析發(fā)現(xiàn)Oct-4 mRNA的表達(dá)并非肝癌患者術(shù)后總生存率及無(wú)瘤生存率的獨(dú)立影響因素。3、4個(gè)肝癌細(xì)胞株SMMC-7721、Bel-7404、Huh-7、HepG2和正常肝細(xì)株HL-7702中Oct-4 mRNA及蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示：肝癌細(xì)胞SMMC-7721和HepG2中Oct-4呈高表達(dá),正常肝細(xì)株HL-7702中Oct-4呈低表達(dá)。4、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明下調(diào)Oct-4的表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞株SMMC-7721和HepG2的增殖。Transwell實(shí)驗(yàn)表明Oct-4下調(diào)能明顯抑制肝癌細(xì)胞的遷徙、侵襲能力。免疫印跡實(shí)驗(yàn)證明穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞株Oct-4的表達(dá)下降,而EMT相關(guān)表達(dá)物E-鈣粘蛋白上調(diào)、波形蛋白和N-鈣粘蛋白表達(dá)下調(diào)。結(jié)論：1、肝癌組織和人肝癌細(xì)胞系中在mRNA水平和蛋白水平高表達(dá)Oct-4基因。其高表達(dá)水平與較大的腫瘤體積、較多的血管侵犯和較高的TNM分期正相關(guān),提示Oct-4在腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移中可能扮演重要的角色2、單因素分析Oct-4基因與肝癌患者術(shù)后預(yù)后相關(guān),陽(yáng)性患者具有較低的總生存率及無(wú)瘤生存率。多因素分析提示Oct-4 mRNA的表達(dá)不是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良因素。肝細(xì)胞癌中Oct-4 mRNA表達(dá)可作為術(shù)后患者預(yù)后預(yù)測(cè)的參考指標(biāo)。3、本研究通過(guò)建立下調(diào)Oct-4基因表達(dá)的2株穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞系,從體外水平,證明了Oct-4基因在肝癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲惡性生物學(xué)行為中的起著促進(jìn)的作用。4、Oct-4基因表達(dá)與EMT標(biāo)志基因的表達(dá)正相關(guān),為深入研究Oct-4基因在肝細(xì)胞癌中作用的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ),有利于尋找并阻斷肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的特異性靶點(diǎn)。
[Abstract]:BACKGROUND : The global incidence of liver cancer has been increasing year by year , but relatively poor prognosis . Although the basic and clinical studies have made long term development , there is still a lack of effective means to improve the prognosis of patients with liver cancer . Oct - 4 is a kind of nuclear transcription factor , often expressed as embryonic stem cells . The abnormal high expression of Oct - 4 is the most important factor affecting the prognosis of HCC .
Methods : 1 銆，

本文編號(hào)：1730528