本文選題：肝細胞肝癌　切入點：八聚體轉(zhuǎn)錄因子4　出處：《南京醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：背景：肝癌全球發(fā)病率逐年上升,但相對預后不良,盡管基礎和臨床研究取得長足發(fā)展,但總體仍缺乏有效手段來提高肝癌患者的預后。肝癌患者術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移是影響預后的最重要因素,所以研究肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移機制對提高肝癌預后有極其重要的意義。Oct-4是一種核轉(zhuǎn)錄因子,常表達與胚胎干細胞,其異常高表達見于多種腫瘤。Oct-4異常高表達可增加干細胞轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒阅[瘤細胞的潛能。上皮細胞到間質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)化(EMT)在各種癌癥的進展,包括肝細胞癌進展中有促進作用。但Oct-4表達與HCC患者預后是否相關(guān)以及與HCC中EMT過程是否相關(guān)仍是未知的。目的：研究肝癌組織及匹配的癌旁組織中Oct-4的表達；探討Oct-4的表達和肝癌患者的預后的相關(guān)性。體外實驗探討Oct-4基因?qū)Ω伟┘毎麗盒陨飳W行為的作用。方法：1、定量RT-PCR和免疫印跡檢測44對肝癌及其相對應的癌旁組織標本中Oct-4 mRNA及蛋白的表達水平,分析Oct-4表達與肝癌預后的相關(guān)性。2、定量RT-PCR和免疫印跡檢測4個肝癌細胞株SMMC-7721、Bel-7404、 Huh-7、HepG2和正常肝細株HL-7702中Oct-4的表達,挑選高表達Oct-4的細胞株。3、采用Oct-4特異的siRNA,轉(zhuǎn)染高表達Oct-4的肝癌細胞株,構(gòu)建Oct-4表達下調(diào)的穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細胞株,利用免疫印跡實驗檢測轉(zhuǎn)染后Oct-4蛋白及EMT過程中蛋白標志物的表達情況；利用CCK8檢測轉(zhuǎn)染后細胞增殖能力的變化；利用Transwell實驗檢測轉(zhuǎn)染后細胞遷移、侵襲能力的變化。結(jié)果：1、與相對應的癌旁組織相比,Oct-4在肝癌組織中呈高表達。在44例肝癌及44例相匹配的癌旁組織中,有35例肝癌組織Oct-4呈陽性表達(35/44,79.55%),相對應的癌旁組織中僅有21例呈低濃度陽性表達(21/44,47.72%)。經(jīng)卡方檢驗,癌組織中Oct-4的表達顯著高于癌旁組織(P0.01)。2、Oct-4 mRNA的表達與肝癌大小、血管侵犯、TNM分期相關(guān)(P0.05)。單因素分析發(fā)現(xiàn)Oct-4 mRNA陽性患者具有較低的總生存率及無瘤生存率。多因素分析發(fā)現(xiàn)Oct-4 mRNA的表達并非肝癌患者術(shù)后總生存率及無瘤生存率的獨立影響因素。3、4個肝癌細胞株SMMC-7721、Bel-7404、Huh-7、HepG2和正常肝細株HL-7702中Oct-4 mRNA及蛋白的表達情況,結(jié)果顯示：肝癌細胞SMMC-7721和HepG2中Oct-4呈高表達,正常肝細株HL-7702中Oct-4呈低表達。4、細胞增殖實驗表明下調(diào)Oct-4的表達能夠抑制肝癌細胞株SMMC-7721和HepG2的增殖。Transwell實驗表明Oct-4下調(diào)能明顯抑制肝癌細胞的遷徙、侵襲能力。免疫印跡實驗證明穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細胞株Oct-4的表達下降,而EMT相關(guān)表達物E-鈣粘蛋白上調(diào)、波形蛋白和N-鈣粘蛋白表達下調(diào)。結(jié)論：1、肝癌組織和人肝癌細胞系中在mRNA水平和蛋白水平高表達Oct-4基因。其高表達水平與較大的腫瘤體積、較多的血管侵犯和較高的TNM分期正相關(guān),提示Oct-4在腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移中可能扮演重要的角色2、單因素分析Oct-4基因與肝癌患者術(shù)后預后相關(guān),陽性患者具有較低的總生存率及無瘤生存率。多因素分析提示Oct-4 mRNA的表達不是一個獨立的預后不良因素。肝細胞癌中Oct-4 mRNA表達可作為術(shù)后患者預后預測的參考指標。3、本研究通過建立下調(diào)Oct-4基因表達的2株穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細胞系,從體外水平,證明了Oct-4基因在肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲惡性生物學行為中的起著促進的作用。4、Oct-4基因表達與EMT標志基因的表達正相關(guān),為深入研究Oct-4基因在肝細胞癌中作用的分子機制奠定基礎,有利于尋找并阻斷肝細胞癌轉(zhuǎn)移及復發(fā)的特異性靶點。
[Abstract]:BACKGROUND : The global incidence of liver cancer has been increasing year by year , but relatively poor prognosis . Although the basic and clinical studies have made long term development , there is still a lack of effective means to improve the prognosis of patients with liver cancer . Oct - 4 is a kind of nuclear transcription factor , often expressed as embryonic stem cells . The abnormal high expression of Oct - 4 is the most important factor affecting the prognosis of HCC .
Methods : 1 銆，

本文編號：1730528