本文選題：卵巢癌　切入點(diǎn)：腫瘤轉(zhuǎn)移　出處：《吉林大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：卵巢癌(ovarian cancer,OC)是婦科系統(tǒng)最常見惡性腫瘤之一,死亡率高居?jì)D科腫瘤榜首,卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer,EOC)占卵巢癌的50%-70%,是卵巢癌最主要的病理類型,其中以卵巢漿液性囊腺癌最為常見。早期缺乏特異性癥狀、晚期復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高是導(dǎo)致卵巢癌死亡率居高不下的主要原因。因此提高早期診斷率、預(yù)防晚期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是卵巢癌面臨的主要困難。現(xiàn)有的臨床手段對于早期卵巢癌診斷并不明確,CA125、HE4等腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測有助于提高早期診斷率,HK6、HK10等新興腫瘤標(biāo)志物也對早期診斷卵巢癌有所助益,但并沒有一種方法能夠特異性地診斷早期卵巢癌。卵巢癌的傳統(tǒng)治療多采用手術(shù)+化療的方式,近些年分子治療、基因治療、免疫治療等新興技術(shù)也逐漸進(jìn)入臨床并取得了一定成效,尤其是免疫治療越來越受到人們的關(guān)注。因此尋找一個(gè)有效的診斷和治療的靶點(diǎn)對于提高卵巢癌患者生存期、改善生存質(zhì)量有著重要的意義。卵巢癌的轉(zhuǎn)移形式主要為直接蔓延、腹腔種植和淋巴轉(zhuǎn)移,腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶脫離進(jìn)入腹腔,粘附到腹腔臟器表面,侵犯包膜進(jìn)入臟器后大量增殖形成新的癌灶,整個(gè)過程是在癌-抑癌基因的調(diào)控、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)、抗失巢凋亡、免疫逃逸等多重機(jī)制作用下共同完成。因?yàn)槟[瘤細(xì)胞的無限增殖、多向分化等生物學(xué)行為與胚胎干細(xì)胞相似,因此人們推測腫瘤其實(shí)是一種“返祖現(xiàn)象”。由此可見在胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移中可能存在共同的調(diào)控機(jī)制。某些調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的因子可能在腫瘤中同樣發(fā)揮著重要作用。FOXC2(forkhead box C2,叉頭框C2)是一種胚胎性轉(zhuǎn)錄因子,隸屬于FOX家族,首次于淋巴水腫-重睫綜合征(Lymphoedema-Distichiasis Syndrome,LD)中被發(fā)現(xiàn)�，F(xiàn)有研究表明,在胚胎發(fā)育時(shí)期FOXC2對于淋巴管形成和正常發(fā)育有著重要意義,敲除Foxc2基因的小鼠胚胎淋巴管缺乏正常的形態(tài)和功能。而多種研究表明FOXC2在大腸癌、乳腺癌、宮頸癌等惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中同樣起著重要作用。有學(xué)者認(rèn)為FOXC2能促進(jìn)大腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,還有實(shí)驗(yàn)證明FOXC2能夠通過EMT促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力。FOXC2和婦科腫瘤的發(fā)展也密切相關(guān)。有研究表明FOXC2能通過促進(jìn)腫瘤血管生成來促進(jìn)宮頸癌的轉(zhuǎn)移,還有學(xué)者認(rèn)為FOXC2可以通過調(diào)節(jié)淋巴管新生來促進(jìn)宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的遷徙和轉(zhuǎn)移能力。然而對于FOXC2在卵巢癌中所起的作用,尚無明確的結(jié)論。本實(shí)驗(yàn)主要針對卵巢上皮性癌(EOC)進(jìn)行研究,通過免疫組化、RNAi等技術(shù)探究FOXC2在卵巢癌中的作用,為構(gòu)建小鼠卵巢癌同種移植模型奠定基礎(chǔ),為卵巢癌的早期診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。目的:觀察FOXC2在人卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)以及Foxc2基因?qū)π∈舐殉蚕侔┘?xì)胞ID8生物學(xué)行為的影響,以此來探討FOXC2對卵巢癌的增殖、侵襲能力的作用及其機(jī)制,為卵巢癌早期診斷和治療尋找新的靶點(diǎn)。方法:1)用免疫組化方法檢測來自吉大一院的13例卵巢標(biāo)本中FOXC2的表達(dá),觀察其在人卵巢癌、交界性腫瘤和正常卵巢組織中的表達(dá)情況2)設(shè)計(jì)針對小鼠Foxc2靶基因序列的sh RNA(短發(fā)夾RNA)序列,構(gòu)建重組質(zhì)粒,進(jìn)行慢病毒包裝,并用倍比稀釋法測定病毒滴度。3)用含有Foxc2-sh RNA表達(dá)載體的慢病毒感染小鼠卵巢腺癌細(xì)胞ID8,realtime PCR和Western Blot分析sh RNA對Foxc2m RNA和蛋白表達(dá)的抑制作用。4)CCK8法觀察沉默F(xiàn)oxc2基因前后小鼠卵巢腺癌細(xì)胞ID8增殖能力的變化。5)Transwell實(shí)驗(yàn)觀察沉默F(xiàn)oxc2基因前后小鼠卵巢腺癌細(xì)胞ID8侵襲能力的變化。結(jié)果1)FOXC2在人卵巢上皮癌有陽性表達(dá),主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞核;FOXC2在卵巢漿液性交界性腫瘤中表達(dá)于內(nèi)分泌腺上皮的腺管壁;FOXC2在卵巢癌和交界性腫瘤的間質(zhì)部血管也有陽性表達(dá)。2)重組質(zhì)粒的DNA測序結(jié)果顯示與預(yù)期DNA序列吻合,重組成功。滴度測定表明Foxc2-sh RNA慢病毒載體構(gòu)建成功。3)Foxc2-sh RNA能抑制小鼠卵巢腺癌細(xì)胞ID8中Foxc2m RNA的表達(dá),抑制率分別為71.36%和56.3%(P0.05);FOXC2-sh RNA能抑制ID8中Foxc2蛋白的表達(dá),其中Foxc2-sh RNA1的抑制作用最明顯。4)沉默F(xiàn)oxc2基因48h后小鼠卵巢腺癌細(xì)胞ID8的增殖速度開始減慢,72h、96h后增殖速度明顯減慢(P0.05)。5)沉默F(xiàn)oxc2基因后細(xì)胞侵襲能力較對照組降低了72.2%(P0.05)。結(jié)論:1)FOXC2在卵巢癌和交界性腫瘤組織和間質(zhì)血管中均有表達(dá),表明FOXC2參與了卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的過程,其機(jī)制可能與誘導(dǎo)血管生成有關(guān)。2)成功構(gòu)建了Foxc2-sh RNA的慢病毒載體。3)沉默F(xiàn)oxc2能夠抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力。4)FOXC2可作為卵巢癌臨床診斷和治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：1724757