本文選題：FTL　切入點：Snail　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:乳腺癌在全世界女性癌癥發(fā)病率居首位,并且易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā),所以也是死亡率很高的疾病。近年來許多研究表明,鐵代謝相關(guān)基因和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系,可作為癌癥預(yù)后指標(biāo)。鐵代謝基因鐵儲蛋白的亞基FTL,雖然在許多癌癥中高表達(dá),包括乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌和胰腺癌等,但其在乳腺癌中的作用研究較少,對腫瘤影響的機(jī)制不是很清楚。Snail主要又是介導(dǎo)乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要蛋白,而且近些年的研究發(fā)現(xiàn)Snail對腫瘤的代謝調(diào)控也很重要。我們之前研究發(fā)現(xiàn),Snail在乳腺正常細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞MCF-7中都能上調(diào)FTL的表達(dá),說明Snail可能通過介導(dǎo)FTL的表達(dá)對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生作用。因此,我們探究了FTL和Snail在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,及FTL對腫瘤細(xì)胞的遷移、生長的促進(jìn)作用。方法:為研究Snail和FTL在乳腺癌發(fā)生發(fā)展的作用,snail是如何調(diào)控FTL的表達(dá),我們首先在多種腫瘤細(xì)胞中分別構(gòu)建了Snail過表達(dá)及敲低的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,并用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測Snail對FTL表達(dá)的影響。為了進(jìn)一步驗證Snail對FTL的調(diào)控作用,我們構(gòu)建了FTL啟動子的熒光素酶報告基因質(zhì)粒。在HEK293T細(xì)胞中,共轉(zhuǎn)染Snail與熒光素酶報告基因質(zhì)粒,并檢測Snail對FTL啟動子活性的影響。下一步我們進(jìn)行了FTL的功能研究。我們首先在正常乳腺細(xì)胞系MCF-10A、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231中構(gòu)建了FTL過表達(dá)和敲低的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,并在過表達(dá)snail的MCF-10A、MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中構(gòu)建了FTL過表達(dá)和敲低的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。CCK8、Transwell和流式細(xì)胞檢測分別檢測細(xì)胞的生長,遷移能力和細(xì)胞周期變化。結(jié)果:在正常乳腺細(xì)胞系MCF-10A、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞中,snail可以促進(jìn)FTL的表達(dá),敲低snail能減少FTL的表達(dá),但在人乳腺癌細(xì)胞MDAMB-231中FTL的表達(dá)沒有發(fā)現(xiàn)受snail的影響。熒光素酶基因?qū)嶒烇@示,snail可能并不直接作為轉(zhuǎn)錄激活因子調(diào)控FTL的表達(dá),而是通過其他方式調(diào)控FTL的表達(dá)。在過表達(dá)FTL的細(xì)胞中,細(xì)胞生長和遷移能力增強(qiáng);相應(yīng)的,在敲低FTL時,細(xì)胞的生長和遷移能力下降,細(xì)胞周期被阻滯在G2/M期。結(jié)論:1.我們的研究表明snail可促進(jìn)FTL的表達(dá),但不是通過其轉(zhuǎn)錄調(diào)控直接結(jié)合于FTL的啟動子,可能通過其他調(diào)控途徑間接促進(jìn)FTL表達(dá)。2.FTL可促進(jìn)乳腺癌的生長和遷移。
[Abstract]:Objective: breast cancer rate ranks first in the world of female cancer incidence, and easy to recurrence and metastasis, so the disease is very high mortality rate. Recently many studies have shown that there is a close relationship between the occurrence and development of iron metabolism related genes and cancer, cancer can be used as a prognostic indicator. Subunit FTL gene of iron metabolism of iron storage protein, though in many cancers, high expression, including breast cancer, colorectal cancer, liver cancer and pancreatic cancer, but its role in breast cancer research on the mechanism of tumor effect is not very clear.Snail is an important protein mediated breast cancer metastasis, and recent studies revealed that the metabolic regulation of tumor Snail it is very important. Our previous study found that Snail can increase the expression of FTL in normal breast cells and breast cancer cells MCF-7, Snail expression may be mediated through the production of FTL and development of breast cancer The role of students. Therefore, we study the FTL and Snail in the progression of breast cancer, and FTL on the migration of tumor cells and growth promoting effects. Methods: To study the Snail and FTL in the occurrence and development of breast cancer, Snail expression is how to control the FTL, we first in a variety of tumor cells respectively. Construction of Snail overexpression and knockdown of stabletransfection cell lines, and affect the detection of Snail real-time fluorescence quantitative PCR technology on the expression of FTL. In order to further verify the regulation effect of Snail on FTL, we constructed the luciferase reporter plasmid FTL promoter. In HEK293T cells, CO transfected with the luciferase reporter gene Snail effect of plasmid Snail and to detect the activity of the FTL promoter. Next we study the functions of FTL. We first MCF-10A in normal breast cell lines, MCF-7 and MDA-MB-231 in human breast cancer cells to construct FTL Expression and knockdown of stabletransfection cell lines, and the expression of snail in MCF-10A, MCF-7 and MDA-MB-231 cells to construct FTL overexpression and knockdown of stabletransfection cell lines.CCK8, Transwell and flow cytometry were used to detect cell growth, migration and cell cycle changes. Results: in normal breast cell line MCF-10A, human breast cancer MCF-7 cells, snail can promote the expression of FTL, knockdown of snail can reduce the expression of FTL, but the expression in human breast cancer cell MDAMB-231 FTL found no influence of snail. Luciferase gene display experiment, snail can not directly as the expression of activating transcription factor regulation of FTL, but through the expression regulation of FTL in other ways. Over expression of FTL cells, increase the growth and migration of cells; accordingly, knocking at low FTL, decreased growth and cell migration, cell cycle arrest in G2/M phase. Conclusion: 1., our research shows that snail can promote the expression of FTL, but not directly through its transcriptional regulation, and directly bind to the promoter of FTL. It may indirectly promote FTL expression by other regulatory pathways, and.2.FTL can promote the growth and migration of breast cancer.

【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1701770